本文關(guān)鍵詞：AGEs對大鼠BMSCs成骨分化過程中LRP5、Col-ImRNA表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:觀察AGEs對大鼠BMSCs增殖、分化的影響,觀察AGEs是否抑制Wnt/β-catenin信號通路中LRP5基因表達(dá),進(jìn)一步探索骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)理。方法:1.大鼠BMSCs的提取、培養(yǎng)及鑒定。2.AGEs對BMSCs增殖的影響:以大鼠的BMSCs作為體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?不同濃度AGEs(0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml)和相應(yīng)濃度的BSA作用于BMSCs72小時(shí),采用CCK-8法檢測BMSCs的增殖情況;觀察0.2mg/ml AGEs和BSA分別作用于細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)BMSCs增殖情況。3.AGEs對BMSCs礦化的影響:分組:(1)對照組(0.2mg/ml BSA+成骨誘導(dǎo)液)(2)實(shí)驗(yàn)組(0.2mg/ml AGEs+成骨誘導(dǎo)液)方法:第3代BMSCs達(dá)到80%-90%融合時(shí),0.25%胰酶消化,配制1×104個(gè)/ml細(xì)胞混懸液。接種于6孔板中孵育。24小時(shí)后分別加入2mlBSA和AGEs液體。18天后行茜素紅染色。4.觀察AGEs對LRP5m RNA、Col-ImRNA表達(dá)的影響:分組:(1)成骨誘導(dǎo)液;(2)0.2mg/mlBSA+成骨誘導(dǎo)液;(3)0.2mg/mlAGEs+成骨誘導(dǎo)液;(4)50ug/ml抗RAGE中和性抗體+0.2mg/mlAGEs+成骨誘導(dǎo)液;方法:上述濃度的藥物干預(yù)BMSCs 7天,RT-PCR技術(shù)測定LRP5、Col-I mRNA的表達(dá)。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有數(shù)據(jù)均采用數(shù)據(jù)軟件包SPSS20.0進(jìn)行處理。計(jì)量資料以sx±表示,組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析,兩兩之間多重比較采用LSD檢驗(yàn)。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.原代BMSCs集落樣貼壁生長,鏡下觀察長梭形、巢狀,傳代后細(xì)胞變短、多角。第三代BMSCs成骨分化誘導(dǎo)后進(jìn)行茜素紅染色,在顯微鏡下觀察有鈣化結(jié)節(jié)形成。流式細(xì)胞儀進(jìn)行BMSCs表明標(biāo)志物鑒定,第三代BMSCs特異性表面標(biāo)志物CD44、CD90的陽性表達(dá)率分別為96.07%、99.34%,CD34的陰性表達(dá)率為0.19%。2.在BMSCs培養(yǎng)基中分別加入不同濃度的AGEs(0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml),72小時(shí)后,AGEs組較對照組BMSCs光密度(OD)值都有所降低,且在0.05mg/ml~0.2mg/ml范圍內(nèi),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。觀察0.2mg/ml AGEs作用細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)BMSCs OD值的變化,發(fā)現(xiàn)AGEs組較BSA組在48小時(shí)、72小時(shí)BMSCs的增殖明顯抑制,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AGEs對于BMSCs的抑制率隨著濃度的增大與時(shí)間的延長逐漸增高。3.AGEs組作用于BMSCs18天后較對照組礦化結(jié)節(jié)的形成數(shù)量明顯減少。4.AGEs組作用于BMSCs7天后較對照組Col-I mRNA、LRP5 mRNA表達(dá)量減少,組間對照差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。給予抗RAGE中和性抗體后行AGEs干預(yù),發(fā)現(xiàn)Col-I mRNA、LRP5 mRNA表達(dá)量較對照組無明顯變化,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.AGEs呈濃度與時(shí)間依賴性抑制大鼠BMSCs的增值。2.AGEs與受體RAGE結(jié)合后,抑制大鼠BMSCs成骨分化。3.AGEs抑制了Wnt信號通路中LRP5基因表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：AGEs BMSCs 成骨分化 I型膠原蛋白 LRP5
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R580
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物13
• 1.2 主要試劑13
• 1.3 主要儀器13-14
• 1.4 試劑的配制14-15
• 1.5 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2 結(jié)果18-21
• 2.1 BMSCs形態(tài)觀察及鑒定18-19
• 2.2 AGEs對BMSCs增殖的影響19
• 2.3 AGEs對BMSCs成骨分化過程中礦化的影響19-20
• 2.4 AGEs對Col-ImRNA、LRP5 mRNA表達(dá)的影響20-21
• 3 討論21-24
• 3.1 AGEs對BMSCs增殖的影響21
• 3.2 AGEs對BMSCs成骨分化的影響21-22
• 3.3 AGEs對Wnt/β-catenin信號通路的影響22-24
• 4 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-29
• 綜述29-36
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 致謝36-37
• 在學(xué)期間研究成果37-38
• 個(gè)人簡歷38

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