本文關(guān)鍵詞：枸杞多糖通過PPARγ調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞功能的機(jī)制研究

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【摘要】：目的近年來,隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及生活方式的改變,肥胖的發(fā)生率在全球范圍內(nèi)迅速增加,尤其我國肥胖率在2014年已高達(dá)11%。肥胖屬于一種代謝綜合征,往往引起2型糖尿病、心血管疾病、非酒精性脂肪肝及高血壓等的發(fā)生,嚴(yán)重威脅人類的健康。越來越多的學(xué)者關(guān)注肥胖形成的機(jī)制研究,發(fā)現(xiàn)過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activated receptorsγ,PPARγ)在肥胖的發(fā)生與發(fā)展中起著關(guān)鍵性作用。已證實(shí)PPARγ屬于配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子,在脂肪生成、脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用,并且在能量代謝調(diào)節(jié)中扮演著重要的角色。我們課題組前期通過形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)可以明顯減小高脂喂養(yǎng)小鼠模型中脂肪細(xì)胞的大小。因此,我們提出假設(shè),LBP是否通過PPARγ改善高脂誘導(dǎo)的肥胖及其可能的分子作用機(jī)制。方法1.懫用高脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6小鼠建立體內(nèi)肥胖模型,選取40只雄性C57BL/6小鼠(周齡:6-8周;體重:18-20克),隨機(jī)分為4組:普食組、高脂組、100 mg/kg LBP+高脂組及200 mg/kg LBP+高脂組。每周監(jiān)測(cè)體重、飲食及飲水量,持續(xù)喂養(yǎng)24周,禁食8小時(shí),收集血清及腹部白色脂肪組織,通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、熒光實(shí)時(shí)定量PCR(q RT-PCR)等方法檢測(cè)肥胖相關(guān)的生理生化指標(biāo)。2.采用棕櫚酸(palmitic acid,PA)孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞建立體外肥胖模型。首先,將3T3-L1前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,采用100μg/m L,300μg/m L,600μg/m L,900μg/m L LBP孵育成熟的脂肪細(xì)胞24小時(shí),蛋白免疫印跡(western blot)技術(shù)分析磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(P-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)、磷酸化AKT(P-AKT)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(P-JNK)、PPARγ及磷酸化PPARγ(P-PPARγ)的表達(dá)水平。3.肥胖脂肪細(xì)胞模型中,采用10μM PI3K/AKT信號(hào)通路抑制劑-LY294002孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞1小時(shí);采用20μM JNK信號(hào)通路抑制劑-SP600125孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞1小時(shí);采用10μM PPARγ激動(dòng)劑-羅格列酮(rosiglitazone)孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞12小時(shí),收集細(xì)胞全蛋白,western blot檢測(cè)P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-PPARγ/PPARγ的表達(dá)水平。采用AKT或JNK小分子干擾RNA(small interfering RNA,si RNA)轉(zhuǎn)染成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞24小時(shí),western blot檢測(cè)P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-PPARγ/PPARγ的表達(dá)水平。結(jié)果1.C57BL/6小鼠及3T3-L1脂肪細(xì)胞的肥胖模型經(jīng)LBP干預(yù)后,各項(xiàng)肥胖指標(biāo)均顯著下降。2.3T3-L1脂肪細(xì)胞的肥胖模型中,P-PPARγ和P-AKT含量降低,P-JNK含量增加。經(jīng)LBP干預(yù)后,P-PPARγ和P-AKT含量增加,P-JNK含量降低。3.3T3-L1脂肪細(xì)胞的肥胖模型加入PI3K/AKT抑制劑LY294002或轉(zhuǎn)染AKT si RNA后,AKT和P-PPARγ表達(dá)均降低。另外加入JNK抑制劑SP600125或轉(zhuǎn)染JNK si RNA后,JNK和P-PPARγ表達(dá)均降低。結(jié)論1.LBP具有改善肥胖的作用。2.LBP通過活化PI3K/AKT通路,抑制JNK磷酸化的表達(dá)來增強(qiáng)P-PPARγ的表達(dá)。3.LBP通過抑制PPARγ活性減少脂肪的生成,從而改善肥胖。
【關(guān)鍵詞】：LBP PPARγ 肥胖 PI3K/AKT JNK
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英漢縮略語對(duì)照9-11
• 前言11-14
• 第一章 LBP改善高脂誘導(dǎo)的C57BL/6 小鼠肥胖14-26
• 材料與方法14-19
• 結(jié)果19-21
• 附表21-24
• 討論24-26
• 第二章 LBP通過PPARγ 改善棕櫚酸誘導(dǎo)的 3T3-L1脂肪肥胖模型及機(jī)制研究26-44
• 材料與方法26-36
• 結(jié)果36-38
• 附表38-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• PPARγ 與肥胖的研究進(jìn)展綜述48-58
• 綜述參考文獻(xiàn)54-58
• 致謝58-59
• 碩士期間發(fā)表的論文59

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本文編號(hào)：877576