發(fā)布時間：2017-09-13 02:10

  本文關(guān)鍵詞：雷公藤多苷對大鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的時間治療學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 雷公藤多苷 大鼠 時間治療 晝夜節(jié)律 細(xì)胞因子

【摘要】：目的在觀察膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠相關(guān)炎性細(xì)胞因子晝夜節(jié)律特點(diǎn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步觀察TG對CIA大鼠炎性因子晝夜節(jié)律的影響以及甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)、來氟米特(leflunomide,LEF)、TG對CIA大鼠時間治療作用及其機(jī)制,為臨床的應(yīng)用提供實驗室依據(jù)。方法1實驗分組及處理1.1第一部分:雌性Wistar大鼠80只置于時間生物學(xué)實驗室,固定光照(L)∶黑暗(D)時間(L∶D=12∶12,明期為07:00~19:00,暗期為19:00~07:00)。將80只隨機(jī)分入空白組30只,模型組50只。適應(yīng)飼養(yǎng)10天后建立CIA模型,觀察造模21d后,記錄成模大鼠踝關(guān)節(jié)和足爪腫脹度。第42d,分別于授時時間(zeitgeber time,ZT,以ZT0為光照開始)ZT2、ZT6、ZT10、ZT14、ZT18、ZT22,6個不同時間點(diǎn)分別平均處死大鼠,采血、留取病變關(guān)節(jié)。1.2第二部分:雌性Wistar大鼠120只置于時間生物學(xué)實驗室,固定光照(L)∶黑暗(D)時間(L∶D=12∶12,明期為07:00~19:00,暗期為19:00~07:00),自由攝食飲水。將60只大鼠按照大鼠藥物干預(yù)時間不同,分為授時時間TG-ZT6組與TG-ZT18組,每組60只。適應(yīng)飼養(yǎng)10天后建立CIA模型,觀察造模21d后,選取成模CIA大鼠開始進(jìn)行藥物干預(yù),TG組灌胃(40mg/kg),每日給藥。記錄大鼠踝關(guān)節(jié)和足爪腫脹度。藥物干預(yù)42d,分別于ZT2、ZT6、ZT10、ZT14、ZT18、ZT22,6個不同時間點(diǎn)分別平均處死大鼠,采血、留取病變關(guān)節(jié)。1.3第三部分:雌性Wistar大鼠120只置于時間生物學(xué)實驗室,固定光照(L)∶黑暗(D)時間(L∶D=12∶12,明期為07:00~19:00,暗期為19:00~07:00)。隨機(jī)將標(biāo)記大鼠分入空白組8只,模型組16只,雷公藤多苷組(TG)32只,甲氨蝶呤組(MTX)32只,來氟米特組(LEF)32只。適應(yīng)飼養(yǎng)10d后建立CIA模型,觀察造模21d后,選取成模CIA大鼠開始進(jìn)行藥物干預(yù),MTX組灌胃(0.1mg/kg),TG組灌胃(40mg/kg),LEF組灌胃(2mg/kg),空白組與模型組均以等量3%羧甲基纖維素鈉灌胃。MTX隔日給藥,其余藥物均為1/日,持續(xù)給藥42d。記錄CIA模型大鼠踝關(guān)節(jié)和足爪腫脹度。干預(yù)結(jié)束后,采血、留取病變關(guān)節(jié)。2實驗方法2.1每3d使用游標(biāo)卡尺法測量大鼠踝關(guān)節(jié)直徑和足爪厚度。2.2 ELISA方法檢測大鼠血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及白介素-17a(interleukin-17a,IL-17a)表達(dá)水平。2.3免疫組織化學(xué)方法檢測病變關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞IL-6、IL-17a、基質(zhì)金屬蛋白酶-3(matrix matallprotein-3,MMP-3)、TNF-α、CLOCK及BMAL1表達(dá)水平;顯微鏡下觀察組織病理形態(tài)。2.4藥物干預(yù)41d拍雙足爪X線正位片,觀察影像學(xué)進(jìn)展。2.5各組正態(tài)分布計量資料數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)((?)±s)差表示。組間差異采用多樣本均數(shù)的方差分析進(jìn)行判斷,兩兩均數(shù)比較采用t檢驗進(jìn)行判斷。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1 CIA大鼠相關(guān)炎性因子晝夜節(jié)律特點(diǎn)1.1各組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度變化CIA大鼠隨著造模時間的延長,關(guān)節(jié)腫脹度呈現(xiàn)先逐漸增加,后緩慢降低的趨勢。模型組CIA大鼠初次免疫33d時,踝關(guān)節(jié)腫脹最為嚴(yán)重;初次免疫39d時,掌指關(guān)節(jié)腫脹最為嚴(yán)重。