本文關鍵詞：尿酸、葡萄糖對小鼠成肌細胞Irisin、GLUT4表達的影響及初步機制探討

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【摘要】：目的:尿酸是嘌呤代謝的最終產物,是體內強大的抗氧化劑,同時在某些因素和條件下,又發(fā)揮著促氧化作用,因此其在機體中的作用非常復雜。臨床研究顯示,尿酸與胰島素抵抗、肥胖、糖尿病等代謝性疾病密切相關,而目前缺乏相關的直接證據。骨骼肌源性胰島素抵抗在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用,其中Irisin是新近發(fā)現的骨骼肌因子,而GLUT4是研究比較充分的葡萄糖轉運蛋白,在胰島素抵抗中起關鍵作用的因子。本研究通過觀察尿酸及葡萄糖刺激小鼠C2C12細胞Irisin、GLUT4表達變化,以初步探討尿酸對骨骼肌胰島素抵抗的作用。方法:體外培養(yǎng)小鼠C2C12細胞,根據不同處理因素分為尿酸組和葡萄糖組:尿酸組共6組:0m M,0.1m M,0.2m M,0.3m M,0.4m M,0.6m M;葡萄糖組共3組:5.5m M,15m M,25m M。處理時間分別為0、24小時、48小時。1.應用RT-qPCR技術、Western Blot技術檢測不同時間點、不同濃度尿酸刺激C2C12后細胞內Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達。2.不同時間點、不同濃度尿酸對C2C12分泌Irisin的影響:應用ELISA技術檢測細胞上清液中的Irisin含量。3.應用RT-qPCR技術、Western Blot技術檢測不同時間點、不同濃度葡萄糖刺激C2C12后細胞內Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達。4.不同時間點、不同濃度葡萄糖對C2C12分泌Irisin的影響:應用ELISA技術檢測細胞上清液中的Irisin含量。5.初步機制探討:應用RT-qPCR技術、Western Blot技術分別檢測尿酸、葡萄糖刺激C2C12細胞PGC-1αm RNA和蛋白的表達水平。6.統(tǒng)計學方法:采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件分析數據。結果用均數±標準差(`x±s)表示。兩組以上比較采用單因素方差分析(ANOVA)。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果:1.尿酸組C2C12細胞內Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達:尿酸處理C2C12細胞24小時及48小時,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表達程度均呈先升高后降低的趨向,在0.3m M時達高峰,隨后降低,24小時處理組趨勢更明顯,與正常對照組相比較,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05)。2.尿酸組C2C12分泌Irisin ELISA檢測結果:不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細胞24小時后,Irisin分泌量先升高后降低,在0.3m M時達高峰,隨后逐漸下降,與正常對照組(NC)相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);以不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細胞48小時后,各處理組Irisin的含量無明顯變化;差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.尿酸組C2C12細胞內PGC-1αm RNA及蛋白表達:不同濃度尿酸處理C2C12細胞24小時及48小時后,PGC-1αm RNA及蛋白的表達水平均呈先升高后降低的趨勢,在0.4m M時達高峰,隨后逐漸下降,24小時處理組趨勢更明顯,與正常對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05)。4.葡萄糖組C2C12細胞內Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達:不同濃度葡萄糖處理C2C12細胞24小時及48小時后,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表達水平均呈逐漸降低的趨勢,與正常對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。5.葡萄糖組C2C12分泌Irisin ELISA結果:以不同濃度葡萄糖處理C2C12細胞24小時及48小時后,Irisin的分泌量逐漸降低,與正常對照組(NC)相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。6.葡萄糖組C2C12細胞內PGC1-αm RNA及蛋白的表達:不同濃度葡萄糖處理小鼠C2C12細胞24小時及48小時后,PGC1-αm RNA及蛋白的表達水平均呈逐漸降低的趨勢,與正常對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。結論:1.尿酸對C2C12細胞表達Irisin、GLUT4的影響具有雙向性,可能通過PGC1-α來進行調節(jié),但具體機制不詳。2.隨著葡萄糖濃度升高及作用時間延長,C2C12細胞表達Irisin、GLUT4的抑制作用增強,PGC1-α可能參與了此過程。
【關鍵詞】：尿酸 葡萄糖 Irisin GLUT4 PGC-1α 胰島素抵抗
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-16
• 研究現狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、對象與方法16-31
• 1.1 研究對象16
• 1.2 主要試劑及配制16-20
• 1.2.1 主要試劑16-17
• 1.2.2 主要試劑配制17-20
• 1.3 主要儀器20-21
• 1.4 實驗方法21-30
• 1.4.1 小鼠C2C12細胞培養(yǎng)21-22
• 1.4.2 實驗分組22-23
• 1.4.3 ELISA法檢測C2C12細胞Irisin含量23-24
• 1.4.4 RT-qPCR檢測各組細胞Irisin、GLUT4及PGC-1α mRNA的表達情況24-26
• 1.4.5 Western blot檢測各組細胞Irisin、GLUT4及PGC-1α蛋白的表達情況26-30
• 1.5 統(tǒng)計學方法30-31
• 二、結果31-47
• 2.1 C2C12細胞誘導分化成熟圖31-32
• 2.2 尿酸刺激C2C12細胞Irisin mRNA的表達32-33
• 2.3 尿酸刺激C2C12細胞Irisin分泌變化33-34
• 2.4 尿酸刺激C2C12細胞Irisin蛋白的表達34-35
• 2.5 尿酸刺激C2C12細胞GLUT4mRNA的表達35-36
• 2.6 尿酸刺激C2C12細胞GLUT4蛋白的表達36-37
• 2.7 尿酸刺激C2C12細胞PGC-1αmRNA的表達37-38
• 2.8 尿酸刺激C2C12細胞PGC-1α蛋白的表達38-40
• 2.9 葡萄糖刺激C2C12細胞IrisinmRNA的表達40-41
• 2.10 葡萄糖刺激C2C12細胞Irisin分泌的變化41
• 2.11 葡萄糖刺激C2C12細胞Irisin蛋白的表達41-43
• 2.12 葡萄糖刺激C2C12細胞GLUT4mRNA的表達43
• 2.13 葡萄糖刺激C2C12細胞GLUT4蛋白的表達43-45
• 2.14 葡萄糖刺激C2C12細胞PGC-1αmRNA的表達45
• 2.15 葡萄糖刺激C2C12細胞PGC-1α蛋白的表達45-47
• 三、討論47-54
• 3.1 骨骼肌源性因子與胰島素抵抗47-51
• 3.2 尿酸的復雜作用51
• 3.3 尿酸與胰島素抵抗51-54
• 結論54-55
• 參考文獻55-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明61-62
• 附錄62-64
• 綜述 尿酸與胰島素抵抗64-75
• 綜述參考文獻71-75
• 致謝75-76
• 個人簡歷76

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1 林聽寶;;測定血清和尿液中尿酸的新的酶促法[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;1982年01期

2 劉廣楨,陳建華,王e，

本文編號：891264