本文關鍵詞：貽貝誘導線蟲類痛風癥狀的觀察與基因表達測定

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【摘要】：經濟的快速發(fā)展和人們生活水平的提高,促使飲食結構發(fā)生很大的改變,海鮮的攝食量也在逐年上升,研究發(fā)現海鮮是引起痛風的一種高風險因素。痛風是體內嘌呤代謝紊亂,血尿酸升高,尿酸以鈉鹽形式沉積在關節(jié)或組織處的一種代謝性疾病。本課題以秀麗隱桿線蟲作為模式生物,研究貽貝的攝食是否會誘導線蟲類痛風癥狀的發(fā)生,進而考察攝食貽貝是否影響尿酸代謝。本課題通過在線蟲生長培養(yǎng)基中添加三種不同濃度的(0.1%、1%、10%)貽貝提取液,從壽命、活性、身體僵硬度(爬行波長次數、頭部擺動頻率、爬行波長振幅大小)方面對線蟲生理特征進行觀察、統(tǒng)計和分析,最終發(fā)現高濃度貽貝提取液能夠誘使線蟲類痛風癥狀的發(fā)生。實驗室早期研究發(fā)現10%文蛤、10%鮮蛤的攝食能夠顯著降低線蟲的壽命并引發(fā)類痛風癥狀。基于此項研究結果,本課題將10%貽貝分別與10%文蛤、10%鮮蛤提取液等比例混合喂養(yǎng)線蟲,對線蟲的壽命、活性、身體僵硬度等生理指標進行統(tǒng)計分析,進而判斷添加貽貝的海鮮混合液的作用效果。結果顯示雖然不同種類海鮮混合液的攝食在線蟲壽命方面并無顯著性的改變,但是攝食混合海鮮比單一類別海鮮對線蟲生理特征影響更為明顯。通過查詢線蟲體內與人類痛風相關基因的同源基因,并在KEGG數據庫中下載各個基因的生物代謝途徑,導入到KGML軟件中經過編輯形成線蟲痛風局部基因網絡,結果顯示有三個線蟲痛風相關基因成功連入網絡,其中R151.2、Y105E8B.5兩個基因直接參與嘌呤代謝。利用實時熒光定量PCR技術,分別對10%文蛤、10%鮮蛤、10%貽貝、10%貽貝+10%文蛤、10%貽貝+10%鮮蛤培養(yǎng)基中培養(yǎng)六天的線蟲進行痛風相關基因定量分析以及尿酸含量檢測,初步數據發(fā)現貽貝的攝食能夠影響痛風相關基因在線蟲體內的表達,進而影響線蟲體內尿酸含量變化,但其對痛風患病機制的影響并非是單一基因的調控作用,而是多個基因相互影響共同調控的結果。海鮮攝食誘發(fā)痛風患病的機制是個復雜的過程,需要進一步深入研究。
【關鍵詞】：痛風 秀麗隱桿線蟲 貽貝 局部基因網絡 尿酸 實時熒光定量PCR
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R589.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 緒論9-19
• 1.1 課題背景9-10
• 1.2 研究目的及意義10
• 1.3 國內外研究進展10-17
• 1.3.1 痛風相關研究進展10-12
• 1.3.2 秀麗隱桿線蟲研究進展12-15
• 1.3.3 貽貝簡介15
• 1.3.4 基因網絡15-16
• 1.3.5 實時熒光定量PCR16-17
• 1.4 課題來源和研究內容17-19
• 1.4.1 課題來源17
• 1.4.2 研究內容17-19
• 第2章 不同濃度的貽貝提取液對線蟲類痛風癥狀的影響19-30
• 2.1 引言19
• 2.2 材料與方法19-24
• 2.2.1 實驗材料與儀器19-21
• 2.2.2 實驗方法21-24
• 2.3 結果與分析24-29
• 2.3.1 對線蟲壽命的影響24-26
• 2.3.2 線蟲活性統(tǒng)計與分析26-27
• 2.3.3 線蟲身體僵硬度統(tǒng)計與分析27-29
• 2.4 討論29
• 2.5 本章小結29-30
• 第3章 添加貽貝的混合海鮮液對線蟲類痛風癥狀的影響30-38
• 3.1 引言30
• 3.2 材料與方法30-31
• 3.2.1 實驗材料與儀器30
• 3.2.2 實驗方法30-31
• 3.3 結果與分析31-36
• 3.3.1 添加貽貝的海鮮提取液對線蟲壽命的影響31-34
• 3.3.2 線蟲活性的統(tǒng)計與分析34
• 3.3.3 線蟲身體僵硬度的統(tǒng)計與分析34-36
• 3.4 討論36-37
• 3.5 本章小結37-38
• 第4章 線蟲痛風局部基因網絡的構建38-46
• 4.1 引言38
• 4.2 材料與方法38-41
• 4.2.1 實驗材料38-40
• 4.2.2 實驗方法40-41
• 4.3 結果與分析41-44
• 4.3.1 線蟲痛風相關基因篩查結果41
• 4.3.2 線蟲痛風相關基因所參與的生物代謝途徑結果41-42
• 4.3.3 線蟲痛風局部基因網絡的構建42-44
• 4.4 討論44
• 4.5 本章小結44-46
• 第5章 線蟲尿酸代謝相關基因表達研究46-63
• 5.1 引言46
• 5.2 材料與方法46-51
• 5.2.1 實驗材料與儀器46-47
• 5.2.2 實驗方法47-51
• 5.3 結果與分析51-61
• 5.3.1 Q-PCR引物篩選結果51-52
• 5.3.2 Q-PCR檢測線蟲痛風相關基因表達水平結果52-59
• 5.3.3 線蟲尿酸含量的測定與分析59-61
• 5.4 討論61-62
• 5.5 本章小結62-63
• 結論63-65
• 參考文獻65-70
• 附錄70-76
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文76-78
• 致謝78

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本文編號：598145