本文關(guān)鍵詞：PAI-1促進(jìn)皮膚黑色素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景皮膚惡性黑素瘤是皮膚惡性腫瘤的一種,發(fā)病隱匿和容易侵襲轉(zhuǎn)移是其重要的臨床特征。研究證明,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)現(xiàn)象和惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移存在著非常密切的相關(guān)性,因此,從EMT這一角度進(jìn)行研究是治療皮膚惡性黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的新策略。腫瘤細(xì)胞EMT現(xiàn)象受細(xì)胞內(nèi)在機(jī)制和腫瘤微環(huán)境組成的“龕(niche)”的影響。其中,腫瘤微環(huán)境中的纖溶酶原激活物抑制劑(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)在EMT中發(fā)揮重要作用,然而其在皮膚惡性黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制缺乏系統(tǒng)深入的研究。為此,本課題探討PAI-1對皮膚惡性黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用及其機(jī)制。研究目的1.檢測PAI-1在皮膚黑素瘤中的表達(dá)。2.明確PAI-1對皮膚黑素瘤中侵襲轉(zhuǎn)移的作用。3.闡明PAI-1調(diào)控皮膚黑素瘤中侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制。研究方法圍繞上述研究目的,我們采用以下研究方法:一.PAI-1在皮膚黑素瘤中的表達(dá)1.通過免疫組化定位檢測,我們觀察PAI-1在皮膚惡性黑素瘤組織中的表達(dá)情況。2.通過免疫熒光技術(shù)驗(yàn)證人皮膚惡性黑素瘤組織中PAI-1的表達(dá)情況及檢測PAI-1的來源細(xì)胞。二.PAI-1促進(jìn)皮膚黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移1.通過劃痕、轉(zhuǎn)移和侵襲三種實(shí)驗(yàn),觀察外源性PAI-1對皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375和SK-MEL-31侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。2.通過劃痕、轉(zhuǎn)移和侵襲三種實(shí)驗(yàn),觀察過表達(dá)PAI-1對皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。3.通過構(gòu)建的PAI-1過表達(dá)慢病毒后小鼠侵襲轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn)研究PAI-1對皮膚惡性黑素瘤A375細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。三.PAI-1促進(jìn)皮膚黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制1.通過免疫熒光、western blot觀察外源性PAI-1對皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375刺激后NF-κB信號通路中的p65活化情況。2.通過抗體阻斷等方法研究NF-κB信號通路在PAI-1調(diào)控皮膚惡性黑素瘤EMT及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。研究結(jié)果1.PAI-1在皮膚惡性黑素瘤中的表達(dá)情況通過免疫組化定位檢測,我們發(fā)現(xiàn)PAI-1陽性細(xì)胞主要集中分布于皮膚惡性黑素瘤的惡性腫瘤細(xì)胞表面和組織間質(zhì)中。通過免疫熒光進(jìn)一步檢測人皮膚惡性黑素瘤組織中PAI-1的表達(dá)情況,結(jié)果與免疫組化相一致,人皮膚惡性黑素瘤惡性腫瘤細(xì)胞和組織間質(zhì)中同樣表達(dá)PAI-1。通過免疫熒光技術(shù)我們檢測PAI-1的來源細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn):PAI-1來源于CD68陽性細(xì)胞。2.PAI-1促進(jìn)皮膚黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移通過劃痕、轉(zhuǎn)移和侵襲實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)外源性PAI-1能夠促進(jìn)皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375和SK-MEL-31侵襲轉(zhuǎn)移。通過劃痕、轉(zhuǎn)移和侵襲實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)PAI-1能夠促進(jìn)皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375和SK-MEL-31侵襲轉(zhuǎn)移。通過構(gòu)建的PAI-1過表達(dá)慢病毒后小鼠侵襲轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)過表達(dá)PAI-1的皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375在裸鼠肺部細(xì)胞數(shù)量明顯高于對照組。3.PAI-1促進(jìn)皮膚黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制在皮膚黑素瘤細(xì)胞株中加入外源性PAI-1細(xì)胞因子刺激,24小時后,通過免疫熒光發(fā)現(xiàn)加入外源性PAI-1后,皮膚黑素瘤細(xì)胞的E-cadherin表達(dá)明顯減弱,而Vimentin表達(dá)明顯增強(qiáng)。通過免疫熒光和western blot發(fā)現(xiàn)皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞株A375在PAI-1刺激5分鐘和15分鐘后,核內(nèi)p65表達(dá)明顯增加。應(yīng)用p65特異性PDTC阻斷劑阻斷p65的入核作用,發(fā)現(xiàn):體外應(yīng)用p65阻斷劑PDTC能夠明顯抑制PAI-1促進(jìn)皮膚惡性黑素瘤A375細(xì)胞EMT現(xiàn)象和侵襲轉(zhuǎn)移的能力研究結(jié)論在皮膚惡性黑素瘤中,來源于CD68陽性細(xì)胞的PAI-1能夠與皮膚惡性黑色素細(xì)胞相結(jié)合,通過激活NF-κB信號通路,促進(jìn)皮膚惡性黑色素細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：皮膚惡性黑素瘤 PAI-1 侵襲轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 英文縮略表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-21
• 第二章 PAI-1 在皮膚黑素瘤中的表達(dá)21-29
• 2.1 引言21
• 2.2 材料和方法21-24
• 2.3 結(jié)果24-26
• 2.4 討論26-29
• 第三章 PAI-1 促進(jìn)皮膚黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移29-48
• 3.1 引言29-30
• 3.2 材料和方法30-35
• 3.3 結(jié)果35-44
• 3.4 討論44-48
• 第四章 PAI-1 促進(jìn)皮膚黑素瘤侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制48-61
• 4.1 引言48
• 4.2 材料和方法48-52
• 4.3 結(jié)果52-57
• 4.4 討論57-61
• 全文總結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-68
• 文獻(xiàn)綜述 腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移調(diào)節(jié)機(jī)制68-85
• 參考文獻(xiàn)79-85
• 攻讀博士期間發(fā)表的論文85-86
• 致謝86

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：1026753