本文關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療卵巢早衰的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 卵巢早衰 HuMSCs 單次移植 多次移植 治療

【摘要】：卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指40歲前月經(jīng)已形成規(guī)律的女性,由于卵巢功能衰退而出現(xiàn)月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、性器官萎縮的情況,常伴有促性腺激素水平的上升和雌激素的下降。卵巢早衰是婦產(chǎn)科臨床工作中的常見病、多發(fā)病,已經(jīng)成為當(dāng)今婦女不孕癥的最主要病因。目前,主要通過激素治療和免疫治療等方法恢復(fù)卵巢功能。但這些治療的效果是暫時(shí)的、一過性的,不能有效促進(jìn)自身損傷卵巢組織的再生修復(fù)。鑒于常規(guī)治療方法的局限性,目前科學(xué)家們正在積極尋找新的有效的治療方法。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)治療技術(shù)是干細(xì)胞治療技術(shù)的一個(gè)重要分支,被認(rèn)為是未來器官損傷修復(fù)之新希望。本研究旨利用構(gòu)建小鼠卵巢早衰模型研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞單次移植和多次移植治療卵巢早衰的可行性,并初步探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)卵巢損傷的可能機(jī)理。在本研究中,小鼠一次性腹腔注射化療藥物環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX) 120 mg/kg+白消安(Busulfan,BUS) 30 mg/kg,使小鼠出現(xiàn)動(dòng)情間期延長,雌激素E2水平下降,促性腺激素FSH含量升高,卵巢萎縮、各級(jí)卵泡數(shù)目減少、卵泡閉鎖增多、顆粒細(xì)胞分泌的AMH減少、增殖細(xì)胞數(shù)目降低等卵巢早衰癥狀,成功建立了小鼠卵巢早衰模型。從人新生兒臍帶分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HuMSCs),流式細(xì)胞術(shù)鑒定第五代HuMSCs純度,細(xì)胞特異性表面抗原CD44、CD73、CD90、CD105日性表達(dá),CDllb、 CD19、CD34、CD45、和HLA-DR陰性表達(dá),HuMSCs體外誘導(dǎo)出成骨和成脂細(xì)胞,成功建立了HuMSCs體系。用建立好的HuMSCs體系單次和多次移植治療卵巢早衰小鼠。單次移植時(shí),在造模后第7天(7D)尾靜脈注射2×107/千克體重的HuMSCs,在造模后14D、21D、28D和60D進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果顯示,與卵巢早衰小鼠相比,移植HuMSCs的小鼠的臟器系數(shù)僅在14D明顯恢復(fù),但原始卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡、成熟卵泡在14D、21D、28D和60D均有不同程度的恢復(fù),尤其是成熟卵泡在各時(shí)間點(diǎn)均顯著恢復(fù)。E2的水平在21D、28D和60D均有顯著升高,FSH水平僅在60D顯著下降。預(yù)示卵巢儲(chǔ)備能力的標(biāo)志分子抗苗勒管激素(anti-Mullerian hormone, AMH)在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)明顯增加,標(biāo)記細(xì)胞增殖狀態(tài)的抗原Ki67的表達(dá)也明顯增加。動(dòng)物交配實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示雌鼠的生育能力顯著提高。多次移植治療小鼠卵巢早衰時(shí),在造模后7D、14D和21D分別尾靜脈注射2×107/千克體重的HuMSCs,在造模后28D和60D進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果顯示,與卵巢早衰組小鼠相比,移植HuMSCs的小鼠的臟器系數(shù)在28D和60D均有顯著升高,各級(jí)卵泡數(shù)均有不同程度增加,尤其是原始卵泡和初級(jí)卵泡數(shù)顯著增加。E2和FSH的水平在D28和D60均顯著恢復(fù)。卵巢儲(chǔ)備能力和細(xì)胞增值能力均有顯著提高,雌鼠的生育能力得到顯著恢復(fù)。我們?cè)诼雅蓊w粒細(xì)胞中檢測(cè)到間充質(zhì)干細(xì)胞,表明HuMSCs能夠遷移和停留在受損傷的卵巢組織中。綜上所述,HuMSCs移植可以治療化療藥物引起的小鼠卵巢早衰,多次移植對(duì)小鼠臟器系數(shù)和激素水平的恢復(fù)效果要優(yōu)于單次移植。
【關(guān)鍵詞】：卵巢早衰 HuMSCs 單次移植 多次移植 治療
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R711.75
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一節(jié) 卵巢早衰小鼠模型的建立9-24
• 前言9-10
• 材料與方法10-18
• 研究結(jié)果18-21
• 討論21-22
• 小結(jié)22-24
• 第二節(jié) 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞單次移植對(duì)小鼠卵巢早衰的治療作用24-47
• 前言24-25
• 材料與方法25-35
• 研究結(jié)果35-44
• 討論44-46
• 小結(jié)46-47
• 第三節(jié) 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞多次移植對(duì)小鼠卵巢早衰的治療作用47-58
• 前言47
• 材料與方法47-52
• 研究結(jié)果52-57
• 小結(jié)57-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 綜述65-70
• 參考文獻(xiàn)68-70
• 縮略語表70-71
• 個(gè)人簡歷71-72
• 致謝72

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