本文關(guān)鍵詞：非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清miRNA表達(dá)譜的分析

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【摘要】：目的：通過分析糖尿病視網(wǎng)膜病變非增殖期(NPDR)患者和糖尿病無視網(wǎng)膜病變(NDR)患者血清miRNA表達(dá)譜的差異,尋找NPDR患者特異性血清miRNA,為糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)的早期診斷提供生物標(biāo)志物,并為進(jìn)一步探討miRNA在DR發(fā)病機(jī)制中的作用提供理論依據(jù)。方法：根據(jù)眼底熒光血管造影結(jié)果選取30例2型糖尿病非增殖期視網(wǎng)膜病變(NPDR)患者為實(shí)驗(yàn)組,男11例,女19例,30例2型糖尿病無視網(wǎng)膜病變(NDR)患者為對照組,男12例,女18例。采用μ ParafloTM miRNA微流體芯片技術(shù)檢測并篩選出兩組患者血清中表達(dá)差異顯著的rniRNAs。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)驗(yàn)證芯片結(jié)果,確定目的miRNAs。 Pearson法分析目的miRNAs的血清表達(dá)量與血糖、血脂的相關(guān)性。應(yīng)用PicTar, TargetScan與MiRanda軟件綜合預(yù)測目的miRNAs的靶基因,取三款軟件的交集作為最終靶基因。結(jié)果：1.兩組患者的年齡、性別、BMI、血壓、UAER、 FBG、糖尿病病程、ABI、 PWV相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與NDR組相比,NPDR組的TG、TC、HbAIC明顯增高(P0.05)。2.建立了NPDR患者血清miRNA表達(dá)譜。與NDR對照相比,NPDR患者血清中miR-19a, miR-29c, miR-4659b, miR-144表達(dá)明顯上調(diào)(分別為2.09倍、2.34倍、5.46倍、1.01倍),miR-6837, miR-449c,-miR-3139, miR-3944, hsvl-miR-H15表達(dá)顯著降低(分別為10.18倍、12.59倍、10.48倍、2.07倍、1.26倍)。3.在獨(dú)立的30例M NPDR和30例NDR患者血清樣本中進(jìn)行差異表達(dá)顯著的miRNAs的定量PCR檢測,選取NPD R患者血清中表達(dá)上調(diào)的niR-19a, miR-29c, miR-4659b及miR-144進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：NPD R患者血清中miR-19a, miR-29c, miR-4659b的表達(dá)明顯上調(diào),與NDR組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z值分別為：-4.184,-4.45,-2.794,雙側(cè)P均0.05),與芯片結(jié)果相符。1niR-144 Cq值半數(shù)以上超出35,提示血清中表達(dá)量較低,后續(xù)試驗(yàn)中排除。4. Pearson相關(guān)性分析顯示：血清miR-19a的相對表達(dá)量與高密度脂蛋白(HDL)水平顯著正相關(guān)(r=0.302,P0.05),顯示隨HDL值升高,血清miR-19a的表達(dá)量顯著增加；血清miR-29c, miR-4659b的相對表達(dá)量與HbA1C值顯著正相關(guān)(r分別為0.379,0.350,P均0.05),顯示隨HbA1C值升高,血清miR-29c, miR-4659b 的表達(dá)量明顯增加。5.受試者工作曲線(ROC)曲線分析顯示：miR-19a, miR-29c, miR-4659b的曲線下面積(AUC)分別為：0.814,0.834,0.710,均大于0.7,表明這3個miRNAs對診斷NPDR均有一定的價值,其中miR-29c的AUC面積大于miR-19a和miR-4659b的AUC,表明血清miR-29c對診斷NPDR的敏感度和特異度較高。6.生物信息學(xué)分析：通過靶基因軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn),miR-19a調(diào)控PIK3CA, PAFAH2, CR2,TFPI, IL20等靶點(diǎn),廣泛參與VEGF信號通路、ErbB信號通路、脂類代謝、細(xì)胞凋亡等。miR-29c調(diào)控AKT2, LAMA2, MDM2, PMID,CYCS, MAP4KA等靶點(diǎn),廣泛參與MAPK信號通路、胰島素信號通路、細(xì)胞因子及受體的相互作用、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用、p53信號通路等。MiR-4659b調(diào)控ADCY6, CXCL5, TSC1, IL11,EDA2R等靶點(diǎn),廣泛參與間隙連接,血管平滑肌收縮、胰島素信號通路、mTOR信號通路、細(xì)胞因子及受體的相互作用。結(jié)論：1.NPDR患者血清miR-19a, miR-29c, miR-4659b高表達(dá)。ROC曲線分析提示這3種miRNAs對NPDR的診斷有一定的價值。2.血清miR-19a的表達(dá)量與HDL水平呈正相關(guān),miR-29c, miR-4659b的表達(dá)量與HbAlC值顯著正相關(guān)。3. NPDR患者特異性血清niR-19a, miR-29c, miR-4659b可能通過調(diào)控糖、脂代謝、VEGF等各種細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)增生、細(xì)胞凋亡等,廣泛參與了DR的發(fā)生發(fā)展4.血清miR-19a, miR-29c, miR-4659b極有可能作為早期診斷DR的生物標(biāo)記物。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R774.1;R587.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-16
• 文獻(xiàn)綜述16-21
• 材料與方法21-30
• 結(jié)果30-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 致謝54-55
• 作者簡介55

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