本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的藥動藥效及PK-PD結(jié)合模型研究

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【摘要】：第一部分白藜蘆醇在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究 目的：探索白藜蘆醇（resveratrol, Res）單次及多次給藥后，C57BL/6荷黑色素瘤小鼠體內(nèi)，Res及其主要代謝產(chǎn)物葡萄糖醛酸結(jié)合物(resveratrol-glucuronide,Res-G）和硫酸結(jié)合物(resveratrol-sulfate, Res-S)的藥代動力學(xué)特征，并建立相應(yīng)的PK模型，為PK-PD結(jié)合模型提供合適的藥代動力學(xué)驅(qū)動因素PK input。方法：1)以水楊酸為內(nèi)標(biāo)，建立可同時測定血漿中Res及主要代謝物Res-G和Res-S的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）檢測方法。2)建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，單次灌胃給予低、高劑量Res（50、100mg/kg）后，分別于給藥前及給藥后0.083、0.167、0.333、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0h經(jīng)眼眶內(nèi)呲靜脈叢采血，用上述建立的HPLC-MS/MS方法檢測Res及Res-G，Res-S的血藥濃度，WinNonlin軟件進(jìn)行Res及Res-G，Res-S的藥動學(xué)（pharmacokinetics, PK）模型模擬擬合，并計算藥動學(xué)參數(shù)；3) C57BL/6荷黑色素瘤小鼠灌胃給予低、高劑量Res（50、100mg/kg/d），連續(xù)給藥21d，分別在第3,6,9,12,15,18,21d采樣，于當(dāng)天給藥后0.167、1.0、2.0、4.0h經(jīng)眼眶內(nèi)呲靜脈叢采血，檢測血藥濃度。參考單次給藥藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)合多次給藥有限采樣的實測血藥濃度，采用WinNonlin軟件建立Res長期給藥過程中PK模型，模擬擬合Res及Res-G，Res-S的藥時曲線，并計算多次給藥藥代動力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果：結(jié)果：黑色素瘤小鼠單次灌胃給予Res后，藥物在體內(nèi)表現(xiàn)出較快的吸收和消除，代謝物Res-G的血藥濃度及明顯高于Res，Res-S的血藥濃度與Res接近；多次給藥過程中，AUC增加，，清除率降低，Res及Res-G、Res-S均表現(xiàn)出一定程度的蓄積。 結(jié)論： Res在體內(nèi)吸收消除較快，并快速轉(zhuǎn)化為代謝物，Res-G、Res-S是其循環(huán)過程中的主要存在形式；多次給藥過程中，黑色素瘤病情進(jìn)展可影響Res原型及代謝物使之蓄積。 第二部分白藜蘆醇在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的藥效動力學(xué)研究 目的：研究在黑色素瘤發(fā)生發(fā)展過程中及Res給藥治療過程中，腫瘤體積，Tyrosinase，COX-2, Ape/Ref-1, VEGFA及Survivin的動態(tài)變化規(guī)律，為PK-PD結(jié)合模型提供合適的藥效替代指標(biāo)PD endpoint。 方法：1）建立C57BL/6小鼠皮下移植B16F10黑色素瘤模型，分為3組：模型對照組（0.5%CMC-Na），低、高劑量Res組（50、100mg/kg/d），連續(xù)灌胃21d，監(jiān)測腫瘤體積；分別于開始給藥后第3，6，9，12，15，18，21d分批處死動物，剖取腫瘤組織；2）提取mRNA，普通PCR擴(kuò)增后回收，構(gòu)建重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用絕對實時熒光定量RT-PCR法檢測Tyrosinase，COX-2,Ape/Ref-1,VEGFA, Survivin的mRNA表達(dá)；制備組織勻漿，BCA法測總蛋白濃度，采用相應(yīng)的ELISA試劑盒檢測上述各指標(biāo)的蛋白表達(dá)；制備酶液，通過檢測催化特異性底物的反應(yīng)，計算Tyrosinase和COX-2的酶活性；提取細(xì)胞核蛋白，采用DNA-binding Elisa法檢測Ape/Ref-1的氧化還原活性； 結(jié)果：隨著時間推移，荷瘤小鼠腫瘤體積逐漸增大，Tyrosinase, COX-2及Survivin的活性或表達(dá)逐漸升高，Ape/Ref-1先升后降, VEGFA初期無明顯變化,在第9-12天開始上升；Res能夠降低腫瘤生長速度，下調(diào)COX-2,Ape/Ref-1, VEGFA, Survivin的mRNA和蛋白表達(dá)，同時抑制Tyrosinase，COX-2和Ape/Ref-1的活性，但對Tyrosinase的mRNA和蛋白表達(dá)無明顯影響，上述作用呈動態(tài)變化。 