本文關(guān)鍵詞：尿酸、葡萄糖對(duì)小鼠成肌細(xì)胞Irisin、GLUT4表達(dá)的影響及初步機(jī)制探討

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【摘要】：目的:尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物,是體內(nèi)強(qiáng)大的抗氧化劑,同時(shí)在某些因素和條件下,又發(fā)揮著促氧化作用,因此其在機(jī)體中的作用非常復(fù)雜。臨床研究顯示,尿酸與胰島素抵抗、肥胖、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān),而目前缺乏相關(guān)的直接證據(jù)。骨骼肌源性胰島素抵抗在疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用,其中Irisin是新近發(fā)現(xiàn)的骨骼肌因子,而GLUT4是研究比較充分的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在胰島素抵抗中起關(guān)鍵作用的因子。本研究通過(guò)觀察尿酸及葡萄糖刺激小鼠C2C12細(xì)胞Irisin、GLUT4表達(dá)變化,以初步探討尿酸對(duì)骨骼肌胰島素抵抗的作用。方法:體外培養(yǎng)小鼠C2C12細(xì)胞,根據(jù)不同處理因素分為尿酸組和葡萄糖組:尿酸組共6組:0m M,0.1m M,0.2m M,0.3m M,0.4m M,0.6m M;葡萄糖組共3組:5.5m M,15m M,25m M。處理時(shí)間分別為0、24小時(shí)、48小時(shí)。1.應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度尿酸刺激C2C12后細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達(dá)。2.不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度尿酸對(duì)C2C12分泌Irisin的影響:應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清液中的Irisin含量。3.應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度葡萄糖刺激C2C12后細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達(dá)。4.不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度葡萄糖對(duì)C2C12分泌Irisin的影響:應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清液中的Irisin含量。5.初步機(jī)制探討:應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)尿酸、葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞PGC-1αm RNA和蛋白的表達(dá)水平。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(`x±s)表示。兩組以上比較采用單因素方差分析(ANOVA)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.尿酸組C2C12細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達(dá):尿酸處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí),Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表達(dá)程度均呈先升高后降低的趨向,在0.3m M時(shí)達(dá)高峰,隨后降低,24小時(shí)處理組趨勢(shì)更明顯,與正常對(duì)照組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。2.尿酸組C2C12分泌Irisin ELISA檢測(cè)結(jié)果:不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細(xì)胞24小時(shí)后,Irisin分泌量先升高后降低,在0.3m M時(shí)達(dá)高峰,隨后逐漸下降,與正常對(duì)照組(NC)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);以不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細(xì)胞48小時(shí)后,各處理組Irisin的含量無(wú)明顯變化;差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.尿酸組C2C12細(xì)胞內(nèi)PGC-1αm RNA及蛋白表達(dá):不同濃度尿酸處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,PGC-1αm RNA及蛋白的表達(dá)水平均呈先升高后降低的趨勢(shì),在0.4m M時(shí)達(dá)高峰,隨后逐漸下降,24小時(shí)處理組趨勢(shì)更明顯,與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。4.葡萄糖組C2C12細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4m RNA及蛋白表達(dá):不同濃度葡萄糖處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,Irisin、GLUT4m RNA及蛋白的表達(dá)水平均呈逐漸降低的趨勢(shì),與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.01)。5.葡萄糖組C2C12分泌Irisin ELISA結(jié)果:以不同濃度葡萄糖處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,Irisin的分泌量逐漸降低,與正常對(duì)照組(NC)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。6.葡萄糖組C2C12細(xì)胞內(nèi)PGC1-αm RNA及蛋白的表達(dá):不同濃度葡萄糖處理小鼠C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,PGC1-αm RNA及蛋白的表達(dá)水平均呈逐漸降低的趨勢(shì),與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.01)。結(jié)論:1.尿酸對(duì)C2C12細(xì)胞表達(dá)Irisin、GLUT4的影響具有雙向性,可能通過(guò)PGC1-α來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié),但具體機(jī)制不詳。2.隨著葡萄糖濃度升高及作用時(shí)間延長(zhǎng),C2C12細(xì)胞表達(dá)Irisin、GLUT4的抑制作用增強(qiáng),PGC1-α可能參與了此過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：尿酸 葡萄糖 Irisin GLUT4 PGC-1α 胰島素抵抗
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、對(duì)象與方法16-31
• 1.1 研究對(duì)象16
• 1.2 主要試劑及配制16-20
• 1.2.1 主要試劑16-17
• 1.2.2 主要試劑配制17-20
• 1.3 主要儀器20-21
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法21-30
• 1.4.1 小鼠C2C12細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 1.4.2 實(shí)驗(yàn)分組22-23
• 1.4.3 ELISA法檢測(cè)C2C12細(xì)胞Irisin含量23-24
• 1.4.4 RT-qPCR檢測(cè)各組細(xì)胞Irisin、GLUT4及PGC-1α mRNA的表達(dá)情況24-26
• 1.4.5 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞Irisin、GLUT4及PGC-1α蛋白的表達(dá)情況26-30
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法30-31
• 二、結(jié)果31-47
• 2.1 C2C12細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟圖31-32
• 2.2 尿酸刺激C2C12細(xì)胞Irisin mRNA的表達(dá)32-33
• 2.3 尿酸刺激C2C12細(xì)胞Irisin分泌變化33-34
• 2.4 尿酸刺激C2C12細(xì)胞Irisin蛋白的表達(dá)34-35
• 2.5 尿酸刺激C2C12細(xì)胞GLUT4mRNA的表達(dá)35-36
• 2.6 尿酸刺激C2C12細(xì)胞GLUT4蛋白的表達(dá)36-37
• 2.7 尿酸刺激C2C12細(xì)胞PGC-1αmRNA的表達(dá)37-38
• 2.8 尿酸刺激C2C12細(xì)胞PGC-1α蛋白的表達(dá)38-40
• 2.9 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞IrisinmRNA的表達(dá)40-41
• 2.10 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞Irisin分泌的變化41
• 2.11 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞Irisin蛋白的表達(dá)41-43
• 2.12 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞GLUT4mRNA的表達(dá)43
• 2.13 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞GLUT4蛋白的表達(dá)43-45
• 2.14 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞PGC-1αmRNA的表達(dá)45
• 2.15 葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞PGC-1α蛋白的表達(dá)45-47
• 三、討論47-54
• 3.1 骨骼肌源性因子與胰島素抵抗47-51
• 3.2 尿酸的復(fù)雜作用51
• 3.3 尿酸與胰島素抵抗51-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明61-62
• 附錄62-64
• 綜述 尿酸與胰島素抵抗64-75
• 綜述參考文獻(xiàn)71-75
• 致謝75-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷76

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林聽(tīng)寶;;測(cè)定血清和尿液中尿酸的新的酶促法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);1982年01期

2 劉廣楨,陳建華,王e，

本文編號(hào)：891264