本文關(guān)鍵詞：枸杞多糖對HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:采用高糖高胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立胰島素抵抗細(xì)胞模型,通過觀察不同濃度的枸杞多糖(lyceum barbarum polysaccharide,LBP)對HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的影響,探討其改善胰島素抵抗可能的分子機(jī)制,為進(jìn)一步認(rèn)識、利用枸杞多糖提供理論依據(jù),也為將來枸杞多糖治療2型糖尿病提供科學(xué)依據(jù),具有重要意義。方法:采用高糖高胰島素處理HepG2細(xì)胞24小時(shí)建立胰島素抵抗細(xì)胞模型,通過葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)判斷模型是否建立、噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測不同濃度的LBP對HepG2細(xì)胞活性的影響,選擇三個合適的濃度、確定藥物作用時(shí)間用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測不同濃度LBP對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響。比色法測定細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;Westen-Blot法測定胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)蛋白(IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2)的表達(dá)水平。結(jié)果:1.枸杞多糖對HepG2細(xì)胞活性的影響:LBP處理HepG2細(xì)胞24h和48h后,低濃度(100,300μg/ml)枸杞多糖不影響細(xì)胞活性;而高濃度(500、1000、3000、5000μg/ml)枸杞多糖呈濃度依賴性抑制HepG2細(xì)胞活性。當(dāng)處理時(shí)間延長至72h時(shí),高濃度的枸杞多糖對hepg2細(xì)胞活性的抑制作用愈加明顯,且呈劑量依賴效應(yīng),與對照組(24h,0μg/ml)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。因此,為了排除枸杞多糖對細(xì)胞活力的影響,本實(shí)驗(yàn)選擇30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml分別作為低濃度枸杞多糖組(l-lbp)、中濃度枸杞多糖組(m-lbp)和高濃度枸杞多糖(h-lbp組)的濃度值,處理細(xì)胞時(shí)間選擇48h。2.枸杞多糖對胰島素抵抗hepg2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響:與正常對照組相比,ir模型組細(xì)胞葡萄糖消耗量顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),說明hepg2細(xì)胞胰島素抵抗模型建立成功。與ir模型組相比,高濃度和中濃度的lbp顯著提高了胰島素抵抗hepg2細(xì)胞的葡萄糖消耗量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而低濃度lbp對hepg2細(xì)胞的葡萄糖消耗量無顯著影響,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與羅格列酮組相比,高、低濃度lbp組葡萄糖消耗量顯著降低(p0.05),中濃度lbp組葡萄糖消耗量無顯著性差異(p0.05)。3.枸杞多糖對胰島素抵抗hepg2細(xì)胞mda含量和sod活力的影響:與正常對照組相比,ir模型組細(xì)胞mda含量顯著升高,sod活力顯著降低(p0.05)。與ir模型組相比,高、中濃度lbp組細(xì)胞mda含量顯著降低(p0.05);而低濃度lbp組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);高濃度、中濃度和低濃度lbp組細(xì)胞sod活力均顯著升高(p0.05)。與羅格列酮組相比,中濃度lbp組mda含量顯著降低(p0.05);高、中濃度lbp組sod活力顯著升高(P0.05)。4.枸杞多糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)的影響:與正常對照組相比,IR模型組IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與IR模型組相比,高、中濃度LBP組IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而低濃度LBP組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與羅格列酮組相比,高、中、低濃度LBP組IRS-2、PI3K、Akt、GLUT2蛋白表達(dá)水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:枸杞多糖能改善HepG2細(xì)胞胰島素抵抗,其作用機(jī)制可能與增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力及提高胰島素信號傳導(dǎo)通路相關(guān)蛋白(IRS2、PI3K、Akt、GLUT2)的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：枸杞多糖 2型糖尿病 胰島素抵抗
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要縮語及英文索引11-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 材料與方法17-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-25
• 第3章 結(jié)果25-33
• 3.1 枸杞多糖對HepG2細(xì)胞活性的影響25
• 3.2 枸杞多糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響25-26
• 3.3 枸杞多糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞SOD活力的影響26-27
• 3.4 枸杞多糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞MDA含量的影響27-29
• 3.5 枸杞多糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞IRS-2、PI3K、Akt和GLUT2蛋白表達(dá)的影響29-33
• 第4章 討論33-37
• 第5章 結(jié)論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述 枸杞多糖與糖尿病的研究進(jìn)展43-47
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成、發(fā)表論文情況47-49
• 研究基金資助項(xiàng)目49-51
• 致謝51

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本文編號：902361