發(fā)布時間：2017-09-23 18:02

  本文關(guān)鍵詞：同型半胱氨酸對BMSCs分化功能的影響及白藜蘆醇、葛根素的干預作用

  更多相關(guān)文章： 同型半胱氨酸 白藜蘆醇 葛根素 骨髓間充質(zhì)干細胞 成骨分化 成脂分化

【摘要】：目的:觀察同型半胱氨酸(Hcy)對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)成骨及成脂分化功能的影響,及白藜蘆醇、葛根素干預后細胞成骨成脂分化功能的變化,探討同型半胱氨酸致骨質(zhì)疏松及白藜蘆醇及葛根素抗骨質(zhì)疏松的作用機制。方法:1.全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs,P3代BMSCs經(jīng)流式細胞儀檢測細胞表面標志物CD34、CD44、CD45、CD90的表達。2.MTT法檢測細胞活性,篩選合適的同型半胱氨酸、白藜蘆醇及葛根素干預濃度。3.將生長狀態(tài)良好的P3代BMSCs分為:正常對照組、OM或AM組(成骨或成脂誘導)、R或P組(10μmol/L白藜蘆醇或葛根素)、H組(100μmol/L Hcy)、R+H或P+H組(10μmol/L白藜蘆醇或葛根素+100μmol/L Hcy)、R+H+L或P+H+L組(10μmol/L白藜蘆醇或葛根素+100μmol/L Hcy+10μmol/L LY294002)。通過茜素紅及油紅O染色后鈣結(jié)節(jié)及陽性細胞數(shù)的變化,實時熒光定量PCR檢測成骨分化調(diào)控基因Runx2,成骨標志基因BMP2、OPG、Collagen?及成脂分化調(diào)控基因PPAR-γ表達,試劑盒檢測ALP水平評估細胞成骨及成脂分化功能。4.流式細胞儀檢測ROS,試劑盒檢測MDA、SOD、GSH-PX評估細胞氧化應激水平。5.WB檢測各組細胞AKT、p-AKT及Fox O1蛋白表達變化。結(jié)果:1.SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)及鑒定:SD大鼠的股骨及脛骨骨髓中成功分離出梭形的BMSCs,流式細胞儀檢測可見P3代大鼠BMSCs表達CD44(99.86±5.934)%及CD90(95.10±2.013)%,不表達CD34(0.68±0.612)%及CD45(0.31±0.117)%。2.MTT結(jié)果示:1~1000μmol/L的Hcy對BMSCs增殖呈濃度依賴性抑制(p0.05),0.1μmol/L的Hcy則促進BMSCs增殖(p0.05)。0.1~100μmol/L白藜蘆醇可以促進BMSCs增殖,以10μmol/L的濃度作用最佳(p0.05),10~100μmol/L葛根素可以促進BMSCs增殖(p0.05),而白藜蘆醇及葛根素均可以減弱Hcy對BMSCs增殖的抑制作用(p0.05)。3.茜素紅、油紅O染色及PCR結(jié)果示:成骨誘導后茜素紅染色可見Hcy干預后細胞鈣結(jié)節(jié)形成明顯減少,Runx2、BMP2、Collagen?及OPG表達下調(diào),ALP活性下降(p0.05),PPAR-γ表達增高(p0.05),成脂誘導后油紅O染色可見H組陽性細胞百分比高。與H組比較R+H組及P+H組Runx2、BMP2、Collagen?及OPG表達增高(p0.05),ALP活性升高(p0.05),PPAR-γ表達下降(p0.05)。PI3K/AKT信號通路抑制劑LY294002干預后,白藜蘆醇及葛根素對Hcy抑制成骨相關(guān)基因促進成脂相關(guān)基因表達的作用被部分阻斷(p0.05)。4.氧化應激指標檢測結(jié)果示:Hcy干預后細胞氧化應激指標ROS及MDA增高,抗氧化劑SOD及GSH-PX活性降低(p0.05),Gadd45表達增加(p0.05),白藜蘆醇及葛根素可以使Hcy干預細胞ROS、MDA水平降低而SOD、GSH-PX水平升高(p0.05),Gadd45表達下降(p0.05),但白藜蘆醇及葛根素對Hcy的干預作用可以被LY294002部分阻斷(p0.05)。5.WB結(jié)果示:成骨誘導分化后細胞p-AKT/AKT表達升高(p0.05),與正常對照組比較Hcy干預可以使p-AKT/AKT及Fox O1表達減少(p0.05),白藜蘆醇及葛根素干預后可以減弱Hcy對p-AKT/AKT及Fox O1表達的抑制,而這種干預作用可以被LY94002部分阻斷(p0.05)。結(jié)論:同型半胱氨酸可以通過誘導細胞氧化應激,進一步抑制大鼠BMSCs成骨分化促進其成脂分化。而白藜蘆醇及葛根素具有抗骨質(zhì)疏松的作用,其機制可能是:白藜蘆醇及葛根素通過激活PI3K/AKT/Fox O1信號通路發(fā)揮抗氧化應激作用,進而促進大鼠BMSCs成骨分化功能抑制其成脂分化功能。
【關(guān)鍵詞】：同型半胱氨酸 白藜蘆醇 葛根素 骨髓間充質(zhì)干細胞 成骨分化 成脂分化
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R589
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-16
• 1 研究背景10
• 2 骨髓間充質(zhì)干細胞分化功能在骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展中的作用10-11
• 3 氧化應激與骨質(zhì)疏松11-12
• 4 PI3K/AKT/FoxO1信號通路與骨質(zhì)疏松12-13
• 5 植物雌激素與骨質(zhì)疏松13-16
• 材料與方法16-28
• 1 材料16-18
• 1.1 實驗儀器及設備16
• 1.2 實驗試劑及藥品16-17
• 1.3 主要溶液配制17-18
• 2 實驗方法18-28
• 2.1 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞提取培養(yǎng)、傳代及鑒定18-19
• 2.2 細胞活力檢測19
• 2.3 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外成骨及成脂誘導分化后茜素紅及油紅O染色19-20
• 2.4 實時熒光定量PCR20-23
• 2.5 細胞堿性磷酸酶活性檢測23
• 2.6 細胞氧化應激水平檢測23-25
• 2.7 Western Blot檢測細胞蛋白表達水平25-26
• 2.8 統(tǒng)計分析26-28
• 實驗結(jié)果28-44
• 1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)及鑒定28-29
• 1.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)28
• 1.2 流式細胞儀對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞表型鑒定28-29
• 2 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞活性的變化29-31
• 2.1 同型半胱氨酸、白藜蘆醇及葛根素對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞活力的影響（MTT法）29-30
• 2.2 白藜蘆醇及葛根素對同型半胱氨酸導致大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞活力下降的干預作用（MTT法）30-31
• 3 同型半胱氨酸對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化功能的影響及白藜蘆醇、葛根素的干預作用31-37
• 3.1 成骨及成脂誘導分化后茜素紅及油紅O染色31-32
• 3.2 細胞成骨及成脂分化相關(guān)基因表達的變化32-37
• 4 同型半胱氨酸對骨髓間充質(zhì)干細胞分化過程中氧化應激水平的影響及白藜蘆醇、葛根素的干預作用37-40
• 4.1 白藜蘆醇對同型半胱氨酸所致細胞氧化應激相關(guān)指標的影響37-38
• 4.2 葛根素對同型半胱氨酸所致細胞氧化應激相關(guān)指標的影響38-40
• 5 細胞Gadd45及 β-catenin基因表達水平的變化40-41
• 6 AKT、p-AKT、Fox O1蛋白表達的變化41-44
• 討論44-51
• 1 全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及細胞表型鑒定44-45
• 2 同型半胱氨酸對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及分化功能的影響與氧化應激的關(guān)系45-47
• 3 白藜蘆醇及葛根素通過激活PI3K/AKT/FoxO1信號通路抗氧化應激促進骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化47-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-57
• 中英文縮略詞表57-58
• 在學期間的研究成果58-59
• 致謝59

