發(fā)布時(shí)間：2017-09-02 03:33

  本文關(guān)鍵詞：脂肪組織CD36棕櫚酰化對(duì)代謝性炎癥和胰島素敏感性的影響

  更多相關(guān)文章： CD36 棕櫚�；� 代謝性炎癥 胰島素敏感性

【摘要】：目的:脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)酶(Fatty acid translocase,FAT/CD36)是一種跨膜糖蛋白,主要介導(dǎo)長(zhǎng)鏈脂肪酸(long chain fatty acid,LCFA)轉(zhuǎn)運(yùn),在脂糖代謝中有極其重要作用。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究已經(jīng)證實(shí),高脂飲食能誘導(dǎo)小鼠附睪脂肪組織CD36和炎癥因子的表達(dá)增加、胰島素敏感性降低[1-3]。然而,抑制CD36表達(dá)雖可以改善機(jī)體胰島素敏感性[4],但也可能導(dǎo)致體內(nèi)脂代謝穩(wěn)態(tài)異常[5-6]。因此,單純?cè)谵D(zhuǎn)錄或翻譯水平去干預(yù)CD36蛋白的表達(dá),對(duì)防治由CD36介導(dǎo)的炎癥的發(fā)生或胰島素抵抗,不是最佳方法。棕櫚�；鳛轶w內(nèi)唯一可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式,可以通過(guò)調(diào)節(jié)膜蛋白定位而影響蛋白的功能。本課題旨在探討脂肪組織CD36棕櫚�；瘜�(duì)代謝性炎癥及胰島素敏感性的影響,為今后深入研究和理解CD36蛋白棕櫚酰化修飾在代謝性炎癥和胰島素抵抗中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.選擇C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為2組,分別喂養(yǎng)普通飲食(normal chow diet,NCD)和高脂飲食(high fat diet,HFD)。2.C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為三組,分別注射空病毒(negative control,NC)、轉(zhuǎn)染了含野生型CD36(wide type-CD36,WT-CD36)以及4個(gè)棕櫚�；稽c(diǎn)突變(AA-SS)CD36的慢病毒[7],三組均高脂喂養(yǎng)。上述兩批小鼠分別喂養(yǎng)8周后,收集小鼠附睪脂肪組織(Epididymal adipose tissue,EAT),應(yīng)用酰基-生物素置換法(acyl-biotindisplacementmethod,abe)檢測(cè)cd36棕櫚�；潭�,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(realtime-polymerasechainreaction,rt-pcr)和westernblot檢測(cè)cd36、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactoralpha,tnf-α)、c-jun氨基末端激酶(junn-terminalkinase,jnk)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,il-6)、巨噬細(xì)胞標(biāo)記物f4/80、核因子κb(nuclearfactor-κb,nf-κb)的表達(dá)以及蛋白激酶(proteinkinase,akt)、胰島素底物受體1(insulinreceptorsubstrate1,irs-1);應(yīng)用he染色觀察脂肪組織形態(tài)。3.用空病毒(nc)、含野生型cd36(wt-cd36)以及4個(gè)棕櫚�；稽c(diǎn)突變(aa-ss)cd36的慢病毒分別轉(zhuǎn)染3t3-l1細(xì)胞,經(jīng)過(guò)嘌呤霉素篩選構(gòu)建三種穩(wěn)定細(xì)胞系(nc、wt-cd36、aa-ss)。4.3t3-l1細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞后,應(yīng)用棕櫚酸(palmitate,pa)或聯(lián)合棕櫚�；种苿╀迨�(2-bromopalmitate,2-bp)和淺藍(lán)菌素(cerulenin,cer)處理3t3-l1細(xì)胞。上述細(xì)胞系應(yīng)用abe檢測(cè)細(xì)胞fat/cd36棕櫚�；潭�,用超速離心分離出細(xì)胞脂筏,測(cè)cd36與標(biāo)記蛋白(caveolin-1,cav)在脂筏中的分布,熒光染料進(jìn)行脂肪細(xì)胞脂滴染色,用免疫共沉淀方法提取細(xì)胞系cd36/tlr4共聚體并用westernblot檢測(cè);提取細(xì)胞線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白,用westernblot檢測(cè)cd36在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的表達(dá)水平。結(jié)果:1.高脂飲食喂養(yǎng)小鼠eat中cd36棕櫚�；揎棾潭仍黾�,tnf-α,jnk表達(dá)增多,胰島素信號(hào)通路相關(guān)蛋白akt、irs-1表達(dá)減少。2.動(dòng)物模型中,wt-cd36組與aa-ss組小鼠eat中cd36的表達(dá)增加(P0.05),但AA-SS組的CD36棕櫚�；潭让黠@降低。WT-CD36組體重明顯增加(P0.05)、葡萄糖不耐受(glucose intolerance)、胰島素不敏感性,炎癥因子:TNF-α、JNK、IL-6、F4/80及NF-κB的表達(dá)增加,磷酸化蛋白激酶(Phosphorylated-protein kinase,p-AKT)和磷酸化胰島素受體底物1(Phospho-Insulin receptor substrate 1,p-IRS1)表達(dá)降低。AA-SS組能顯著改善小鼠體重和葡萄糖耐量,降低炎癥因子表達(dá),增加胰島素敏感性,增加p-AKT和p-IRS1的表達(dá)。3.細(xì)胞模型中,WT-CD36組CD36融入脂筏部分增加,脂滴增大,CD36/TLR4共聚體形成增加,AA-SS組CD36融入脂筏部分減少,脂滴變小,CD36/TLR4共聚體形成減少。在3T3-L1細(xì)胞中,PA能增加CD36融入脂筏的效率,PA聯(lián)合2-Bromopalmitate和Cerulenin后,CD36融入脂筏的效率降低,脂滴形成減少,CD36在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的表達(dá)增加。結(jié)論:高脂飲食可以促進(jìn)脂肪組織代謝性炎癥的發(fā)生、降低胰島素敏感性,同時(shí)能誘導(dǎo)脂肪組織CD36棕櫚�；揎棾潭让黠@增加;抑制CD36棕櫚�；軠p輕脂肪炎癥,改善胰島素敏感性;其機(jī)制可能與棕櫚�；淖僀D36在脂筏、線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的分布有關(guān),需進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：CD36 棕櫚酰化 代謝性炎癥 胰島素敏感性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R589
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 高脂飲食對(duì)小鼠脂肪組織炎癥、胰島素敏感性及CD36棕櫚酰化的影響15-25
• 1 材料和方法15-21
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21
• 3 結(jié)果21-24
• 4 討論24-25
• 第二部分 CD36棕櫚�；嚓P(guān)動(dòng)物模型與細(xì)胞模型的建立25-36
• 1 材料與方法25-29
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 3 結(jié)果30-35
• 4 討論35-36
• 第三部分 CD36棕櫚酰化影響代謝性炎癥和胰島素敏感性機(jī)制初探36-44
• 1 材料和方法36-39
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 3 結(jié)果39-42
• 4 討論42-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 文獻(xiàn)綜述48-53
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文54
• 攻讀碩士研究生期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議54

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1 李丹檬;宓為峰;李玲芝;王志仁;王sユ，

本文編號(hào)：776174