1.2CIA大鼠模型血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量各個時間點(diǎn)CIA大鼠模型血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量各不相同�？瞻捉M大鼠一晝夜內(nèi)IL-17a、IL-6及TNF-α血清水平穩(wěn)定;IL-17a、IL-6及TNF-α三種炎性因子在一晝夜內(nèi)呈現(xiàn)相近的波動特點(diǎn):夜晚血清含量水平升高,白天血清水平降低。其中IL-17a在ZT18開始上升,并且于ZT22達(dá)到峰值;在ZT2開始下降,并且于ZT6達(dá)到谷值。IL-6在ZT14開始上升,并且于ZT22達(dá)到峰值;在ZT2開始下降,并且于ZT6進(jìn)入平臺期。TNF-α在ZT14開始上升,并且于ZT22達(dá)到峰值;在ZT2開始下降,并且于ZT6進(jìn)入谷值。1.3各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察各組大鼠踝關(guān)節(jié)X線攝片結(jié)果差異較大。其中空白組大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面清晰,掌指關(guān)節(jié)骨皮質(zhì)完整,關(guān)節(jié)間隙未見異常。模型組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面模糊,骨缺損明顯,掌指關(guān)節(jié)可見大塊骨缺損,關(guān)節(jié)間隙改變。1.4各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色及免疫組織化學(xué)觀察空白組大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜平滑,1-2層滑膜細(xì)胞,無乳突狀突起或增生,未見多核細(xì)胞浸潤。模型組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜細(xì)胞增生嚴(yán)重,乳突狀凸起,大量炎細(xì)胞浸潤。通過免疫組織化學(xué)檢測觀察發(fā)現(xiàn)模型組大鼠滑膜細(xì)胞IL-17a、IL-6、TNF-α、MMP-3、CLOCK及BMAL1表達(dá)量均明顯高于空白組表達(dá)。2雷公藤多苷對CIA大鼠相關(guān)炎性因子晝夜節(jié)律的影響2.1各組CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度值變化干預(yù)42d各組CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化各不相同,隨著造模時間的延長,CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度逐漸增加。兩時間治療組相比較,觀察第42d TG-ZT18組踝關(guān)節(jié)直徑及足爪厚度腫脹抑制程度顯著優(yōu)于TG-ZT6組(P0.05),在持續(xù)觀察時間內(nèi),TG-ZT18足爪厚度變化曲線始終位于TG-ZT6組曲線之下。2.2各組CIA大鼠血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量干預(yù)42d各時間治療組CIA大鼠血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量各不相同。與TG-ZT6組比較,TG-ZT18組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量明顯降低(P0.05)。2.3各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察兩組大鼠踝關(guān)節(jié)X線攝片結(jié)果有明顯不同。TG-ZT6組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)破壞,關(guān)節(jié)面模糊,部分關(guān)節(jié)可見骨缺損。TG-ZT18組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面尚可見,左足改變較輕,少部分掌指關(guān)節(jié)骨破壞,關(guān)節(jié)間隙輕度改變。2.4各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色及免疫組織化學(xué)觀察TG-ZT6組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜細(xì)胞增生,乳突狀凸起,大量炎細(xì)胞浸潤;TG-ZT18組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜細(xì)胞增生較輕,乳突狀凸起,少量炎細(xì)胞浸潤。免疫組織化學(xué)檢測觀察發(fā)現(xiàn)TG-ZT18組大鼠滑膜細(xì)胞IL-17a、IL-6、TNF-α、MMP-3、CLOCK及BMAL1表達(dá)量均明顯高于TG-ZT6組表達(dá)。3 MTX、LEF和TG對CIA大鼠時間治療及其機(jī)制3.1各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度值變化干預(yù)42d各組CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度變化各不相同。