本文關(guān)鍵詞：miR-202通過(guò)PGC1β調(diào)控3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化

  更多相關(guān)文章： miR-202 3T3-L1前脂肪細(xì)胞 脂肪細(xì)胞分化 PGC1β

【摘要】：目的:觀察mi R-202對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響;探討miR-202促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的可能分子機(jī)制。方法:1.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)AMO-miR-202、亂序?qū)φ誱iRNA細(xì)胞系于Gene copoeia公司購(gòu)得miR-202的反義核苷酸(AMO-mi R-202)及亂序?qū)φ誱iRNA兩種重組質(zhì)粒,經(jīng)擴(kuò)增后提取質(zhì)粒,并經(jīng)293T細(xì)胞行慢病毒包裝后,感染3T3-L1前脂肪細(xì)胞,于熒光顯微鏡下觀察其感染效率。2.miR-202對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響將AMO-miR-202和亂序?qū)φ誱iRNA感染3T3-L1前脂肪細(xì)胞,并以未感染的3T3-L1前脂肪細(xì)胞作為對(duì)照,因此實(shí)驗(yàn)分3組:脂肪細(xì)胞組、亂序?qū)φ战M、AMO-miR-202組。隨后將3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化,在誘導(dǎo)第9天,行油紅O染色檢測(cè)脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴的情況,并經(jīng)RT-PCR檢測(cè)PPARγ2、aP2的mRNA表達(dá)。3.miR-202的靶基因預(yù)測(cè)主要通過(guò)生物學(xué)預(yù)測(cè)網(wǎng)站(TargetScan:http://www.TargetScan.org;miRanda:http://www.miRanda.org;miRBase:http://microna.sanger.ac.uk)尋找miR-202的靶基因。4.miR-202促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的可能分子機(jī)制將上述3組細(xì)胞誘導(dǎo)分化至第9天,經(jīng)western-blot檢測(cè)pparγ2、ap2、靶基因pgc1β的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)amo-mir-202、亂序?qū)φ誱irna細(xì)胞系經(jīng)293t細(xì)胞慢病毒包裝amo-mir-202、亂序?qū)φ誱irna,熒光顯微鏡下觀察,約90%細(xì)胞可見(jiàn)熒光;將上述2組病毒液分別感染3t3-l1前脂肪細(xì)胞后,熒光顯微鏡下觀察,約80%細(xì)胞可見(jiàn)熒光。2.mir-202對(duì)3t3-l1前脂肪細(xì)胞分化的影響油紅o染色結(jié)果顯示:amo-mir-202組細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯少于其他兩組;rt-pcr結(jié)果表明:與脂肪細(xì)胞組相比,amo-mir-202組pparγ2和ap2的mrna表達(dá)顯著降低(p0.05),亂序?qū)φ战M與脂肪細(xì)胞組相比,pparγ2和ap2的mrna表達(dá)無(wú)顯著差異。3.mir-202靶基因的預(yù)測(cè)通過(guò)應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè),pgc1β可能是mir-202的靶基因。4.mir-202促進(jìn)3t3-l1前脂肪細(xì)胞分化的可能分子機(jī)制western-blot結(jié)果顯示:與脂肪細(xì)胞組相比,amo-mirna-202可顯著提高pgc1β蛋白表達(dá),減少pparγ2和ap2的蛋白表達(dá)(p0.01),但亂序?qū)φ誱irna對(duì)上述指標(biāo)無(wú)顯著影響。結(jié)論:1.mir-202可促進(jìn)3t3-l1前脂肪細(xì)胞分化。2.miR-202可能通過(guò)靶PGC1β蛋白,提高PPARγ2、aP2的表達(dá)來(lái)促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：miR-202 3T3-L1前脂肪細(xì)胞 脂肪細(xì)胞分化 PGC1β
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 主要英文縮略語(yǔ)索11-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 材料方法17-27
• 第3章 結(jié)果27-35
• 第4章 討論35-39
• 第5章 結(jié)論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述 微小RNA與炎癥相關(guān)的糖尿病及其并發(fā)癥關(guān)系的研究進(jìn)展45-53
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果53-55
• 研究基金資助項(xiàng)目55-57
• 致謝57

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