本文關(guān)鍵詞：BAFF-BAFF-R及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的免疫反應(yīng)及芍藥苷-6’-O-苯磺酸酯的作用

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【摘要】：B細(xì)胞活化因子(B cell activating factor, BAFF)又稱B細(xì)胞刺激因子,是腫瘤壞死因子配體超家族成員之一,主要來(lái)源于骨髓家族細(xì)胞如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等。與其受體B細(xì)胞活化因子受體(B cell-activating factor receptor, BAFF-R)、跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配體相互作用分子(transmembrane activator or calcium-modulating cyclophylin ligand-interactor, TACI)、B細(xì)胞成熟抗原(B cell maturation antigen, BCMA)結(jié)合,促進(jìn)B細(xì)胞的存活、生長(zhǎng)、抗原遞呈以及不同階段免疫球蛋白的類別轉(zhuǎn)換和重組,在B細(xì)胞存活、增殖和活化中起重要作用。白芍總苷(total glucosides of paeony, TGP)是我國(guó)批準(zhǔn)上市治療RA的抗炎免疫調(diào)節(jié)藥,在臨床治療中發(fā)揮良好療效,不良反應(yīng)少,但起效較慢,療效較弱,可能與生物利用度差有關(guān)。課題組合成了芍藥苷-6-氧-苯磺酸酯(代號(hào)CP-25),其是TGP有效活性成份芍藥苷(paeoniflorin, Pae)的結(jié)構(gòu)修飾單體。前期研究表明,與Pae相比,CP-25脂溶性好,生物利用度明顯提高,抗炎免疫調(diào)節(jié)作用明顯,已獲中國(guó)發(fā)明專利(ZL 2012 10030616.4)。但CP-25對(duì)BAFF及其受體介導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)免疫應(yīng)答及其機(jī)制尚不清楚。本研究以大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant-induced arthritis, AA)模型為研究對(duì)象,觀察BAFF及其受體BAFF-R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在大鼠AA免疫反應(yīng)的作用,探討CP-25對(duì)大鼠AA的治療作用是否與其調(diào)控淋巴細(xì)胞BAFF及其受體BAFF-R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。目的：部分揭示BAFF及其受體BAFF-R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與了大鼠AA免疫反應(yīng),明確CP-25對(duì)大鼠AA的治療作用與其調(diào)控淋巴細(xì)胞BAFF及其受體BAFF-R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān),為揭示CP-25治療RA的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：將完全弗氏佐劑(complete Freund adjuvant, CFA)0.1ml于SD大鼠右后足跖皮內(nèi)注射,制備大鼠AA模型。正常組同法注射生理鹽水代替CFA以作為對(duì)照。將造模成功的SD大鼠隨機(jī)分為八組：正常組,模型組,CP-25(25,50,100mg/kg)治療組,甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)(0.5mg/kg)、TGP(50mg/kg)和Pae(50mg/kg)陽(yáng)性對(duì)照組。足爪腫脹數(shù)測(cè)定；脾臟及胸腺指數(shù)測(cè)定；ELISA法檢測(cè)血清和細(xì)胞上清中BAFF和IgM水平；CCK-8測(cè)定脾臟淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BAFF-R、TACI、BCMA在脾臟組織CD45R+B細(xì)胞的表達(dá)；Q-PCR檢測(cè)BAFF-R在脾臟中mRNA的表達(dá)；Western Blot法及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)BAFF-R、TRAF2、Bax、Bcl-2在脾臟中蛋白表達(dá)；結(jié)果：1.AA大鼠在炎癥免疫反應(yīng)不同階段血清中BAFF、IgM水平變化與正常組比較,炎癥免疫反應(yīng)期(D9)AA大鼠血清中BAFF水平明顯增高,關(guān)節(jié)炎初期(D16)、關(guān)節(jié)炎高峰期(D23)、及關(guān)節(jié)炎緩解期(D30)大鼠血清中BAFF有上升趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異； AA大鼠各時(shí)期血清中IgM水平均顯著高于正常組大鼠。2. BAFF三個(gè)受體BAFF-R、TACI、BCMA在AA大鼠脾臟CD45R+B細(xì)胞中的表達(dá)與正常組相比,BAFF-R在AA大鼠脾臟CD45R+B細(xì)胞中表達(dá)明顯升高,BCMA、TACI表達(dá)無(wú)明顯變化；Q-PCR法檢測(cè)顯示BAFF-R mRNA在AA大鼠脾臟中表達(dá)明顯升高；Western Blot法及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)顯示,與正常組相比,BAFF-R在AA大鼠脾臟組織中表達(dá)明顯升高。