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1 王琴,盧集森;葛根素的臨床應用新進展[J];廣州醫(yī)藥;2001年04期

2 周志懷,李建芬,張增謙;葛根素的臨床應用及研究進展[J];河北醫(yī)藥;2002年06期

3 蘇旭輝;葛根素的臨床應用[J];張家口醫(yī)學院學報;2002年03期

4 金建軍,張中樂,王素玲,常永超;葛根素對肝缺血再灌注損傷的保護作用[J];基礎醫(yī)學與臨床;2002年04期

5 張寧,馬建芳;葛根素的臨床應用[J];海峽藥學;2003年05期

6 趙軍;葛根素的臨床應用[J];中國藥師;2003年09期

7 胡海濤;;葛根素治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變[J];中國醫(yī)學文摘.內(nèi)科學;2003年06期

8 黃光輝,劉惠芳;葛根素治療椎基底動脈供血不足35例[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2004年03期

9 馮德輝;葛根素治療椎-基底動脈供血不足性眩暈療效觀察[J];中國中醫(yī)急癥;2004年05期

10 秦文,董興兵,楊勤;葛根素的臨床應用新進展[J];中國藥業(yè);2004年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 范津玲;;葛根素的臨床應用進展[A];新世紀全國中藥研究暨中藥房管理學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

2 梁劍平;;葛根素提取工藝研究[A];第二屆中草藥提取關(guān)鍵技術(shù)與提取物產(chǎn)業(yè)應用研討會論文集[C];2009年

3 陶志勛;;葛根素的臨床應用進展[A];2004年全國中藥研究暨中藥房管理學術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