與模型組相比較,MTX組、LEF組及TG組腫脹度均明顯下降(P0.05);其中踝關(guān)節(jié)腫脹度以MTX下降最為明顯,足爪厚度以LEF組下降最為明顯。干預(yù)第42d MTX-ZT18組腫脹度明顯低于MTX-ZT 6組(P0.05),干預(yù)第21d之后MTX-ZT 18組整體腫脹度曲線在MTX-ZT 6之下;干預(yù)第42d,與TG-ZT 6組相比較,TG-ZT 18組腫脹度也顯著降低(P0.05),但是TG-ZT 6組起效較慢,而TG-ZT 18組變化趨勢整體在TG-ZT6組之下;干預(yù)第42d,LEF-ZT 6組與LEF-ZT18組相比較,無顯著差異(P0.05)。3.2各組CIA大鼠血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量干預(yù)42d各時間治療組CIA大鼠血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量各不相同。與模型組比較,兩MTX時間治療組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量均顯著下降(P0.05);與MTX-ZT6比較,MTX-ZT18組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量明顯降低(P0.05)。與模型組比較,兩LEF時間治療組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量均顯著下降(P0.05),與LEF-ZT6組相比較,LEF-ZT18組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量均無顯著差異(P0.05)。與模型組比較,TG-ZT18組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量明顯下降(P0.05),TG-ZT6組與模型組相比較血清IL-6與TNF-α含量明顯降低(P0.05),血清IL-17a水平卻與模型組比較無顯著差異(P0.05);與TG-ZT6組比較,TG-ZT18組血清IL-17a、IL-6及TNF-α含量明顯降低(P0.05)。3.3各組大鼠踝關(guān)節(jié)X線攝片各組大鼠踝關(guān)節(jié)X線攝片結(jié)果差異較大。其中正常組大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面清晰,掌指關(guān)節(jié)骨皮質(zhì)完整,關(guān)節(jié)間隙未見異常。模型組CIA踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面模糊,骨缺損明顯,掌指關(guān)節(jié)可見大塊骨缺損,關(guān)節(jié)間隙改變。MTX-ZT6組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)破壞,關(guān)節(jié)面模糊,部分掌指關(guān)節(jié)可見骨缺損。MTX-ZT18組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面尚可見,左足改變較輕,少部分掌指關(guān)節(jié)骨破壞,關(guān)節(jié)間隙輕度改變。LEF-ZT6組與LEF-ZT18組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面均可見,未見明顯骨破壞。TG-ZT6組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)破壞,關(guān)節(jié)面模糊,部分關(guān)節(jié)可見骨缺損。TG-ZT18組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面尚可見,左足改變較輕,少部分掌指關(guān)節(jié)骨破壞,關(guān)節(jié)間隙輕度改變。3.4各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色及免疫組織化學(xué)觀察空白組大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜平滑,1-2層滑膜細(xì)胞,無乳突狀突起或增生,未見多核細(xì)胞浸潤。模型組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜細(xì)胞增生嚴(yán)重,乳突狀凸起,大量炎細(xì)胞浸潤。TG組、LEF組和MTX組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色可見滑膜細(xì)胞均有不同程度增生和炎細(xì)胞浸潤;同時TG-ZT18、LEF-ZT18、MTX-ZT18組分別與TG-ZT6、LEF-ZT6、MTX-ZT6比較滑膜細(xì)胞增生均較輕和炎細(xì)胞浸潤減少。免疫組織化學(xué)檢測大鼠踝關(guān)節(jié)觀察發(fā)現(xiàn)模型組大鼠滑膜細(xì)胞IL-17a、IL-6、TNF-α、MMP-3、CLOCK及BMAL1表達(dá)水平均明顯高于空白組;TG組、LEF組和MTX組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞IL-17a、IL-6、TNF-α、MMP-3、CLOCK及BMAL1表達(dá)水平與模型組相比較明顯降低;同時TG-ZT18、LEF-ZT18、MTX-ZT18組分別與TG-ZT6、LEF-ZT6、MTX-ZT6比較滑膜細(xì)胞IL-17a、IL-6、TNF-α、MMP-3、CLOCK及BMAL1表達(dá)量均有不同程度下降。