發(fā)布時間：2017-10-07 04:10

  本文關(guān)鍵詞：不同日齡長白豬胰島分離和純化的比較研究

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【摘要】：胰島移植是治療Ⅰ型糖尿病的最有效方法之一。為解決胰島來源不足,進行異種間胰島移植的研究是治療Ⅰ型糖尿病的研究熱點,而豬胰島被認(rèn)為是人類胰島供體的最佳來源。本試驗為探討不同日齡豬胰腺胰島分離純化技術(shù),以出生1d、60 d、120 d、165-180 d豬為試驗動物,采用胰管注射法、histopaque純化法、酶聯(lián)免疫吸附試驗及組織學(xué)、免疫組織化學(xué)技術(shù)等進行胰腺胰島的分離純化試驗。結(jié)果表明,豬胰腺胰島獲取量與不同膠原酶消化時間0 min、15 min、30 min和45 min各組間均差異顯著(P0.05)；胰島獲取量與不同濃度膠原酶1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/ml各組間均差異顯著(P0.05)；在相同的消化時間(15 min)條件下,1d和60 d采取膠原酶濃度為1.0 mg/ml,120 d和165-180 d膠原酶濃度為1.5 mg/ml條件下分離純化,1d豬胰島分離3045±986個／g,純化后2421±438個／g,純化度為78%,存活率為92%；60 d豬胰島分離2567±873個／g,純化后1938±362個/g,純度為74%,存活率94%；120 d齡豬胰島分離1969±547個/g,純化后1562±236個/g,純度為79%,存活率90%；165-180 d齡豬胰島分離1758±125個/g,純化后1485±119個/g,純度為84%存活率為92%；1d胰島素釋放量高糖組為788.56±77.53 mIU/胰島,低糖組為158.37±28.44 mIU/胰島；165-180 d豬胰島素釋放量高糖組為679.58±68.69 mIU/胰島,低糖組為102.43±23.12 mIU/胰島；顯微鏡下HE染色測量結(jié)果1d豬胰島直徑一般為35±10μm,60 d豬胰島直徑一般為62±20μm,120 d齡豬胰島直徑一般為94±30 μm,165-180 d豬胰島直徑一般為158±60μm；DTZ染色測量結(jié)果1d豬胰島直徑一般為33±9μm,60 d豬胰島直徑一般為64±20 μm,120 d齡豬胰島直徑一般為91±32 μm,165-180 d豬胰島直徑一般為143±54μm。由此可知,出生后不同階段豬胰腺胰島分離純化的條件存在差異,1 d、60 d豬胰島分離純化的最佳條件為熱缺血時間小于10min、冷缺血時間小于30 min、膠原酶V濃度為1.0 mg/ml、消化時間為15 min,而120 d、165-180 d日齡豬胰島分離純化最佳條件為熱缺血時間小于10 min、冷缺血時間小于30 min、膠原酶V濃度為1.5 mg/ml、消化時間為15 min。1 d和120 d長白豬胰島分化能力、胰島數(shù)量及胰島釋放量優(yōu)于120 d和165-180 d長白豬。
【關(guān)鍵詞】：豬 胰島 膠原酶V 分離純化
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 前言11-18
• 1 胰島分離和純化11-13
• 1.1 胰島分離11-12
• 1.2 胰島純化12-13
• 2 胰腺形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能13-14
• 3 糖尿病14-15
• 4 異種間移植15-16
• 5 供體選擇16
• 6 排斥反應(yīng)16-17
• 7 意義17-18
• 材料與方法18-25
• 1 材料18-20
• 1.1 取材18
• 1.2 主要藥品18-19
• 1.3 主要儀器設(shè)備19-20
• 1.4 藥品的配制20
• 2 方法20-25
• 2.1 豬胰島分離20-21
• 2.2 豬胰島純化21-22
• 2.3 胰島計數(shù)及純度22
• 2.4 胰島活性22
• 2.5 胰島體外功能測定22
• 2.6 豬胰腺石蠟組織切片制作22-23
• 2.7 豬胰腺石蠟組織切片的HE染色方法23-24
• 2.8 豬胰腺胰島的免疫組化染色24
• 2.9 統(tǒng)計學(xué)處理24-25
• 結(jié)果25-34
• 1 豬胰腺胰島的分離、純化狀態(tài)25-26
• 2 不同日齡豬胰腺胰島的形態(tài)觀察26-29
• 3 熱缺血時間分離純化后胰島獲取量和存活率29-30
• 4 冷缺血時間分離純化后胰島獲取量和存活率30-31
• 5 不同消化時間和膠原酶濃度胰島收獲量31-32
• 6 不同日齡豬胰島收獲量、純度及存活率32
• 7 豬胰島素釋放試驗32-34
• 討論34-37
• 1 豬胰島分離純化34-35
• 2 豬胰島分離純化影響因素35-36
• 3 豬胰腺胚后發(fā)育規(guī)律36-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-45
• 致謝45-46
• 作者簡介46

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1 周毅;許評;王平蘭;宋純;宋春芳;Jonathan R.T.Lakey;;影響成人高質(zhì)量胰島分離的關(guān)鍵因素分析[J];中華肝膽外科雜志;2006年01期

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本文編號：986813