本文關(guān)鍵詞：敲減NADPH氧化酶4能降低STAT3活性抑制人黑色素瘤A375細(xì)胞的增殖

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【摘要】：NADPH氧化酶參與細(xì)胞活性氧族(ROS)的生成過程,而ROS與腫瘤細(xì)胞增殖密切相關(guān).為了闡明NADPH氧化酶影響黑色素瘤A375細(xì)胞增殖的分子機(jī)制,本文首先應(yīng)用熒光定量PCR和Western印跡證實(shí)NOX4為人黑色素瘤A375細(xì)胞的NADPH氧化酶功能核心亞基;隨后根據(jù)NOX4基因設(shè)計(jì)3條干擾序列和對照序列并連接到p Super-retro-puro載體,經(jīng)鑒定后轉(zhuǎn)化E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞、篩選有效干擾序列并用于逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝,病毒液感染A375細(xì)胞并經(jīng)嘌呤霉素篩選10d,構(gòu)建了NOX4缺陷的A375穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞珠(A375-NOX4Δ),其NOX4的mRNA和蛋白表達(dá)分別下降了66.02%和77.35%,伴隨NADPH氧化酶活性和ROS水平分別下降了79.17%和64.16%;MTT、Ed U法檢測顯示,A375-NOX4Δ細(xì)胞的增殖能力比A375-WT細(xì)胞明顯降低、倍增時(shí)間延長,增殖細(xì)胞數(shù)量下降了68.27%(P0.01),呈現(xiàn)G1→S期阻滯;Western blot檢測表明A375-NOX4Δ細(xì)胞的cyclin D1、CDK4分別下降了55.7%(P0.01)和64.8%(P0.01),而P53、P21分別增加了6.89倍(P0.01)和3.27倍(P0.01),STAT3、P-STAT3分別下降了51.80%(P0.05)和82.58%(P0.01);電泳遷移率變動分析(EMSA)表明,A375-NOX4Δ細(xì)胞的STAT3-DNA結(jié)合活性明顯降低.上述結(jié)果提示,敲減A375細(xì)胞的NOX4表達(dá)可能通過減少ROS生成使得STAT3磷酸化水平及其結(jié)合DNA的活性下降,最終導(dǎo)致A375-NOX4Δ細(xì)胞增殖減少、呈現(xiàn)G1→S期阻滯,這為黑色素瘤發(fā)病機(jī)制研究提供了新思路及可能的藥物作用靶點(diǎn).
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;中國人民解放軍65426醫(yī)院;云南省婦幼保健院;
【關(guān)鍵詞】： NADPH氧化酶 黑色素瘤 細(xì)胞增殖 信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81160246,81460421) 云南省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(No.2013FB102)~~
【分類號】：R739.5
【正文快照】： *聯(lián)系人Tel:0871-5922854;E-mail:zhuyuechun20091119@163.com錛并列第一作者*Corresponding author Tel:0871-65922854;E-mail:zhuyuechun20091119@163.com錛Two authors contributed to this work equallyKnockdown of NADPH Oxidase 4 Affects Proliferation via ReducingS

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本文編號：1013309