結(jié)論1 CIA大鼠血清IL-17a、IL-6和TNF-α均于ZT22到達(dá)峰值,ZT6到達(dá)谷值一晝夜內(nèi)呈動態(tài)變化。2 TG、LEF和MTX在炎癥上升期干預(yù)可以更加有效抑制炎癥,減緩病情。3 TG、LEF和MTX可能通過影響CLOCK/BAML1時鐘基因的表達(dá),直接/間接影響IL-17a、IL-6、TNF-α、MMP-3的水平,從而起到抗炎的作用。
【關(guān)鍵詞】：雷公藤多苷 大鼠 時間治療 晝夜節(jié)律 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R593.22
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-18
• 引言18-20
• 第1章 CIA大鼠相關(guān)炎性因子晝夜節(jié)律的研究20-40
• 1.1 材料與方法20-25
• 1.1.1 材料20-22
• 1.1.2 方法22-25
• 1.2 結(jié)果25-37
• 1.2.1 各組CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度值變化25-26
• 1.2.2 CIA大鼠模型血清IL-17a、IL-6 及TNF-α 含量26-29
• 1.2.3 各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察29-30
• 1.2.4 各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色及免疫組織化學(xué)觀察30-37
• 1.3 討論37-38
• 1.4 小結(jié)38-40
• 第2章 雷公藤多苷對CIA大鼠相關(guān)炎性因子晝夜節(jié)律的影響40-60
• 2.1 材料與方法40-42
• 2.1.1 材料40-41
• 2.1.2 方法41-42
• 2.2 結(jié)果42-55
• 2.2.1 各組CIA大鼠關(guān)節(jié)腫脹度值變化42-44
• 2.2.2 各組CIA大鼠血清IL-17a、IL-6 及TNF-α 含量44-47
• 2.2.3 各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)X線觀察47-48
• 2.2.4 各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色及免疫組織化學(xué)觀察48-55
• 2.3 討論55-59
• 2.3.1 TG與RA55-56
• 2.3.2 RA相關(guān)炎性因子的節(jié)律56-57
• 2.3.3 RA的晝夜節(jié)律57-59
• 2.4 小結(jié)59-60
• 第3章 MTX、LEF和TG對CIA大鼠時間治療及其機(jī)制研究60-81
• 3.1 材料與方法60-62
• 3.1.1 材料60-61
• 3.1.2 方法61-62
• 3.2 結(jié)果62-78
• 3.2.1 各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度值變化62-67
• 3.2.2 各組CIA大鼠血清IL-17a、IL-6 及TNF-α 含量67-71
• 3.2.3 各組大鼠踝關(guān)節(jié)X線攝片71-74
• 3.2.4 各組CIA大鼠踝關(guān)節(jié)HE染色及免疫組織化學(xué)觀察74-78
• 3.3 討論78-81
• 3.3.1 常見抗風(fēng)濕藥MTX，LEF及TG與RA78-79
• 3.3.2 RA相關(guān)炎性因子79-80
• 3.3.3 RA的時間治療80-81
• 3.4 小結(jié)81
• 參考文獻(xiàn)81-87
• 第4章 綜述 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎時間治療研究進(jìn)展87-98
• 4.1 摘要87
• 4.2 引言87-88
• 4.3 晝夜節(jié)律鐘88
• 4.4 生理節(jié)律的調(diào)節(jié)88-89
• 4.5 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的節(jié)律89-90
• 4.6 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的時間治療90-91
• 4.7 中醫(yī)節(jié)律在RA中的應(yīng)用91-92
• 4.8 結(jié)論92-93
• 參考文獻(xiàn)93-98
• 結(jié)論98-99
• 致謝99-100
• 導(dǎo)師簡介100-101
• 作者簡介101-102
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集102

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：840890