發(fā)布時(shí)間：2017-10-05 05:27

  本文關(guān)鍵詞：艾滋病患者ART半年后血液和精液HIV-1的基因特點(diǎn)及生物學(xué)特性研究

  更多相關(guān)文章： HIV ART 血液 精液 C2V5 基因特點(diǎn) 生物學(xué)特性

【摘要】：目的我們通過(guò)檢測(cè)ART半年后艾滋病患者外周血及精液中HIV-1的含量,擴(kuò)增env序列構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù)、預(yù)測(cè)輔助受體和頂端四肽等。以期發(fā)現(xiàn)ART半年后MSM艾滋病患者血液及精液中HIV-1的特點(diǎn)和變異規(guī)律。方法實(shí)驗(yàn)入組經(jīng)ART半年后艾滋病患者19例,留取血液和精液標(biāo)本,將標(biāo)本處理為血漿、PBMC、精漿和精液細(xì)胞四種標(biāo)本。分別檢測(cè)其HIV RNA或DNA含量,利用套式PCR選擇性擴(kuò)增血漿和精漿中的HIV RNA及PBMC和精液細(xì)胞中HIV DNA的C2V5區(qū)序列。將得到的C2V5區(qū)序列連接至T載體,導(dǎo)入JM109感受態(tài)細(xì)胞,LB固體培養(yǎng)基培養(yǎng),分別挑取單克隆驗(yàn)證后每個(gè)患者每種標(biāo)本送10個(gè)單克隆測(cè)序。測(cè)序結(jié)果利用ContigExpress和BioEdit軟件進(jìn)行校正及比對(duì),之后一方面用Mega6軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和計(jì)算組內(nèi)基因離散率,另一方面利用Geno2pheno和PSSM系統(tǒng)預(yù)測(cè)病毒亞型、輔助受體、頂端四肽類(lèi)型等。結(jié)果1.ART半年后19例患者血液中可檢測(cè)到HIV RNA者僅2例,但精液中可檢測(cè)到HIV RNA者16例。全部患者的PBMC和精液細(xì)胞中都可以檢測(cè)到總的、2LTR環(huán)狀和整合型HIV DNA。2.19例患者的四種標(biāo)本,最終成功擴(kuò)增C2V5區(qū)的血漿2例、精漿16例、PBMC 11例,精液細(xì)胞9例,共38例,最終成功測(cè)序380個(gè)單克隆。3.血漿、精漿、PBMC和精液細(xì)胞的基因序列分析19例患者HIV亞型:12例B亞型,7例C亞型。構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù)和計(jì)算組內(nèi)基因離散率,結(jié)果可以看出,血漿中的病毒變異度大于PBMC中的,精液細(xì)胞中病毒的變異度大于精漿中的;精液中病毒的變異則大于血液中病毒的變異。4.輔助受體預(yù)測(cè)血液和精液使用的受體(R5/X4)差異極大。CCR5和CXCR4在血漿各50%,精液中分別為54.4%和45.6%,在PBMC中分別為22.7%和77.3%,在精細(xì)胞分別為14.4%和85.6%。5.V3環(huán)頂端四肽在血漿、PBMC及精液細(xì)胞中,頂端四肽的類(lèi)型以GPGQ為主,比例分別為100%,72.8%和81.1%,然而在精漿中,頂端四肽的類(lèi)型以GPGR為主,比例是86.4%,精液中還有一些血液中沒(méi)有的頂端四肽類(lèi)型。6.V3環(huán)氨基酸所帶電荷數(shù)血漿和PBMC中的V3環(huán)氨基酸所帶電荷數(shù)沒(méi)有明顯差異。而精液中V3環(huán)氨基酸所帶電荷數(shù)明顯高于血液中的。結(jié)論經(jīng)ART半年后血液中HIV RNA已達(dá)檢測(cè)不到水平的艾滋病患者中,大部分患者的精液中仍可檢測(cè)到HIV RNA和HIV DNA。不同患者不同標(biāo)本各病毒的進(jìn)化情況有明顯的差異,而且輔助受體的利用、頂端四肽及電荷數(shù)也有明顯的不同。
【關(guān)鍵詞】：HIV ART 血液 精液 C2V5 基因特點(diǎn) 生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R512.91
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)一覽表4-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 1、前言10-13
• 2、材料與方法13-19
• 3、結(jié)果19-37
• 4、討論37-40
• 5、結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 文獻(xiàn)綜述46-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-57
• 論文發(fā)表情況57-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷58

【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：975047