4 趙紅;李成建;;葛根素不良反應[A];第四屆全國老年醫(yī)學進展學術(shù)會議論文集[C];2004年

5 屈凌波;王玲;陳曉嵐;趙玉芬;;7-磷�；鸶嘏c牛血清蛋白的相互作用[A];第七屆全國磷化學化工暨第四屆海峽化學生物學、生物技術(shù)與醫(yī)藥發(fā)展討論會論文集[C];2006年

6 馬文紅;龔軍英;閆享福;鄭茜予;;葛根素的現(xiàn)代應用概況(綜述)[A];2006第六屆中國藥學會學術(shù)年會論文集[C];2006年

7 張立實;丁曉琴;;葛根素的生物學作用及其應用現(xiàn)狀[A];第二屆中國西部營養(yǎng)學術(shù)會議專題報告及論文摘要匯編[C];2006年

8 李洪玉;戴詩文;壽旦;章建民;;葛根中葛根素的高效液相色譜分析[A];第九屆全國中藥和天然藥物學術(shù)研討會大會報告及論文集[C];2007年

9 張立實;;葛根素生物學作用研究進展(綜述)[A];第四屆第二次中國毒理學會食品毒理學專業(yè)委員會與營養(yǎng)食品所毒理室聯(lián)合召開學術(shù)會議論文集[C];2008年

10 曲濤;周繡棣;慕宏杰;魏俊花;孫考祥;;樹枝狀聚合物聚酰胺-胺對葛根素在角膜上皮細胞攝取及滲透的影響[A];2011年中國藥學大會暨第11屆中國藥師周論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 副主任醫(yī)師 羅建國;葛根素可用治多種疾病[N];大眾衛(wèi)生報;2000年

2 李立安;葛根素的臨床新用[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 劉海文;葛根素治療糖尿病血管并發(fā)癥[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 陶春祥;葛根素的臨床應用[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

5 王利；魏品康；秦志豐;研究揭示：葛根素可解決腫瘤MDR難題[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 常怡勇;注意葛根素的不良反應[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

7 楊嘉珍邋歐陽作憲;葛根素對腦細胞損傷有保護作用[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

8 楊衛(wèi)彬;葛根素治療強直性脊柱炎的臨床觀察[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

9 程書權(quán);葛根素的臨床應用[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

10 青云;葛根素制劑的研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

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1 張靜;葛根素對慢性缺血誘發(fā)的血管性癡呆大鼠認知功能障礙的保護作用及機制研究[D];山東大學;2015年

2 曾艷平;葛根素聯(lián)合5-FU對肝癌細胞SMMC7721作用的研究[D];武漢大學;2015年

3 楊希;葛根素作為牙周炎宿主調(diào)節(jié)治療藥物的研究[D];武漢大學;2015年

4 李耿;克服溶血的復方葛根素注射制劑生物評價研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2009年

5 潘洪平;葛根素的吸收動力學及對腦缺血損傷的保護作用研究[D];華中科技大學;2010年

6 羅承鋒;葛根素固體脂質(zhì)納米粒的藥動學及其代謝產(chǎn)物研究[D];廣州醫(yī)學院;2010年

7 吳純潔;葛根素眼用新型給藥系統(tǒng)的研究[D];四川大學;2005年

8 李翼飛;葛根素特異性敲除技術(shù)方法及應用研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

9 孫曉輝;葛根素治療糖尿病的作用機制研究[D];華中科技大學;2007年

10 閆莉萍;葛根素心肌保護，調(diào)節(jié)血脂和舒血管的藥理作用機制[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

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1 閆春林;葛根素對MPP+誘導的SH-SY5Y細胞凋亡過程中p53及相關(guān)基因表達的影響[D];河北聯(lián)合大學;2014年

2 陳貴洪;地塞米松聯(lián)合葛根素治療急性百草枯中毒大鼠的實驗研究[D];川北醫(yī)學院;2015年

3 粟鳳;葛根素預處理對缺氧/復氧損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細胞的保護作用[D];貴陽醫(yī)學院;2015年

4 康鑫;葛根素促進成骨細胞增殖及信號調(diào)控機制的實驗研究[D];蘭州大學;2015年

5 賴松青;葛根素抗大鼠離體心臟缺氧復氧損傷保護作用的機制研究[D];南昌大學;2013年

6 孫艷;葛根素下調(diào)組織蛋白酶B抑制TGF-β誘導HUVEC細胞凋亡的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2015年

7 周禮仕;芪燈明目膠囊化學成分分析與質(zhì)量控制研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2015年

8 金鑫;葛根素聯(lián)用沙格列汀對糖尿病大鼠血糖、腎臟纖維化及高糖誘導系膜細胞增殖的影響[D];皖南醫(yī)學院;2015年

9 國海東;葛根素高效檢測、分離及穩(wěn)定性和增溶研究[D];江西農(nóng)業(yè)大學;2015年

10 施榮楓;利用免疫分析法解析葛根素在正常大鼠和MCAO模型大鼠中的藥代動力學特征[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

，

本文編號：906663