發(fā)布時間：2017-09-04 05:14

  本文關(guān)鍵詞：microRNA-27a通過抑制PPARγ調(diào)控肥胖大鼠血管內(nèi)皮一氧化氮釋放的機(jī)制研究

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【摘要】：肥胖是指體重超標(biāo)脂肪增厚的狀態(tài),以甘油三酯積聚過多而導(dǎo)致。肥胖早已不再單純的被認(rèn)為是體重增長的過程,而更被描述為體內(nèi)脂肪組織過度累積的狀態(tài)。由于進(jìn)食量過大或機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失衡,自身代謝發(fā)生改變引起體內(nèi)脂肪大量積聚導(dǎo)致體重過度增長、脂肪組織增大增多,引起人體生理狀態(tài)失衡,向病理狀態(tài)轉(zhuǎn)變。肥胖通常與個人生活飲食習(xí)慣、日常運(yùn)動、作息等密切相關(guān)。而體內(nèi)脂肪的數(shù)量、分布和性別年齡等也有直接的聯(lián)系�，F(xiàn)代社會肥胖患者數(shù)量日益增多,而因肥胖引起的各類并發(fā)癥也隨之增加。心血管類疾病便是其中致死率最高的一類。眾所周知,血管是機(jī)體運(yùn)輸養(yǎng)分、排出廢物的重要通道。血管功能的完善、血管的健康可確保相應(yīng)組織、器官的供血、供氧充足,代謝排泄廢物的及時排出,血管功能的完善對局部器官乃至整個機(jī)體健康都有著極為重要的意義。血管功能的維持主要依賴血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌一系列內(nèi)皮因子,調(diào)節(jié)血管的收縮與舒張。這其中最為重要的就是NO。NO主要通過L-精氨酸在氧和輔助因子的參與下,在NOS的催化下轉(zhuǎn)化為L-瓜氨酸從而釋放出來。其主要作用在于維持血管舒張、降低血流阻力、降低血壓、抑制白細(xì)胞粘附和游走、抑制血小板粘附和凝聚、降低血管平滑肌細(xì)胞增殖、防止動脈粥樣硬化、防止血栓的形成。NOS分為e NOS、i NOS、n NOS三種,而血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)的通常為e NOS,血管內(nèi)皮中e NOS的正常表達(dá)維持血管釋放NO濃度。當(dāng)NO合成、釋放功能損傷時就會引起血管內(nèi)皮功能損傷,危害機(jī)體健康。多種因素參與血管內(nèi)皮功能損傷時NO的釋放,包括氧自由基生成增加引起的內(nèi)皮損傷,低密度脂蛋白抑制NO的合成與分泌,粘附分子介導(dǎo)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附等,近年來人們也發(fā)現(xiàn)一些micro RNA在血管類疾病中變化顯著,參與到對血管內(nèi)皮功能的調(diào)節(jié)之中,病理條件下他們數(shù)量、表達(dá)的改變可能影響了血管內(nèi)皮功能的穩(wěn)定。隨著科技的發(fā)展,疾病狀態(tài)下大量micro RNA數(shù)量、分布發(fā)生的廣泛變化,已逐漸引起人們的關(guān)注。大量研究表明,micro RNA廣泛參與到機(jī)體生理病理調(diào)節(jié)之中,其中也包括肥胖。肥胖患者體內(nèi),大量micro RNA表達(dá)、數(shù)量發(fā)生改變,引起機(jī)體損傷。Micro RNA-27a作為其中的一員,與肥胖的發(fā)病機(jī)制及肥胖誘導(dǎo)的并發(fā)癥密切相關(guān),micro RNA-27a在肥胖大鼠或肥胖患者體內(nèi)數(shù)量增加并參與機(jī)體對脂肪細(xì)胞的負(fù)性調(diào)節(jié)。一些研究也發(fā)現(xiàn),micro RNA-27a在缺氧狀態(tài)下表達(dá)增高,而肥胖患者脂肪組織區(qū)域缺氧。通過基因預(yù)測及生物信息學(xué)分析,在micro RNA-27a眾多的下游靶點(diǎn)中,PPAR-γ與胰島素抵抗及內(nèi)皮功能密切相關(guān)。PPAR-γ是重要的核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子,在脂肪組織中較高表達(dá),影響脂質(zhì)代謝關(guān)鍵酶表達(dá)。有研究表明PPAR-γ可通過PPAR-γ/AKT/e NOS蛋白信號通路改善肺主動脈內(nèi)皮功能損傷改善內(nèi)皮NO釋放減少狀況。那么肥胖狀態(tài)下,胸主動脈中增多的micro RNA-27a是否可以通過影響其下游靶點(diǎn)PPAR-γ,進(jìn)而影響PPAR-γ/AKT/e NOS蛋白信號通路,引起血管內(nèi)皮功能損傷,NO產(chǎn)生減少,對此我們進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)探究。首先,我們從整體水平進(jìn)行了探究。大鼠隨機(jī)分組,正常組:正常飼料喂養(yǎng);高脂組:高脂飼料喂養(yǎng)。3個月,建立肥胖大鼠模型。對兩組大鼠體重、腹圍身長比、血清葡萄糖含量、血清甘油三脂含量、血清膽固醇含量、血清胰島素含量進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)肥胖組大鼠體重明顯增加,腹圍身長比明顯增大,血清葡萄糖含量升高。血清甘油三酯、血清膽固醇含量增多,血清胰島素增高。對實(shí)驗(yàn)大鼠IPGTT、ITT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,肥胖組大鼠出現(xiàn)葡萄糖耐受和胰島素抵抗現(xiàn)象。