本文關(guān)鍵詞：結(jié)節(jié)性硬化癥新靶向治療的探索和腫瘤免疫治療融合蛋白的制備

  更多相關(guān)文章： 結(jié)節(jié)性硬化癥 谷氨酰胺 GSK3β BPTES 氯化鋁 檢查點 免疫治療 PD1 LAG3 免疫球蛋白(Ig)融合蛋白

【摘要】：結(jié)節(jié)性硬化癥(Tuberous sclerosis complex,TSC)是一常染色體顯性遺傳多系統(tǒng)良性腫瘤綜合癥,TSC1或TSC2突變引起m TOR過度活化,導(dǎo)致患者發(fā)生癲癇、發(fā)育遲緩、智力受損和自閉癥,癲癇大發(fā)作,顱內(nèi)高壓,腎臟腫瘤破裂出血、腎功能衰竭,呼吸衰竭,可危及病人生命。因為受眾相對較少,與其它罕見病一樣,人們對結(jié)節(jié)性硬化癥缺乏重視,藥物鮮有開發(fā),雖然m TOR抑制劑雷帕霉素(rapamycin)及其衍生物是TSC的靶向治療藥物,但由于雷帕霉素只是抑制細胞增長而不是殺死細胞,停藥后腫瘤會恢復(fù)生長。因此,需要尋找更好的治療方法,是目前亟待解決的問題。由于m TOR活化可引起有氧糖酵解、谷氨酸依賴等代謝異常,為了探索結(jié)節(jié)性硬化癥(TSC)的新療法,我們使用糖酵解抑制劑(3-溴丙酮酸,3-Br PA)、谷氨酰胺酶抑制劑(BPTES)、GSK3β抑制劑(Licl、Li2CO3)處理正常細胞系(WT)和m TOR活化的細胞系(TSC2-/-、Pten-/-),發(fā)現(xiàn)3-Br PA、BPTES、Licl及Li2CO3都能有效抑制m TOR活化的細胞系(TSC2-/-、Pten-/-)的增殖。由于全身性Tsc1或Tsc2缺失小鼠均是胚胎致死,我們建立了生后21天死亡的TSC1神經(jīng)元(Synapsin-cre,TSC~(1Lox P/LoxP))和50天死亡的神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞(GFAP-cre,TSC~(1Lox P/LoxP))特異性敲除的兩種小鼠模型,3-Br PA、BPTES未能改善Synapsin-cre,TSC~(1Lox P/LoxP)小鼠的生存期,以上3類抑制劑將用于治療GFAP-cre,TSC~(1Lox P/LoxP)小鼠。機體免疫系統(tǒng)時時刻刻監(jiān)視體內(nèi)突變的細胞,識別并將它們清除,稱之為免疫監(jiān)視。但是與此同時,腫瘤細胞能夠利用多種機制逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視,最終在體內(nèi)增殖(腫瘤免疫逃逸)。腫瘤發(fā)生與否以及腫瘤發(fā)生后的轉(zhuǎn)歸取決于這兩者的相互作用。T細胞能夠直接殺傷表達腫瘤特異性抗原的腫瘤細胞,是腫瘤免疫的重要組成之一。殺傷性T細胞的活化方式為:腫瘤浸潤T細胞表面的TCR與腫瘤細胞表面的MHC-抗原復(fù)合物結(jié)合,活化T細胞,通過促進T細胞分泌細胞因子或顆粒酶等,對特定的腫瘤細胞直接進行殺傷作用。T細胞的激活除了受第一信號(TCR通路)的調(diào)控之外,還受各種共刺激及共抑制分子的調(diào)控,其中共抑制分子被稱為檢查點(Checkpoint)分子。隨著免疫檢查點分子(CTLA-4)阻斷劑(CTLA-4融合蛋白及單抗)取得突破性進展之后,在腫瘤免疫治療領(lǐng)域,免疫檢查點阻斷治療(主要是PD1/PD-L1阻斷治療)成為與CAR-T療法并駕齊驅(qū)的兩個重大方向。由于腫瘤逃逸機制的多樣性,聯(lián)合免疫治療(傳統(tǒng)療法與免疫療法的聯(lián)合、各種免疫療法之間的聯(lián)合)成為腫瘤治療的趨勢。本次研究中,我們設(shè)計和構(gòu)建了由兩個免疫檢查點分子(LAG3及PD1)胞外段組成的Fc融合蛋白:LAG3-PD1-Fc和PD1-LAG3-Fc融合蛋白的哺乳動物表達質(zhì)粒。然后在HEK293表達系統(tǒng)中成功表達這兩個Fc融合蛋白,并確定了兩者的分子量大小,為功能研究和臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)節(jié)性硬化癥 谷氨酰胺 GSK3β BPTES 氯化鋁 檢查點 免疫治療 PD1 LAG3 免疫球蛋白(Ig)融合蛋白
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R596
【目錄】：

• 第一部分 結(jié)節(jié)性硬化癥新靶向治療的探索10-33
• 中文摘要10-11
• 英文摘要11-12
• （一）前言12-15
• （二）材料和方法15-21
• 1. 材料15-17
• 1.1 細胞系15
• 1.2 抗體和試劑15-16
• 1.3 儀器和材料16-17
• 2. 方法17-21
• （三）結(jié)果21-29
• 1.谷氨酰胺酶抑制劑降低m TOR活化細胞的增值21-23
• 2．3-Br PA和BPTES對Tsc1神經(jīng)元敲除小鼠無顯著療效23-25
• 3. Li Cl和Li_2CO_3減弱mTOR活化細胞的增值能力25-28
• 4. 構(gòu)建GFAP-Cre，，TSC1~(loxp/loxp)小鼠28-29
• （四）結(jié)論29
• （五）討論29-31
• （六）參考文獻31-33
• 第二部分 腫瘤免疫治療融合蛋白的制備33-60
• 中文摘要33-34
• 英文摘要34-35
• （一）前言35-39
• （二）材料和方法39-51
• 1. 材料39-42
• 1.1 菌種和載體39
• 1.2 抗體和試劑39-42
• 2. 方法42-51
• 2.1 基因克隆的基本實驗42-50
• 2.2 抗體純化相關(guān)實驗50-51
• （三）結(jié)果51-56
• 1. LAG3-PD1-Fc及PD1-LAG3-Fc的結(jié)構(gòu)51-52
• 2. 重組質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的鑒定52-54
• 3. 融合蛋白的表達及鑒定54-56
• （四）結(jié)論56
• （五）討論56-58
• （六）參考文獻58-60
• 文獻綜述 免疫檢查點阻斷治療的進展60-66
• 參考文獻64-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67-68

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