本文關(guān)鍵詞：脂多糖在眼眶成纖維細胞異常增殖中的作用和機制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 甲狀腺相關(guān)眼病 眼眶成纖維細胞 CD90 脂多糖 增殖

【摘要】：目的:通過利用脂多糖(LPS)刺激體外培養(yǎng)的表型為CD90+及CD90-的甲狀腺相關(guān)眼病(TAO)患者的眼眶成纖維細胞,比較相同濃度的脂多糖對不同CD90表型的眼眶成纖維細胞增殖情況的影響以及其炎性因子表達的作用,初步探討LPS在甲狀腺相關(guān)眼病中引起脂肪增殖中的機制。方法:(1)原代培養(yǎng)6例TAO患者的脂肪/結(jié)締組織來源的眼眶成纖維細胞,隨機分成7組,分別采用0 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml,200 ng/ml,500 ng/ml,1000 ng/ml,2000 ng/ml LPS進行刺激。CCK-8(cell counting kit-8)試劑盒檢測各組眼眶成纖維細胞增殖情況,探索最佳刺激濃度;(2)利用流式細胞儀進行分選,篩選出CD90-成纖維細胞;(3)構(gòu)建CD90過表達慢病毒,轉(zhuǎn)染CD90-細胞;將細胞分為A(空白病毒)、B(CD90過表達病毒)兩組,每組用摸索得到的最佳LPS濃度進行刺激。CCK-8試劑盒檢測各組眼眶成纖維細胞增殖情況;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot法檢測各組CD90基因及蛋白的表達,并使用RT-PCR檢測各組IL-6、IL-1及TNF-α的表達量。結(jié)果:(1)TAO患者眼眶成纖維細胞體外培養(yǎng)成功,成功分選出表型為CD90-的眼眶成纖維細胞,在LPS濃度為500 ng/ml時,成纖維細胞增殖20%,為最佳刺激濃度。(2)成功制備過表達CD90的慢病毒,并轉(zhuǎn)染CD90-眼眶成纖維細胞。(3)以500 ng/ml LPS刺激眼眶成纖維細胞后,對照組及CD90過表達組間的細胞增殖沒有明顯變化;同等濃度LPS刺激CD90-眼眶成纖維細胞后,IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌增多,CD90過表達組眼眶成纖維細胞IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌減弱,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:脂肪/結(jié)締組織來源的眼眶成纖維細胞經(jīng)LPS刺激可產(chǎn)生炎性反應(yīng),同時IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌增多。CD90表型不同的眼眶成纖維細胞在LPS刺激下的增殖未見顯著差異。
【關(guān)鍵詞】：甲狀腺相關(guān)眼病 眼眶成纖維細胞 CD90 脂多糖 增殖
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R777.5;R581
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-9
• 前言9-11
• 第一部分 眼眶成纖維細胞的培養(yǎng)、鑒定及分選11-21
• 一、材料與方法11-15
• 二、實驗結(jié)果15-20
• 三、結(jié)論20-21
• 第二部分 CD90慢病毒的制備及轉(zhuǎn)染21-42
• 一、過表達慢病毒克隆的制備21-30
• 二、CD90過表達慢病毒包裝與質(zhì)量檢測30-38
• 三、感染預(yù)實驗38
• 四、實驗步驟38-40
• 五、實驗結(jié)果40-41
• 六、實驗結(jié)論41-42
• 第三部分 LPS對不同表型眼眶成纖維細胞的增殖及分泌功能的作用42-56
• 一、材料與方法42-51
• 二、實驗結(jié)果51-55
• 三、實驗結(jié)論55-56
• 討論56-59
• 綜述59-63
• 參考文獻63-68
• 致謝68

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 饒寒敏;湯雪明;柴本甫;李慧;朱雅萍;;丹參對成纖維細胞成骨的掃描電鏡觀察[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2001年S1期

2 朱紅梅;成纖維細胞對腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用研究[J];醫(yī)學綜述;2002年06期

3 魏玉玲,鄒慶,梁克玉;中藥增骨Ⅰ號對體外成纖維細胞的影響[J];中醫(yī)正骨;2004年01期

4 盧旭華,陳德玉,趙定麟;成纖維細胞成骨潛能的研究進展[J];骨與關(guān)節(jié)損傷雜志;2004年08期

5 魏海峰;井玲;魏雁虹;劉輝;齊玲;趙志濤;張秀云;李才;;氟對二維和三維培養(yǎng)的成纖維細胞胰島素樣生長因子-1表達的影響[J];中國生物制品學雜志;2010年05期

6 張誠s，

本文編號：699636