胰島素敏感指數(shù)和胰島素抵抗指數(shù)的計算結(jié)果顯示,肥胖大鼠出現(xiàn)胰島素敏感性下降,胰島素抵抗的現(xiàn)象。進(jìn)一步,我們檢測了實(shí)驗(yàn)大鼠血清NO、血清micro RNA-27a含量,結(jié)果顯示肥胖組大鼠血清NO含量降低,血清micro RNA-27a含量增高。對實(shí)驗(yàn)大鼠胸主動脈中micro RNA-27a表達(dá)檢測的結(jié)果顯示,肥胖組大鼠胸主動脈中micro RNA-27a表達(dá)增高。通過western blot技術(shù)對大鼠胸主動脈中PPAR-γ/AKT/e NOS信號通路蛋白表達(dá)水平檢測,結(jié)果顯示肥胖組大鼠PPAR-γ蛋白表達(dá)抑制,AKT、e NOS蛋白磷酸化水平下降。同時,我們在細(xì)胞水平進(jìn)行了驗(yàn)證。我們將細(xì)胞分為con組:正常培養(yǎng);nc組:加micro RNA-27a的陰性對照物;rosi組:給藥羅格列酮;micro RNA-27a組:轉(zhuǎn)染micro RNA-27a進(jìn)入HUVEC細(xì)胞中;micro RNA-27a+rosi組:轉(zhuǎn)染micro RNA-27a進(jìn)入HUVEC細(xì)胞中并在轉(zhuǎn)染結(jié)束后給藥羅格列酮。結(jié)果顯示給藥羅格列酮顯著增加HUVEC細(xì)胞NO釋放,轉(zhuǎn)染micro RNA-27a使HUVEC細(xì)胞NO釋放減少。轉(zhuǎn)染micro RNA-27a后給藥羅格列酮可減輕NO釋放減少癥狀。同時,western blot檢測結(jié)果顯示,給藥羅格利酮可顯著增加HUVEC細(xì)胞中PPAR-γ蛋白表達(dá)水平,并進(jìn)一步提高下游AKT、e NOS蛋白磷酸化水平,轉(zhuǎn)染micro RNA-27a使HUVEC細(xì)胞中PPAR-γ蛋白表達(dá)抑制繼而抑制其下游AKT、e NOS蛋白磷酸化水平。轉(zhuǎn)染micro RNA-27a后給藥羅格列酮可使PPAR-γ及下游信號通路蛋白表達(dá)水平較micro RNA-27a轉(zhuǎn)染組有所恢復(fù)。說明肥胖導(dǎo)致micro RNA-27a分泌增加,可能通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞PPAR-γ/AKT/e NOS信號通路蛋白表達(dá)進(jìn)而抑制血管內(nèi)皮NO釋放功能,引起血管內(nèi)皮損傷。對其下游靶點(diǎn)PPAR-γ進(jìn)行干預(yù)可減輕micro RNA-27a造成的影響。
【關(guān)鍵詞】：肥胖 microRNA-27a NO 血管內(nèi)皮功能 PPAR-γ
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 提要4-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-15
• 英文縮寫詞表15-16
• 緒論16-17
• 第1章 文獻(xiàn)綜述17-25
• 1 肥胖與血管內(nèi)皮功能17-21
• 1.1 血管內(nèi)皮功能損傷17-18
• 1.2 血管內(nèi)皮功能損傷的機(jī)制18-19
• 1.3 一氧化氮的產(chǎn)生與功能19-21
• 2 肥胖與MICRORNA21-24
• 2.1 肥胖中發(fā)揮作用的micro RNA21-22
• 2.2 micro RNA-27a22-24
• 3 結(jié)語24-25
• 第2章 實(shí)驗(yàn)部分25-53
• 1 MICRORNA-27A在肥胖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮功能紊亂中的作用研究25-42
• 1.1 實(shí)驗(yàn)藥品26-27
• 1.2 儀器27-28
• 1.3 主要溶液的配制28-32
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法32-35
• 1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-42
• 2 MICRORNA-27A通過調(diào)控下游目標(biāo)基因PPAR-Γ 誘導(dǎo)血管內(nèi)皮功能損傷的分子機(jī)制研究42-52
• 2.1 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑43-44
• 2.2 儀器44
• 2.3 主要溶液配制44-45
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法45-47
• 2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-52
• 3 實(shí)驗(yàn)小結(jié)52-53
• 第3章 討論53-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 閆麗萍;侯保權(quán);李守棟;王玲玲;馬騁;;電針對坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷大鼠脊髓CaMK Ⅱ-CREB通路的影響[J];針刺研究;2015年05期

2 江龍委;竇駿;;血清中miRNA作為腫瘤標(biāo)記物的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2010年04期

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本文編號：789545