本文關(guān)鍵詞：miR146a及TRAF6、IRAK1基因表達與原發(fā)性干燥綜合癥并肺間質(zhì)病變的相關(guān)性分析

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【摘要】：目的：原發(fā)性干燥綜合征除累及外分泌腺體外尚可因腺體外其他器官的受累而出現(xiàn)多系統(tǒng)損害的癥狀。其中肺間質(zhì)病變是其死亡的主要原因,故pSS-ILD已成為臨床及免疫學(xué)研究的熱點,我們在前期的研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)pSS-ILD發(fā)病與TNF-α、TGF-β1和MMP9過度釋放導(dǎo)致肺泡炎癥密切相關(guān),而TNF-α、TGF-β1和MMP9大量分泌與NF-κB信號通路的激活,繼而通過TLR結(jié)合MyD88引起IRAK1磷酸化,之后激活TRAF6,形成MyD88-IRAK1-TRAF6信號復(fù)合體來完成。因此,我們提出假設(shè)：PSS-ILD發(fā)病與miR-146a及其靶基因IRAK1、TRAF6的表達相關(guān)。為證實這一假說,我們將評估pSS-ILD患者外周血單個核細胞中miR-146a及其靶基因IRAK1、TRAF6的表達情況,同時與健康對照者pSS患者比較,為pSS-ILD患者尋求新的治療靶點。方法：1.篩選并收集原發(fā)性干燥綜合征并肺間質(zhì)病變病例并簽署知情同意書,予免疫抑制劑序貫治療,采集外周血備檢。2.分離各組外周血單個核細胞(PBMC)提取總RNA,通過FQ-PCR、RT-PCR檢測miR-146a/靶基因TRAF6、IRAK1的表達,統(tǒng)計分析各組結(jié)果是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.ELISA檢測TNF-α、IL-2、IL-1β,分析各組細胞因子在發(fā)病中的作用及其與miR-146a是否具有相關(guān)性。4.檢測收集各組患者臨床指標(biāo)ESR、CRP、IgA、IgM、IgG。統(tǒng)計學(xué)分析其與miR146a, IRAK-1, TRAF-6之間是否存在線性關(guān)系。5.通過統(tǒng)計學(xué)分析,推論miR146a/ IRAK-1、TRAF-6是原發(fā)性干燥綜合征并肺間質(zhì)病變潛在治療靶點。結(jié)果：①研究結(jié)果表明miR-146a在患者組(pSS和pSS-ILD)其相對表達量明顯低于健康組(n=10,P0.05),在pSS患者組其相對表達量明顯低于pSS-ILD患者組(n=1 0,P0.05)。② IRAK1其相對表達量在pSS組明顯低于健康對照組(n=10,P0.05); pSS-ILD組明顯高于健康對照組(n=10,P0.05)；pSS組明顯低于pSS-ILD組(n=10,P0.05)。③ TRAF6的相對表達量在患病組(pSS和pSS-ILD)明顯低于健康對照組(n=1O,P0.05)；而pSS組和pSS-ILD組無明顯差異。④ TNF-α在健康對照組明顯低于患病組(pSS和pSS-ILD), (n=10,P0.05);在pSS組和pSS-ILD組無明顯區(qū)別。⑤ IL-1β在健康對照組的相對表達量明顯低于患病組(pSS和pSS-ILD), (n=10,P 0.05);且在pSS組低pSS-ILD組(n=1O,P0.05)。⑥IL-2在健康對照組的相對表達量明顯低于患病組(pSS和pSS-ILD) (n=10,P 0.05);且在pSS組低組pSS-ILD組(n=10,P0.05)。⑦ MiR-146a對IRAK-1、TRAF-6及其下游炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-2起負調(diào)節(jié)作用。miR-146a負調(diào)節(jié)IRAK-1(r=-0.987,P 0.01),miR-146a負調(diào)節(jié)TRAF-6(r=-0.998,P 0.01)。 miR-146a負調(diào)節(jié)TNF-a(r=-1.000,P 0.01), miR-146a負調(diào)節(jié)IL-1β (r=-1.000,P 0.01), miR-146a負調(diào)節(jié)IL-2 (r=-0.991,P 0.01)。⑧ Spearman線性關(guān)系分析顯示miR146a、IRAK-1、TRAF-6與臨床指標(biāo)、CRP、IgA、 IgG無明顯相關(guān)性。結(jié)論：研究結(jié)果表明miR-146a在pSS-ILD疾病發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵作用,且可能與疾病的嚴重程度相關(guān)。其表達水平可以作為預(yù)測pSS-ILD發(fā)生及嚴重程度的生物檢驗學(xué)指標(biāo),未來也可能成為治療pSS-ILD的生物學(xué)靶點。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性干燥綜合癥 肺間質(zhì)病變 微小RNA146a 白介素受體相關(guān)激酶1 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R593.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對照表10-12
• 前言12-15
• 1 材料與方法15-21
• 1.1 患者病例選擇收集15-16
• 1.1.1 患者入選標(biāo)準(zhǔn)15
• 1.1.2 患者排除標(biāo)準(zhǔn)15
• 1.1.3 患者分組15-16
• 1.2 主要實驗試劑及配制16
• 1.3 主要實驗儀器16-17
• 1.4 實驗方法17-21
• 1.4.1 標(biāo)本采集17
• 1.4.2 分離外周血單個核細胞：根據(jù)Ficoll梯度密度離心法分離PBMC17-18
• 1.4.3 總RNA的提取：按萃取法提取總RNA18-19
• 1.4.4 RNA濃度及吸光度的測定19
• 1.4.5 RNA電泳19
• 1.4.6 FQ-PCR法檢測miR-146a的表達19-20
• 1.4.7 Q-PCR法檢測TRAF-6、IRAK-1的表達20
• 1.4.8 實時熒光定量PCR結(jié)果數(shù)據(jù)分析20
• 1.4.9 ELISA檢測TNF-α、IL-2、IL-1β20-21
• 1.5 統(tǒng)計學(xué)處理21
• 2 結(jié)果21-26
• 3 討論26-29
• 4 結(jié)論29-30
• 5 展望30-31
• 參考文獻31-35
• 綜述35-43
• 參考文獻40-43
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄43-44
• 致謝44-45

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10 張文;張p，

本文編號：992281