本文關(guān)鍵詞：牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)骨質(zhì)疏松大鼠種植體骨結(jié)合的研究

  更多相關(guān)文章： 骨質(zhì)疏松癥 牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞 種植體 骨結(jié)合 歸巢

【摘要】：目的：探討系統(tǒng)應(yīng)用牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞對骨質(zhì)疏松大鼠種植體骨結(jié)合的影響,為促進(jìn)種植體的骨結(jié)合提供一條嶄新的思路。方法：1、酶解法培養(yǎng)GFP+C57/BL轉(zhuǎn)基因小鼠牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞(gingiva-derived mesenchymal stem cells, GMSCs),流式檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物,同時(shí)進(jìn)行成骨誘導(dǎo)及上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)。2、去勢法建立骨質(zhì)疏松模型：3月齡純種wistar雌性正常大鼠為對照組,摘除雙側(cè)卵巢的3月齡純種wistar雌性大鼠為實(shí)驗(yàn)組。術(shù)后3個(gè)月處死各組大鼠,通過測定血清堿性磷酸酶及組織HE染色鑒定模型是否成功建立。3、取63只3月齡純種wistar雌性大鼠隨機(jī)分為3組：A組(正常+PBS)(n=21):種植術(shù)前30分鐘尾靜脈注入PBS; B組(去勢+PBS) (n=21):去勢術(shù)后3個(gè)月,種植術(shù)前30分鐘尾靜脈注入PBS; C組(去勢+GMSCs) (n=21):去勢術(shù)后3個(gè)月,種植術(shù)前30分鐘尾靜脈注入GMSCs懸液。4、各組大鼠均全麻下于雙側(cè)股骨遠(yuǎn)心端植入種植體,種植術(shù)后1周、4周、8周各組分別處死6只大鼠,采用熒光定量PCR (relative fluorescence quantitative polymerase chain-reaction, RT-PCR)檢測種植體周圍骨組織成骨相關(guān)基因及炎癥因子的表達(dá)；采用硬組織切片亞甲基藍(lán)-酸性品紅染色檢測種植骨結(jié)合率；于4周各組另處死3只大鼠通過免疫組化及DAPI染色檢測GFP+GMSCs歸巢。結(jié)果：1、成功培養(yǎng)C57/BL小鼠GMSCs,為長梭形,典型成纖維細(xì)胞形態(tài),GFP表達(dá)陽性且穩(wěn)定。流式細(xì)胞術(shù)榆測結(jié)果：GMSCs表達(dá)CD29 (99.9%)、CD44 (92.6%),不表達(dá)CD34 (5.1%)、CD31 (4%)、CD45 (0.8%)、CDllb (1.5%)。成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)28天后鏡下可見鈣化結(jié)節(jié),茜素紅染色后結(jié)節(jié)呈紅褐色；上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)液誘導(dǎo)14天后可見細(xì)胞形態(tài)明顯改變,似鋪路石樣。2、成功建立wistar大鼠骨質(zhì)疏松模型,實(shí)驗(yàn)組大鼠血清中堿性磷酸酶活性明顯高于對照組,兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HE染色表明：實(shí)驗(yàn)組與對照組相比股骨骨小梁數(shù)目減少,部分骨小梁變細(xì)斷裂,不連續(xù),骨髓腔變大。3、檢測種植體周圍組織成骨相關(guān)基因及炎性因子表達(dá)術(shù)后1周：A組、C組與B組相比,BSP表達(dá)上調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); OPN表達(dá)上調(diào), A、B兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),B、C兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；IL-1表達(dá)下調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后4周：A組、C組與B組相比,BSP、OPN表達(dá)上調(diào),IL-1表達(dá)下調(diào),且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。術(shù)后8周：A組、C組與B組相比,BSP表達(dá)略上調(diào),差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); OPN表達(dá)上調(diào),IL-1表達(dá)下調(diào),且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、1周、4周、8周硬組織切片結(jié)果顯示A組、C組種植體骨結(jié)合率高于B組,1周時(shí)B組和C組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、4周組織石蠟切片免疫組化及DAPI染色后,種植體周圍組織可見GFP+細(xì)胞歸巢。結(jié)論：1、酶解法分離培養(yǎng)GFP+牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞操作簡便,傳代2-3次后細(xì)胞純度較高,GFP表達(dá)穩(wěn)定。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞有成骨向分化及成上皮樣細(xì)胞分化的潛能。2、通過去勢法可成功建立骨質(zhì)疏松模型。3、系統(tǒng)應(yīng)用GMSCs,可在種植體周圍新生組織中檢測到GFP+GMSCs的歸巢,并部分分化為成骨細(xì)胞參與新生骨的形成,促進(jìn)種植體的骨結(jié)合。
【關(guān)鍵詞】：骨質(zhì)疏松癥 牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞 種植體 骨結(jié)合 歸巢
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.6;R580
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號說明11-12
• 前言12-14
• 第一部分 牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定誘導(dǎo)14-23
• 材料與方法14-17
• 結(jié)果17-20
• 討論20-22
• 結(jié)論22-23
• 第二部分 系統(tǒng)應(yīng)用牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞對骨質(zhì)疏松大鼠種植體骨結(jié)合的影響23-39
• 材料與方法23-28
• 結(jié)果28-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文46-47
• 附件47

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