本文關(guān)鍵詞：自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損的檢測及意義

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【摘要】：研究背景尖銳濕疣(CA)是由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的一種常見性傳播疾病,該病對患者的身心健康、生殖健康和家庭幸福造成較大的危害。超過90%的外生殖器疣與低危型HPV6和11兩種亞型有關(guān)。近年來尖銳濕疣發(fā)病率不斷上升,其中亞臨床感染和潛伏感染遠(yuǎn)多于典型尖銳濕疣,且HPV亞臨床和潛伏感染者也具有傳染性,對尖銳濕疣的流行、傳播、病程以及轉(zhuǎn)歸有一定的影響。臨床工作中亟需一種操作簡便、準(zhǔn)確度高的檢測方法。然而目前HPV的臨床檢測手段不盡理想,尖銳濕疣診斷,尤其在HPV亞臨床和潛伏感染的診斷缺乏便捷而準(zhǔn)確的方法,易造成誤診與漏診。HPV病原學(xué)檢測如核酸分子技術(shù),因?qū)嶒?yàn)室要求高等原因,無法在臨床尤其基層醫(yī)院作為常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目開展。曾有研究用HPV殼蛋白L1抗體免疫組化檢測HPV感染,發(fā)現(xiàn)其陽性檢出率較低而未能應(yīng)用于臨床診斷。本研究評估了自主研發(fā)的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損HPV感染的檢測意義和臨床應(yīng)用可能性。目的采用自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體,檢測外生殖器尖銳濕疣皮損組織中HPV6b和11型E7蛋白的表達(dá),觀察與尖銳濕疣臨床診斷及RT-PCR檢測結(jié)果的符合率,探討該兩型抗體在臨床HPV檢測中的應(yīng)用價(jià)值。方法1.收集2013年9月至2014年10月間在杭州市富陽區(qū)第一人民醫(yī)院皮膚科確診的尖銳濕疣病例55例。常規(guī)消毒,局麻下用血管鉗夾取全部或部分疣體組織標(biāo)本,經(jīng)生理氯化鈉溶液沖洗,置入10%福爾馬林中固定,常規(guī)組織病理檢查,HE染色。其中18例患者同時(shí)取疣體組織-80℃冰凍保存。2.55例尖銳濕疣皮損石蠟標(biāo)本,用HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體進(jìn)行免疫組化法染色檢測。鏡下觀察細(xì)胞染色情況,分析陽性染色的細(xì)胞中定位、染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比。3.18例尖銳濕疣皮損冰凍標(biāo)本用RT-PCR法測定HPV6b、11E7蛋白的mRNA表達(dá)情況,分析與免疫組化結(jié)果的符合率。結(jié)果55例尖銳濕疣皮損的免疫組化染色顯示HPV6b和11E7蛋白為胞核染色,而且皮損全層表皮細(xì)胞均可見陽性表達(dá)細(xì)胞,但以基底層較多。其中HPV6b E7和HPV11 E7蛋白陽性表達(dá)病例分別為42例(陽性率76.36%)和32例(陽性率58.18%)。HPV6b型和11型E7蛋白總陽性表達(dá)病例為52例(總陽性檢出率94.55%),其中兩蛋白雙陽性表達(dá)22例(雙陽性率40.00%)。兩蛋白均陰性表達(dá)為3例(陰性率5.45%)。42例HPV6b E7陽性表達(dá)病例中有20例為HPV11 E7表達(dá)陰性；32例HPV11E7陽性表達(dá)病例中有10例為]HPV6bE7表達(dá)陰性。18例尖銳濕疣冰凍標(biāo)本經(jīng)RT-PCR法檢測,HPV6bE7和HPV11E7的mRNA表達(dá)陽性分別為15例和10例,雙陽性表達(dá)7例。陽性表達(dá)型別與免疫組化結(jié)果完全一致。討論用自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化檢測55例CA標(biāo)本,可以直觀地觀察到HPV6b和11型E7蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞散在分布于皮損表皮各層,且主要為胞核染色。HPV6b和11 E7的總陽性檢出率達(dá)94.55%,明顯高于HPV殼抗原免疫組化陽性檢出率,并與文獻(xiàn)報(bào)道的超過90%的尖銳濕疣由低危型HPV6和11兩種亞型感染所致的流行病學(xué)結(jié)論相符合。本研究提示,自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化檢測尖銳濕疣標(biāo)本的陽性率很高。用這兩型HPVE7抗體進(jìn)行的免疫組化檢測還發(fā)現(xiàn),HPV11型E7陽性表達(dá)的組織中僅部分表現(xiàn)為HPV6b型E7表達(dá)陽性,反之亦然。提示該兩型抗體間無交叉反應(yīng)。對其中18例患者皮損組織平行進(jìn)行HPV6b和11型的E7 mRNA的RT-PCR法檢測,研究表明其陽性檢出率及陽性表達(dá)型別與免疫組化的結(jié)果完全一致,提示該兩型抗體對尖銳濕疣皮損組織中HPV6b、11的免疫組化法檢測型特異性很強(qiáng)。結(jié)論該自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損中HPV6b和11型感染檢出率很高,敏感性好,特異性強(qiáng)。未發(fā)現(xiàn)兩抗體有交叉反應(yīng),且可以直觀地觀察病損組織中HPV病毒感染細(xì)胞,將有助于尖銳濕疣的臨床診斷。由于免疫組化方法相對簡便,便于臨床推廣應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：尖銳濕疣 人乳頭瘤病毒6b型 人乳頭瘤病毒11型 E7蛋白 多克隆抗體 免疫組化 診斷 檢測
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R752.53
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 縮寫、符號清單、術(shù)語及中英文對照12-15
• 引言15-18
• 研究對象及實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 結(jié)果26-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述40-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 作者簡歷及攻讀成果52

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1 曹蕾;自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損的檢測及意義[D];浙江大學(xué);2016年

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本文編號：1047882