本文關(guān)鍵詞：脂肪組織CD36棕櫚酰化對代謝性炎癥和胰島素敏感性的影響

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【摘要】：目的:脂肪酸轉(zhuǎn)運酶(Fatty acid translocase,FAT/CD36)是一種跨膜糖蛋白,主要介導(dǎo)長鏈脂肪酸(long chain fatty acid,LCFA)轉(zhuǎn)運,在脂糖代謝中有極其重要作用。我們實驗室前期研究已經(jīng)證實,高脂飲食能誘導(dǎo)小鼠附睪脂肪組織CD36和炎癥因子的表達(dá)增加、胰島素敏感性降低[1-3]。然而,抑制CD36表達(dá)雖可以改善機體胰島素敏感性[4],但也可能導(dǎo)致體內(nèi)脂代謝穩(wěn)態(tài)異常[5-6]。因此,單純在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平去干預(yù)CD36蛋白的表達(dá),對防治由CD36介導(dǎo)的炎癥的發(fā)生或胰島素抵抗,不是最佳方法。棕櫚�；鳛轶w內(nèi)唯一可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式,可以通過調(diào)節(jié)膜蛋白定位而影響蛋白的功能。本課題旨在探討脂肪組織CD36棕櫚�；瘜Υx性炎癥及胰島素敏感性的影響,為今后深入研究和理解CD36蛋白棕櫚酰化修飾在代謝性炎癥和胰島素抵抗中的作用提供實驗依據(jù)。方法:1.選擇C57BL/6J小鼠隨機分為2組,分別喂養(yǎng)普通飲食(normal chow diet,NCD)和高脂飲食(high fat diet,HFD)。2.C57BL/6J小鼠隨機分為三組,分別注射空病毒(negative control,NC)、轉(zhuǎn)染了含野生型CD36(wide type-CD36,WT-CD36)以及4個棕櫚酰化位點突變(AA-SS)CD36的慢病毒[7],三組均高脂喂養(yǎng)。上述兩批小鼠分別喂養(yǎng)8周后,收集小鼠附睪脂肪組織(Epididymal adipose tissue,EAT),應(yīng)用�；�-生物素置換法(acyl-biotindisplacementmethod,abe)檢測cd36棕櫚�；潭�,實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(realtime-polymerasechainreaction,rt-pcr)和westernblot檢測cd36、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactoralpha,tnf-α)、c-jun氨基末端激酶(junn-terminalkinase,jnk)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,il-6)、巨噬細(xì)胞標(biāo)記物f4/80、核因子κb(nuclearfactor-κb,nf-κb)的表達(dá)以及蛋白激酶(proteinkinase,akt)、胰島素底物受體1(insulinreceptorsubstrate1,irs-1);應(yīng)用he染色觀察脂肪組織形態(tài)。3.用空病毒(nc)、含野生型cd36(wt-cd36)以及4個棕櫚�；稽c突變(aa-ss)cd36的慢病毒分別轉(zhuǎn)染3t3-l1細(xì)胞,經(jīng)過嘌呤霉素篩選構(gòu)建三種穩(wěn)定細(xì)胞系(nc、wt-cd36、aa-ss)。4.3t3-l1細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞后,應(yīng)用棕櫚酸(palmitate,pa)或聯(lián)合棕櫚�；种苿╀迨�(2-bromopalmitate,2-bp)和淺藍(lán)菌素(cerulenin,cer)處理3t3-l1細(xì)胞。上述細(xì)胞系應(yīng)用abe檢測細(xì)胞fat/cd36棕櫚�；潭�,用超速離心分離出細(xì)胞脂筏,測cd36與標(biāo)記蛋白(caveolin-1,cav)在脂筏中的分布,熒光染料進(jìn)行脂肪細(xì)胞脂滴染色,用免疫共沉淀方法提取細(xì)胞系cd36/tlr4共聚體并用westernblot檢測;提取細(xì)胞線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白,用westernblot檢測cd36在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的表達(dá)水平。結(jié)果:1.高脂飲食喂養(yǎng)小鼠eat中cd36棕櫚�；揎棾潭仍黾�,tnf-α,jnk表達(dá)增多,胰島素信號通路相關(guān)蛋白akt、irs-1表達(dá)減少。2.動物模型中,wt-cd36組與aa-ss組小鼠eat中cd36的表達(dá)增加(P0.05),但AA-SS組的CD36棕櫚�；潭让黠@降低。WT-CD36組體重明顯增加(P0.05)、葡萄糖不耐受(glucose intolerance)、胰島素不敏感性,炎癥因子:TNF-α、JNK、IL-6、F4/80及NF-κB的表達(dá)增加,磷酸化蛋白激酶(Phosphorylated-protein kinase,p-AKT)和磷酸化胰島素受體底物1(Phospho-Insulin receptor substrate 1,p-IRS1)表達(dá)降低。AA-SS組能顯著改善小鼠體重和葡萄糖耐量,降低炎癥因子表達(dá),增加胰島素敏感性,增加p-AKT和p-IRS1的表達(dá)。3.細(xì)胞模型中,WT-CD36組CD36融入脂筏部分增加,脂滴增大,CD36/TLR4共聚體形成增加,AA-SS組CD36融入脂筏部分減少,脂滴變小,CD36/TLR4共聚體形成減少。在3T3-L1細(xì)胞中,PA能增加CD36融入脂筏的效率,PA聯(lián)合2-Bromopalmitate和Cerulenin后,CD36融入脂筏的效率降低,脂滴形成減少,CD36在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的表達(dá)增加。結(jié)論:高脂飲食可以促進(jìn)脂肪組織代謝性炎癥的發(fā)生、降低胰島素敏感性,同時能誘導(dǎo)脂肪組織CD36棕櫚�；揎棾潭让黠@增加;抑制CD36棕櫚�；軠p輕脂肪炎癥,改善胰島素敏感性;其機制可能與棕櫚�；淖僀D36在脂筏、線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的分布有關(guān),需進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：CD36 棕櫚�；� 代謝性炎癥 胰島素敏感性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 高脂飲食對小鼠脂肪組織炎癥、胰島素敏感性及CD36棕櫚酰化的影響15-25
• 1 材料和方法15-21
• 2 統(tǒng)計學(xué)分析21
• 3 結(jié)果21-24
• 4 討論24-25
• 第二部分 CD36棕櫚�；嚓P(guān)動物模型與細(xì)胞模型的建立25-36
• 1 材料與方法25-29
• 2 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 3 結(jié)果30-35
• 4 討論35-36
• 第三部分 CD36棕櫚酰化影響代謝性炎癥和胰島素敏感性機制初探36-44
• 1 材料和方法36-39
• 2 統(tǒng)計學(xué)分析39
• 3 結(jié)果39-42
• 4 討論42-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 文獻(xiàn)綜述48-53
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文54
• 攻讀碩士研究生期間參加的學(xué)術(shù)會議54

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1 李丹檬;宓為峰;李玲芝;王志仁;王sユ，

本文編號：776174