結(jié)論：Tyrosinase，COX-2, Ape/Ref-1, VEGFA及Survivin在黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展過程中呈動態(tài)變化，Res可抑制小鼠黑色素瘤生長，并從不同水平影響上述各指標(biāo) 第三部分白藜蘆醇在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的PK-PD結(jié)合模型研究 目的：建立PK-PD結(jié)合模型，量化Res的藥代動力學(xué)與藥效動力學(xué)之間的關(guān)聯(lián)，闡明Res的藥動學(xué)行為與藥理學(xué)效應(yīng)之間的“矛盾”，有助于闡明Res的作用機(jī)制，明確作用靶標(biāo)。 方法：1）分別將Res及代謝物的血藥濃度C和藥時曲線下面積AUC，與不同的藥效指標(biāo)進(jìn)行模型擬合，明確藥代動力學(xué)過程的驅(qū)動因素PK input。2）根據(jù)上述確定的PK input，分別采用不同的藥效動力學(xué)模型和初始參數(shù)，建立可定量描述PK input與腫瘤體積之間關(guān)系的PK-PD結(jié)合模型。3）將PK input的動態(tài)變化，分別在活性、mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平，與Tyrosinase，COX-2,APE/Ref-1, VEGFA,Survivin等藥理效應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行擬合，選擇相關(guān)性較好的效應(yīng)指標(biāo)作為PD endpoint。4）選擇合適的藥代動力學(xué)模型和藥效動力學(xué)模型,建立聯(lián)接PK input和PDendpoint的PK-PD結(jié)合模型，得到模型動力學(xué)參數(shù)，明確Res的藥代動力學(xué)與藥效動力學(xué)之間的定量關(guān)系 結(jié)果：1）相比血藥濃度C，Res及代謝物的總藥時曲線下面積AUCRes-Total的能夠較好地與各藥效指標(biāo)擬合，可作為PK input獲得較滿意的PK-PD模型。2）指數(shù)方程結(jié)合Sigmoid Emax模型可較好地量化擬合腫瘤體積與AUCRes-Total的關(guān)系。3）Simple Emax可較好地擬合COX-2酶活性、mRNA及蛋白表達(dá)與AUCRes-Total的關(guān)系。4）Sigmoid Emax模型可較好地量化擬合Tyrosinase的活性, VEGFA、Survivin的mRNA及蛋白表達(dá)與AUCRes-Total的關(guān)系。 結(jié)論：1）主要代謝物Res-G，Res-S在Res的體內(nèi)活性中起到重要作用，這可能與代謝物在腫瘤組織中重新解離成原型發(fā)揮作用或代謝物本身的活性有關(guān)。2）以COX-2、Tyrosinase的酶活性, COX-2、VEGFA、Survivin的mRNA及蛋白表達(dá)作為PD endpoint建立了相應(yīng)的PK-PD模型，可定量描述上述效應(yīng)指標(biāo)的變化與Res及代謝物的藥代動力學(xué)的關(guān)聯(lián)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 單次藥代動力學(xué) 多次藥代動力學(xué) 白藜蘆醇葡萄糖醛酸結(jié)合物 白藜蘆醇硫酸結(jié)合物 白藜蘆醇 酪氨酸酶 環(huán)氧合酶-2 氧化還原因子1 血管內(nèi)皮生長因子 生存蛋白 白藜蘆醇 PK input PD endpoint PK-PD模型 E_(max)模型
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-11
• ABSTRACT11-15
• 前言15-23
• 參考文獻(xiàn)20-23
• 第一部分 RES 在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究23-39
• 引言23-24
• 材料和方法24-28
• 結(jié)果28-36
• 討論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 第二部分 RES 在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的藥效動力學(xué)研究39-64
• 引言39
• 材料和方法39-53
• 結(jié)果53-59
• 討論59-62
• 參考文獻(xiàn)62-64
• 第三部分 RES 在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的 PK-PD 結(jié)合模型研究64-84
• 引言64
• 方法64-65
• 結(jié)果65-79
• 討論79-82
• 參考文獻(xiàn)82-84
• 全文總結(jié)84
• 創(chuàng)新點(diǎn)84-85
• 綜述85-94
• 參考文獻(xiàn)90-94
• 附錄94-95
• 感言95-97

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 于智勇;沈維干;薛慶於;武輝;;AdH1-siRNA-Survivin抗小鼠黑色素瘤生長和轉(zhuǎn)移的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年18期

2 劉艷杰;王倩;姜民;李紅艷;鄒敏杰;白鋼;;基于譜效-構(gòu)效關(guān)系篩選大黃中酪氨酸酶活性抑制成分的方法研究[J];中草藥;2012年11期

本文編號：1050858