本文關鍵詞：microRNA-195在肝細胞L02葡萄糖攝取中的作用及機制研究

  更多相關文章： miR-195 葡萄糖攝取 Sirt-1 GLUT1 肝細胞L02

【摘要】：研究背景葡萄糖攝取是機體內新陳代謝中極其重要的一個生物進程且調控著人類機體內的多個信號通路及蛋白表達,葡萄糖攝取障礙會導致胰島素抵抗以及其他代謝的異常,進而誘發(fā)糖尿病以及癌癥等威脅人類健康的各種疾病。棕櫚酸(PA)做為飽和脂肪酸的一種已經被證明了可以誘導肝細胞形成葡萄糖攝取障礙,建立胰島素抵抗模型。微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)是一類非編碼的小分子單鏈RNA,通過與其目標m RNA分子的3'端(3'UTR)互補匹配導致該m RNA分子的翻譯受到抑制,而后在分子水平上調控各種信號通路。有大量研究結果顯示mi RNAs可以調控葡萄糖動態(tài)平衡。mi R-195也已經被證明,可以調控多種信號通路及蛋白的表達且與糖尿病的發(fā)生及發(fā)展有著密切關聯(lián),但其對葡萄糖攝取進程的影響及具體分子機制尚不明確。研究目的1.明確mi R-195在棕櫚酸誘導的肝細胞L02葡萄糖攝取障礙中是否表達異常;2.驗證mi R-195是否調控肝細胞L02的葡萄糖攝取障礙進程;3.mi R-195靶基因的篩選及驗證;4.探究mi R-195在肝細胞L02葡萄糖攝取障礙中的具體機制。第一部分PA處理肝細胞L02后micro RNA-195表達變化情況以不同濃度棕櫚酸PA(0.6 mmol/L,1 mmol/L)分別誘導肝細胞L02 8h,于倒置顯微鏡下觀察處理后的肝細胞L02的形態(tài),然后運用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測各個組中肝細胞L02的葡萄糖攝取能力,RT-PCR技術檢測mi R-195的表達變化情況。研究方法1.倒置顯微鏡下觀察棕櫚酸處理肝細胞L02后的形態(tài)變化;2.葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測不同濃度棕櫚酸處理肝細胞L02后葡萄糖攝取能力;3.實時定量PCR檢測葡萄糖攝取障礙后mi R-195表達變化。實驗結果1.顯微鏡下初步觀察到棕櫚酸(PA)處理的肝細胞L02的細胞形態(tài)明顯模糊化,邊緣不清晰無明顯棱角且呈橢圓狀,細胞與細胞間隔松散無清晰界限,細胞核增大;2.葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測結果證實(0.6 mmol/L和1 mmol/L)濃度的PA處理肝細胞L02后細胞培養(yǎng)液上清中的葡萄糖濃度比對照組高,說明肝細胞L02在一定濃度棕櫚酸的誘導下葡萄糖攝取能力降低,且隨著PA濃度的提高,其葡萄糖攝取能力有越來越低的趨勢;3.實時定量PCR檢測結果顯示肝細胞L02葡萄糖攝取障礙后mi R-195表達升高。結論0.6 mmol/L,1 mmol/L的PA誘導肝細胞L02葡萄糖攝取障礙,且肝細胞L02葡萄糖攝取障礙后mi R-195高表達。第二部分micro RNA-195對肝細胞L02葡萄糖攝取的影響葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測高表達及低表達mi R-195后其葡萄糖攝取能力的變化以及棕櫚酸處理高表達及低表達mi R-195后的肝細胞L02的葡萄糖攝取能力的變化。Western-blot法驗證GLUT1和GLUT4在高表達及低表達mi R-195后的表達變化。研究方法1.激光共聚焦檢測肝細胞L02轉染mi R-195 mimic以及mi R-195 inhibitor后的熒光強度,計算轉染效率;2.實時定量PCR檢測肝細胞L02轉染mi R-195 mimic以及mi R-195 inhibitor后的mi R-195的表達;3.葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測mi R-195高表達及低表達后肝細胞L02葡萄糖攝取能力的變化;葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測棕櫚酸處理mi R-195高表達及低表達后的肝細胞L02的葡萄糖攝取能力的變化;4.Western-blot法檢測mi R-195高表達或低表達后GLUT1和GLUT4的表達。實驗結果1.激光共聚焦檢測肝細胞L02轉染mi R-195 mimic以及mi R-195 inhibitor后的轉染效率達到40%;2.實時定量PCR的結果證實了肝細胞L02轉染mi R-195 mimic后mi R-195的表達升高,轉染mi R-195 inhibitor后mi R-195的表達降低;3.葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法結果證實了過表達mi R-195后肝細胞L02葡萄糖的攝取能力較Control降低,低表達mi R-195后肝細胞L02葡萄糖攝取能力較Control組有所提高。葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法的結果證實了PA誘導與mi R-195高表達同時干預有增強葡萄糖攝取障礙的趨勢;4.Western-blot的結果證明了高表達mi R-195下調葡萄糖轉運體GLUT1的表達。結論過表達mi R-195后肝細胞L02的葡萄糖攝取能力較對照組降低,而低表達mi R-195后肝細胞L02葡萄糖攝取能力較對照組有所提高;櫚酸處理與mi R-195高表達同時作用于肝細胞L02可加強其葡萄糖攝取障礙;過表達mi R-195可下調葡萄糖轉運體GLUT1的表達。第三部分micro RNA-195靶基因Sirt-1的預測及驗證基于多種數(shù)據庫分析預測mi R-195的靶基因以及Western-blot法驗證其是否為miR-195的靶基因,并探究其靶基因與葡萄糖代謝相關蛋白之間的作用機制。研究方法1.基于多種數(shù)據庫分析預測mi R-195的靶基因;2.Western-blot檢測mi R-195高表達及低表達后候選靶基因Sirt-1的表達變化;3.Western-blot檢測Sirt-1表達被干涉后GLUT1和GLUT4的表達變化。實驗結果1.多種數(shù)據庫分析預測mi R-195的靶基因可能性較大的為Sirt-1;2.Western-blot檢測mi R-195高表達后Sirt-1表達降低,低表達后Sirt-1表達升高;3.Western-blot檢測Sirt-1表達被干涉后GLUT1和GLUT4表達均降低。結論mi R-195的靶基因很有可能是Sirt-1,并且mi R-195通過下調Sirt-1來降低GLUT1和GLUT4的表達,進而來調控肝細胞L02的葡萄糖攝取。
【關鍵詞】：miR-195 葡萄糖攝取 Sirt-1 GLUT1 肝細胞L02
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 文獻回顧15-25
• 第一部分 棕櫚酸處理肝細胞L02后microRNA-195表達變化情況25-35
• 1 材料25-28
• 2 方法28-30
• 3 結果30-32
• 4 討論32-35
• 第二部分 microRNA-195對肝細胞L02葡萄糖攝取的影響35-46
• 1 材料35-37
• 2 方法37-40
• 3 結果40-43
• 4 討論43-46
• 第三部分 micro RNA-195靶基因Sirt-1 的預測及驗證46-53
• 1 材料46-47
• 2 方法47-49
• 3 結果49-50
• 4 討論50-53
• 小結53-55
• 參考文獻55-63
• 個人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前10條

