發(fā)布時間：2017-09-18 14:43

  本文關(guān)鍵詞：氟化鈉對人成骨細(xì)胞CyclinD1基因啟動子區(qū)甲基化及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建人原代成骨細(xì)胞氟中毒模型,檢測不同劑量氟化鈉對人成骨細(xì)胞中CyclinD1基因啟動子區(qū)甲基化、mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)的影響,從細(xì)胞周期調(diào)控基因的表觀遺傳學(xué)角度探索氟中毒發(fā)生機(jī)制。方法在知情同意原則下,收集貴州航空工業(yè)集團(tuán)貴陽醫(yī)院骨科外傷手術(shù)健康人(車禍)髂骨或股骨松質(zhì)骨。采用酶消化法分離人原代成骨細(xì)胞,以堿性磷酸酶及鈣化結(jié)節(jié)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定;以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化鈉處理細(xì)胞72 h。以硫化測序PCR法(bisulfite sequencing PCR,BSP)檢測CyclinD1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài);以實時熒光定量PCR(QT-PCR)檢測CyclinD1基因轉(zhuǎn)錄mRNA相對表達(dá)量;以免疫印跡法(Western-blotting)檢測CyclinD1蛋白表達(dá)。結(jié)果分別以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化鈉處理細(xì)胞72 h后,CyclinD1基因啟動子區(qū)未檢測到甲基化;CyclinD1基因mRNA轉(zhuǎn)錄相對表達(dá)量在0、125、250、500及1 000μmol/L Na F劑量組分別為0.414±0.093、0.742±0.089、0.796±0.122、1.114±0.260、1.140±0.171,NaF劑量組均高于對照組(F=18.89,P0.05)。CyclinD1蛋白相對表達(dá)量分別為0.304±0.014、0.395±0.020、0.511±0.042、0.565±0.028、0.719±0.047,NaF劑量組均高于對照組(F=71.80,P0.05)。CyclinD1基因轉(zhuǎn)錄mRNA及其蛋白表達(dá)隨氟化鈉劑量的升高均相應(yīng)上升(P0.05)。結(jié)論氟化鈉上調(diào)人成骨細(xì)胞中CyclinD1基因轉(zhuǎn)錄與表達(dá),是氟致人成骨細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞周期時相分布發(fā)生改變的重要分子機(jī)制之一,但未觀察到CyclinD1基因啟動子區(qū)甲基化參與其表達(dá)上調(diào)過程。
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部省部共建重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 氟 人成骨細(xì)胞 CyclinD基因 DNA甲基化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81260418) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長基金(黔省專合字[2011]54號)
【分類號】：R599.1
【正文快照】： 地方性氟中毒(以下簡稱地氟病)是我國最為嚴(yán)重的重點地方病之一。煤炭資源豐富的地區(qū),如貴州、陜西等成為受燃煤污染型地氟病影響最為嚴(yán)重的省份之一[1]。氟中毒影響全身,其中骨組織損害(氟骨癥)是主要病變之一。氟骨癥病變復(fù)雜多樣,主要是骨形成和骨吸收平衡被破壞,成骨活躍

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本文編號：876170