本文關(guān)鍵詞：用酵母雙雜交篩選與HIV Tat相互作用的宿主因子

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【摘要】：目的通過酵母雙雜交試驗(yàn)篩選與HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子。方法對(duì)構(gòu)建的pGBKT7-tat進(jìn)行自激活和半乳糖苷試驗(yàn)。運(yùn)用酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)以HIV Tat作為誘餌,與人均一化基因庫進(jìn)行初篩。對(duì)篩選出來的陽性克隆進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果構(gòu)建的pGBKT7-tat無自激活特性和細(xì)胞毒性,然后進(jìn)行酵母雙雜交試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在DDO/X/A平板上出現(xiàn)47個(gè)陽性的藍(lán)色斑點(diǎn),在QDO/X/A平板上進(jìn)行進(jìn)一步篩選,對(duì)再次出現(xiàn)的8個(gè)藍(lán)色斑點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序。在GenBank中對(duì)相互作用的人體基因進(jìn)行BLAST分析,根據(jù)基因注釋推測(cè)其在病毒與機(jī)體相互作用過程中可能發(fā)揮的作用。結(jié)果測(cè)出5個(gè)不同的基因,這5個(gè)不同的基因分別為羧肽酶N、酪氨酸磷酸酶受體M、ATP1B1、鋅指蛋白MYM2和鋅指蛋白MYM5。結(jié)論本研究新篩選出羧肽酶、酪氨酸磷酸酶受體和ATP1B1病程相關(guān)蛋白及兩個(gè)鋅指蛋白等5種功能蛋白與HIV Tat相互作用,為進(jìn)一步研究HIV Tat蛋白功能提供依據(jù)。
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院腫瘤生物醫(yī)學(xué)中心;
【關(guān)鍵詞】： 酵母雙雜交 HIV Tat 蛋白質(zhì)相互作用 天然免疫 病毒復(fù)制
【基金】：國家科技重大專項(xiàng)項(xiàng)目(No.2012ZX10004207-004)
【分類號(hào)】：R512.91
【正文快照】： 人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiencyvirus,HIV)是艾滋病的主要病原體。自從1981年發(fā)現(xiàn)以來,目前已經(jīng)成為危害人類生命健康的重大傳染性疾病。HIV Tat是一個(gè)14kD的蛋白質(zhì)。它是一個(gè)重要的HIV毒力因子,在病毒基因的表達(dá)、復(fù)制、播散和疾病的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。它不但可

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