1 吳一遷;瞿永華;;小鼠游離肝細胞的制備方法[J];上海實驗動物科學;1985年01期

2 盧力心,倫照榮,梁東升;獼猴肝細胞的分離及培養(yǎng)[J];動物學雜志;1988年05期

3 ;培養(yǎng)肝細胞新方法[J];藥物生物技術;1997年02期

4 趙利斌,郝飛;肝細胞水化狀態(tài)對細胞某些代謝的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2000年05期

5 羅小玲,梁安民,李力,謝裕安,吳繼寧,匡志鵬;胎牛肝細胞低分子天然抑瘤物的制備及其抗腫瘤作用[J];中國腫瘤生物治療雜志;2001年02期

6 李保森,辛紹杰,游紹莉,鄒正升,王福生;乳豬肝細胞的簡易分離獲取[J];透析與人工器官;2002年04期

7 梁安民,謝裕安,羅小玲,李力,吳繼寧,匡志鵬;胎牛肝細胞低分子天然抑瘤物的生物學特性及抗腫瘤作用[J];中國腫瘤;2002年06期

8 湯習鋒,周東耀,康格非;二甲亞砜、尼克酰胺對肝細胞生長素促肝細胞增殖的影響[J];基礎醫(yī)學與臨床;2002年02期

9 周霖,薛毅瓏,田磊,李雁凌,張佐云;大規(guī)模豬肝細胞低溫保存方法的建立[J];解放軍醫(yī)學雜志;2003年09期

10 李曼妮;蘇先獅;;人肝臟再生增強因子對體外肝細胞生長的影響[J];臨床肝膽病雜志;2009年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據庫 前10條

1 曹磊;張妍;高超;楊軍;;小型灌流式生物反應器的構建及其在體外培養(yǎng)肝細胞的應用[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第三十四屆學術年會論文集[C];2014年

2 朱薇;袁愛力;賴卓勝;劉思德;王亞東;;大量豬肝細胞的聚集培養(yǎng)及功能鑒定[A];中國中西醫(yī)結合學會第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2000年

3 項紅升;李明;劉劍峰;楊巍;;肝細胞在線快速定性監(jiān)測系統(tǒng)[A];第一屆全國人工肝及血液凈化學術年會暨全國人工肝及血液凈化攻關協(xié)作組成立大會論文集[C];2004年

