本文關鍵詞：敲減NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375細胞的增殖

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【摘要】：NADPH氧化酶參與細胞活性氧族(ROS)的生成過程,而ROS與腫瘤細胞增殖密切相關.為了闡明NADPH氧化酶影響黑色素瘤A375細胞增殖的分子機制,本文首先應用熒光定量PCR和Western印跡證實NOX4為人黑色素瘤A375細胞的NADPH氧化酶功能核心亞基;隨后根據(jù)NOX4基因設計3條干擾序列和對照序列并連接到p Super-retro-puro載體,經鑒定后轉化E.coli DH5α感受態(tài)細胞、篩選有效干擾序列并用于逆轉錄病毒包裝,病毒液感染A375細胞并經嘌呤霉素篩選10d,構建了NOX4缺陷的A375穩(wěn)轉細胞珠(A375-NOX4Δ),其NOX4的mRNA和蛋白表達分別下降了66.02%和77.35%,伴隨NADPH氧化酶活性和ROS水平分別下降了79.17%和64.16%;MTT、Ed U法檢測顯示,A375-NOX4Δ細胞的增殖能力比A375-WT細胞明顯降低、倍增時間延長,增殖細胞數(shù)量下降了68.27%(P0.01),呈現(xiàn)G1→S期阻滯;Western blot檢測表明A375-NOX4Δ細胞的cyclin D1、CDK4分別下降了55.7%(P0.01)和64.8%(P0.01),而P53、P21分別增加了6.89倍(P0.01)和3.27倍(P0.01),STAT3、P-STAT3分別下降了51.80%(P0.05)和82.58%(P0.01);電泳遷移率變動分析(EMSA)表明,A375-NOX4Δ細胞的STAT3-DNA結合活性明顯降低.上述結果提示,敲減A375細胞的NOX4表達可能通過減少ROS生成使得STAT3磷酸化水平及其結合DNA的活性下降,最終導致A375-NOX4Δ細胞增殖減少、呈現(xiàn)G1→S期阻滯,這為黑色素瘤發(fā)病機制研究提供了新思路及可能的藥物作用靶點.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學生物化學與分子生物學系;中國人民解放軍65426醫(yī)院;云南省婦幼保健院;
【關鍵詞】： NADPH氧化酶 黑色素瘤 細胞增殖 信號傳導及轉錄激活因子
【基金】：國家自然科學基金(No.81160246,81460421) 云南省科技計劃重點項目(No.2013FB102)~~
【分類號】：R739.5
【正文快照】： *聯(lián)系人Tel:0871-5922854;E-mail:zhuyuechun20091119@163.com錛并列第一作者*Corresponding author Tel:0871-65922854;E-mail:zhuyuechun20091119@163.com錛Two authors contributed to this work equallyKnockdown of NADPH Oxidase 4 Affects Proliferation via ReducingS

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本文編號：1013309