本文關(guān)鍵詞：miR-24對糖尿病大鼠頸動脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的影響及機制研究

  更多相關(guān)文章： miR-24 糖尿病 頸動脈 球囊損傷 抑制 細胞增殖 內(nèi)膜增生

【摘要】：目的:研究過表達miR-24對糖尿病大鼠頸動脈球囊損傷后內(nèi)膜增生的影響,并探討其分子機制。方法:將60只SPF級雄性SD大鼠(約170g)喂以高糖高脂飼料4周,繼以小劑量鏈脲佐菌素(STZ,45mg/kg)單次腹腔注射,STZ注射3d/7d后,尾靜脈測大鼠空腹血糖,評價糖尿病大鼠模型(空腹血糖≥16.7 mmol/L,造模成功)。誘導建立的糖尿病大鼠隨機分為4組(n=12):假手術(shù)組(Sham組);頸動脈球囊損傷+生理鹽水注射組(PBS組);頸動脈球囊損傷+Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組(Ad-Scramble組);頸動脈球囊損傷+Ad-miR-24轉(zhuǎn)染組(Ad-miR-24組)。將重組腺病毒載體或生理鹽水在體轉(zhuǎn)染球囊損傷后的大鼠頸總動脈,14天后處死動物,進行相關(guān)指標檢測。免疫熒光檢測腺病毒轉(zhuǎn)染效率,Real-time PCR法測定轉(zhuǎn)染基因miR-24的表達水平;HE評估血管損傷后新生內(nèi)膜增生程度;免疫組化及Western blot檢測損傷血管處增殖核抗原(PCNA)含量,以評價血管平滑肌細胞(VSMCs)增殖情況;Western blot檢測Wnt4相關(guān)信號通路Wnt4、Dvl-1、β-catenin、CyclinD1、p21蛋白表達;Real time PCR檢測CyclinD1、p21的基因表達水平。結(jié)果:(1)STZ注射3d/7d后,大鼠空腹血糖明顯升高,且≥16.7 mmol/L。(2)重組腺病毒載體Ad-miR-24轉(zhuǎn)染糖尿病大鼠頸總動脈14天后,免疫熒光檢測到GFP的表達,同時Real time PCR檢測證實,轉(zhuǎn)染基因miR-24在頸總動脈成功過表達。(3)與Sham組相比,PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組內(nèi)膜增生嚴重,血管腔呈向心或偏心性狹窄,新生內(nèi)膜平滑肌細胞排列紊亂;Ad-miR-24轉(zhuǎn)染組內(nèi)膜增生程度明顯減輕,管腔狹窄不明顯。與PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組比較,Ad-miR-24轉(zhuǎn)染組頸總動脈新生內(nèi)膜面積、內(nèi)膜和中膜面積比(I/M)均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而各組中膜面積無統(tǒng)計學差異(P0.05)。(4)PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組在球囊損傷后第14d,免疫組化檢測可見新生內(nèi)膜中大量的PCNA陽性表達細胞,而Ad-miR-24轉(zhuǎn)染組中PCNA陽性細胞數(shù)較少。與PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組比較,過表達miR-24可明顯抑制新生內(nèi)膜PCNA陽性表達指數(shù)(P0.05)。同時,Western blot檢測結(jié)果顯示PCNA蛋白的表達情況與上述免疫組化結(jié)果一致。(5)與Sham組相比,PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組Wnt4、Dvl-1、β-catenin表達均顯著增加(P0.05);而Ad-miR-24轉(zhuǎn)染組中以上Wnt4通路相關(guān)的蛋白分子表達量顯著降低(P0.05)。PBS組與Ad-Scramble組相比,以上蛋白分子的表達無統(tǒng)計學差異(P0.05)。(6)與Sham組相比,PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組中促增殖分子CyclinD1基因和蛋白表達水平均顯著增加(P0.05)。相反,抗增殖分子p21在基因和蛋白水平上均顯著降低(P0.05);與PBS組和Ad-Scramble轉(zhuǎn)染組相比,Ad-miR-24組中CyclinD1的基因和蛋白表達水平均顯著降低(P0.05),而p21的基因和蛋白水平上均顯著增加(P0.05)。PBS組與Ad-Scramble組相比,CyclinD1、p21基因和蛋白表達均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結(jié)論:(1)Ad-miR-24重組腺病毒成功轉(zhuǎn)染糖尿病大鼠血管組織,可顯著提高轉(zhuǎn)染基因miR-24表達。(2)miR-24過表達可通過抑制Wnt4/Dvl-1/β-catenin信號通路發(fā)揮抗VSMCs增殖,減輕糖尿病大鼠頸動脈球囊損傷后新生內(nèi)膜的增生。
【關(guān)鍵詞】：miR-24 糖尿病 頸動脈 球囊損傷 抑制 細胞增殖 內(nèi)膜增生
【學位授予單位】：三峽大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 內(nèi)容摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞表9-11
• 引言11-15
• 材料與方法15-23
• 結(jié)果23-29
• 第一部分：糖尿病大鼠模型的建立23
• 第二部分：糖尿病大鼠頸動脈球囊損傷模型的建立及腺病毒轉(zhuǎn)染23-24
• 第三部分：腺病毒轉(zhuǎn)染大鼠頸動脈后轉(zhuǎn)染基因mi R-24 的表達24
• 第四部分：HE評估球囊損傷血管后新生內(nèi)膜的增生程度24-25
• 第五部分：免疫組化及Western blot測定新生內(nèi)膜中細胞增殖情況25-26
• 第六部分：mi R-24 對Wnt4/Dvl-1/β-catenin信號通路相關(guān)分子表達的影響26-27
• 第七部分：mi R-24 對細胞周期相關(guān)分子Cyclin D1及p21表達的影響27-29
• 討論29-31
• 小結(jié)31-32
• 不足之處32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-41
• 參考文獻38-41
• 后記41-42
• 附錄42-43

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本文編號：850066