4 任宏造;;低硒低磷脂豚鼠肝細胞的電鏡觀察[A];第五次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1988年

5 賈珍容;邱銀生;王大菊;王程;宮新江;潘學營;;三種核苷類抗病毒藥物對大鼠原代肝細胞的毒性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)藥理毒理學分會第九次學術討論會論文與摘要集[C];2006年

6 呂林;王美玲;羅緒剛;張麗陽;;不同錳水平對肉仔雞肝細胞脂肪合成關鍵酶的影響[A];安全優(yōu)質的家禽生產——第十五次全國家禽學術討論會論文集[C];2011年

7 祝哲誠;李濤;謝俊杰;程東峰;申川;沈柏用;彭承宏;;用于生物人工肝的大量豬肝細胞低溫凍存[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

8 劉曙正;段廣才;Henrik S.Huitfeldt;;EGF通過TGFα-P53正反饋機制引起肝細胞增殖[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因學學術會議論文集[C];2011年

9 張勇;宋良文;王清明;黃山英;孫麗;尹繼業(yè);王曉民;;肝再生增強因子在肝細胞中的自分泌研究[A];第六屆全國生物醫(yī)學體視學學術會議暨第九屆全軍軍事病理學學術會議、第五屆全軍定量病理學學術會議論文匯編[C];2005年

10 顧勁揚;張悅;施曉雷;諸薛慧;丁義濤;;骨髓間充質干細胞維持原代豬肝細胞形態(tài)與功能的實驗研究[A];第一屆全國疑難重型肝病大會、第四屆全國人工肝及血液凈化學術年會論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據庫 前10條

1 王小龍;科學家發(fā)現(xiàn)保護肝細胞的蛋白質[N];科技日報;2009年

2 鄭屠;實現(xiàn)從干細胞得到肝細胞[N];醫(yī)藥經濟報;2003年

3 王健;骨髓細胞可轉化為肝細胞[N];大眾科技報;2007年

4 本報記者 鄭曉春;英國成功實施肝細胞治療[N];科技日報;2003年

5 記者 王艷紅;成年人骨髓干細胞培育出肝細胞[N];新華每日電訊;2000年

6 時仲省 陳建設 朱武凌;動物實驗證實 骨髓造血干細胞可轉化為肝細胞[N];大眾衛(wèi)生報;2002年

7 江西 錢剛　(主任醫(yī)師);肝臟怎樣解毒[N];家庭醫(yī)生報;2009年

8 欣光;移植豬肝細胞首獲成功[N];華夏時報;2002年

9 陳金偉;“傷肝藥物”知多少(上)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 紅衛(wèi);肝炎患者不宜食罐頭食品[N];民族醫(yī)藥報;2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據庫 前6條

1 吳根生;SV40 T介導的人類胚肝上皮細胞的體外永生化及其機制探討[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1992年

2 牛勃;大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因在哺乳動物細胞中表達的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1990年

3 郭懷斌;實驗性淋巴瘀滯誘發(fā)家兔肝組織結構病理變化及其與脂肪肝的關系[D];河北醫(yī)科大學;2014年

4 劉崇忠;供體肝細胞預輸注誘導大鼠肝移植免疫耐受及其作用機制的實驗研究[D];山東大學;2008年

5 李曉波;肝細胞內新的核氧化固醇—3-硫酸-25-羥化膽固醇的生物合成通路、調節(jié)及功能研究[D];復旦大學;2007年

6 張弓;EphA7在原發(fā)性肝細胞癌中的表達及其體外抑制研究[D];鄭州大學;2010年

中國碩士學位論文全文數(shù)據庫 前10條

1 周美齡;COFs對肝細胞線粒體損傷及能量代謝障礙機制的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 王勝男;六價鉻對雞肝功能和抗氧化性能的影響[D];山東農業(yè)大學;2015年

3 劉佳;內質網應激通過Insig-1泛素化和SCAP調節(jié)肝細胞脂質代謝及機制探討[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 楊靜;LCC基生物材料的制備及其與人體肝細胞生物相容性的研究[D];湖北工業(yè)大學;2015年

5 黃家惠;利福平誘導小鼠脂肪肝及部分作用機理[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

6 胡越;Snail2和G9a在肝細胞EMT過程中的作用及機制研究[D];吉林大學;2016年

7 劉吉云;人參超微粉中人參皂苷對肝細胞酒精性損傷的保護作用[D];吉林大學;2016年

8 王博;肝細胞CUL4B調控HBV復制和肝臟免疫微環(huán)境的作用研究[D];山東大學;2016年

9 馬玲玲;PC-B2對AFB_1致L-02細胞DNA損傷及相關基因表達的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

10 史美娜;microRNA-195在肝細胞L02葡萄糖攝取中的作用及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2016年

，

本文編號：825612