本文關(guān)鍵詞：促紅細胞生成素對高糖誘導人腎小球系膜細胞纖維化的影響及其可能機制研究

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【摘要】：目的:研究促紅細胞生成素(EPO)對高糖培養(yǎng)人腎小球系膜細胞(MCs)表達相關(guān)細胞因子、炎癥因子及其增殖的影響,探索EPO對腎組織的分子生物學效應(yīng)。方法:2014年12月—2015年5月選取人MCs,采用隨機數(shù)字表法將MCs分為:空白對照組、高糖誘導組、甘露醇對照組、EPO對照組、5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組、Rho激酶抑制劑組,培養(yǎng)24 h。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法檢測RhoA、鋅離子相關(guān)的RhoA蛋白1(ROCK1)mRNA表達水平;酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測結(jié)締組織生長因子(CTGF)、Ⅳ型膠原蛋白、白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達水平;CCK-8法測定細胞增殖吸光度(OD值)。結(jié)果:高糖誘導組較空白對照組RhoA、ROCK1 mRNA表達水平升高(P0.05);5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組較高糖誘導組RhoA、ROCK1 mRNA表達水平降低(P0.05);5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組RhoA、ROCK1 mRNA表達水平組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);Rho激酶抑制劑組較高糖誘導組、5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組RhoA、ROCK1 mRNA表達水平降低(P0.05)。高糖誘導組、5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組RhoA mRNA表達水平與ROCK1 mRNA表達水平均呈正相關(guān)(r值分別為0.829、0.898、0.831、0.861,P0.05)。高糖誘導組較空白對照組培養(yǎng)24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養(yǎng)24 h及48 h時IL-6及TNF-α表達水平升高(P0.05);5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組、Rho激酶抑制劑組較空白對照組培養(yǎng)24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養(yǎng)24 h及48 h時IL-6及TNF-α表達水平升高,較高糖誘導組降低(P0.05);10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組、Rho激酶抑制劑組較5 U/ml EPO干預組培養(yǎng)24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養(yǎng)24 h及48 h時IL-6及TNF-α表達水平降低(P0.05);20 U/ml EPO干預組、Rho激酶抑制劑組較10 U/ml EPO干預組培養(yǎng)24 h時CTGF及Ⅳ型膠原蛋白、培養(yǎng)24 h及48 h時IL-6及TNF-α表達水平降低(P0.05)。培養(yǎng)24、48、72 h時,高糖誘導組、EPO對照組、5U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組較空白對照組MCs增殖OD值升高,Rho激酶抑制劑組較空白對照組MCs增殖OD值降低(P0.05);5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組較高糖誘導組MCs增殖OD值升高,Rho激酶抑制劑組較高糖誘導組MCs增殖OD值降低(P0.05);5 U/ml EPO干預組、10 U/ml EPO干預組、20 U/ml EPO干預組MCs增殖OD值組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);3組MCs增殖OD值培養(yǎng)24、48、72 h時間間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1、高糖可抑制人MCs增殖。2、在一定濃度范圍內(nèi),EPO呈濃度依賴性地抑制MCs凋亡從而發(fā)揮腎臟保護作用。3、EPO可通過減少MCs CTGF和Ⅳ型膠原蛋白的表達,緩解DN腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展。4、EPO可通過減少炎癥因子的產(chǎn)生,抑制炎性反應(yīng),延緩DN腎纖維化進展。5、EPO對高糖環(huán)境下體外培養(yǎng)的MCs細胞的保護作用可能與抑制RhoA/ROCK信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：促紅細胞生成素 糖尿病腎病 腎小球系膜細胞 纖維化 細胞增殖 Rho A/ROCK信號通路
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-22
• 2.1 實驗材料12-14
• 2.1.1 實驗主要儀器12
• 2.1.2 實驗用MCs來源12
• 2.1.3 實驗用主要試劑12-13
• 2.1.4 主要試劑配制13
• 2.1.5 引物合成13-14
• 2.2 實驗方法及步驟14-21
• 2.2.1 MCs的培養(yǎng)14-16
• 2.2.2 實驗分組16
• 2.2.3 RT-PCR法檢測各組細胞RhoAmRNA、ROCK1 mRNA表達水平16-19
• 2.2.4 ELISA法檢測各組MCs上清液CTGF、Ⅳ型膠原蛋白、IL-6、TNF-α蛋白的表達水平19-20
• 2.2.5 CCK-8 法檢測各組細胞增殖情況20-21
• 2.3 統(tǒng)計學方法21-22
• 第3章 結(jié)果22-31
• 3.1 MCs細胞形態(tài)學結(jié)果22
• 3.2 高糖、EPO對MCs RhoAmRNA、ROCK1mRNA表達水平的影響22-24
• 3.2.1 RNA完整性檢測22-23
• 3.2.2 RT-PCR檢測結(jié)果23-24
• 3.3 高糖、EPO、Y27632對MCs的CTGF、Ⅳ型膠原蛋白表達影響24-26
• 3.4 高糖、EPO、Y27632對MCs IL-6、TNF-α 表達影響26-28
• 3.5 高糖、EPO、Y27632對MCs增殖的影響28-30
• 3.6 RhoA mRNA表達水平與ROCK1 mRNA表達水平相關(guān)性分析30-31
• 第4章 討論31-36
• 4.1 MCs纖維化與DN31-32
• 4.2 EPO對高糖誘導MCs纖維化過程的抑制作用32-34
• 4.2.1 EPO對MCs纖維化過程中RhoA/ROCK信號通路的影響32-33
• 4.2.2 EPO對MCs纖維化過程中CTGF及Ⅳ型膠原蛋白的影響33-34
• 4.4 EPO對MCs纖維化過程中炎癥因子的影響34
• 4.5 EPO對高糖誘導MCs增殖的作用34-36
• 第5章 結(jié)論與展望36-37
• 5.1 結(jié)論36
• 5.2 不足與展望36-37
• 致謝37-38
• 參考文獻38-42
• 附圖42-43
• 攻讀學位期間的研究成果43-44
• 綜述44-48
• 參考文獻47-48

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本文編號：744422