3.CP-25灌胃給藥對(duì)AA大鼠足爪腫脹數(shù)及免疫器官指數(shù)的影響CFA誘導(dǎo)大鼠AA模型,繼發(fā)病變?cè)谠炷：?4天,表現(xiàn)為以多發(fā)性關(guān)節(jié)炎為特征的關(guān)節(jié)腫脹變形和活動(dòng)障礙,在造模后21天左右達(dá)到炎癥高峰。CP-25各劑量組可以減輕大鼠關(guān)節(jié)腫脹,降低大鼠的關(guān)節(jié)腫脹數(shù)。與正常組相比,AA大鼠脾臟明顯腫大,脾臟指數(shù)顯著增高；CP-25各劑量組均不同程度降低AA大鼠脾臟指數(shù),具有明顯抑制作用；AA大鼠胸腺指數(shù)無(wú)明顯變化,各給藥組無(wú)明顯影響。4.CP-25灌胃給藥對(duì)AA大鼠脾臟淋巴細(xì)胞功能的影響AA模型組大鼠血清中IgM及淋巴細(xì)胞增殖水平較正常組明顯增高,CP-25(25,50,100mg/kg)均能夠顯著降低大鼠血清中IgM水平,顯著抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠淋巴細(xì)胞增殖。5.CP-25灌胃給藥對(duì)AA大鼠脾臟BAFF-R表達(dá)的影響模型組大鼠脾臟BAFF-R水平較正常組顯著增高；CP-25(25,50, 100mg/kg)均能不同程度降低大鼠脾臟BAFF-R mRNA水平；免疫組化法及Western Blot法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與正常組比較,模型組大鼠脾臟BAFF-R蛋白高表達(dá),CP-25(25,50,100mg/kg)給藥不同程度降低AA大鼠脾臟BAFF-R蛋白表達(dá)。6.CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞功能的影響B(tài)AFF(500ng/ml)體外刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞48h,大鼠脾臟淋巴細(xì)胞IgM水平明顯上調(diào),脾臟淋巴細(xì)胞的增殖顯著增加；CP-25(10-9,10-7,10-6mol/L)給藥后可以不同程度降低IgM水平,抑制脾臟淋巴細(xì)胞增殖。7.CP-25體外對(duì)BAFF刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞BAFF-R、TRAF2、Bax、Bcl-2表達(dá)變化的影響B(tài)AFF(500ng/ml)體外刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞48h,其BAFF-R、TRAF2、Bcl-2表達(dá)顯著增加, Bax表達(dá)降低；CP-25(10-6mol/L)可以顯著降低BAFF-R、 TRAF2、Bcl-2表達(dá),增加Bax表達(dá)。結(jié)論：1.AA大鼠的炎癥繼發(fā)性病變致炎后d14左右開(kāi)始出現(xiàn),至d21達(dá)到高峰,其繼發(fā)側(cè)足爪出現(xiàn)腫脹；脾臟指數(shù)增高,血清BAFF、IgM水平較正常大鼠增高；脾臟淋巴細(xì)胞增殖增加；脾臟CD45R+B細(xì)胞上BAFF-R表達(dá)增加。其胸腺指數(shù),脾臟CD45R+B細(xì)胞上TACI、BCMA表達(dá)則無(wú)明顯變化。2. BAFF刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞后,脾臟淋巴細(xì)胞IgM水平增高,增殖增加；脾臟淋巴細(xì)胞上BAFF-R、TRAF2、Bcl-2表達(dá)增加,Bax表達(dá)降低。3.CP-25灌胃給藥可以降低AA大鼠的足爪腫脹數(shù),改善免疫器官指數(shù),下調(diào)血清IgM水平,抑制脾臟淋巴細(xì)胞增殖,下調(diào)脾臟CD45R+B細(xì)胞上BAFF-R表達(dá)；CP-25體外給藥可以下調(diào)BAFF刺激的脾臟淋巴細(xì)胞IgM水平,抑制脾臟淋巴細(xì)胞增殖,下調(diào)脾臟淋巴細(xì)胞BAFF-R、TRAF2、Bcl-2表達(dá),上調(diào)Bax表達(dá)。提示CP-25對(duì)大鼠AA的治療作用與其調(diào)控淋巴細(xì)胞BAFF及其受體BAFF-R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CP-25 CD45R~+B 細(xì)胞 佐劑性關(guān)節(jié)炎 B 淋巴細(xì)胞刺激因子 BAFF-RTRAF2 Bax Bcl-2
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.22
【目錄】：

• 英文縮略詞對(duì)照(Abbreviation)7-9
• 中文摘要9-13
• Abstract13-18
• 1 前言18-19
• 2 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2.1 動(dòng)物19
• 2.2 藥物19
• 2.3 試劑19-20
• 2.4 儀器與設(shè)備20
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 3.1 大鼠AA模型的建立20-21
• 3.2 動(dòng)物分組及給藥方法21
• 3.2.1 AA大鼠炎癥免疫反應(yīng)不同階段分組21
• 3.2.2 AA大鼠給藥分組及給藥方法21
• 3.3 足爪腫脹數(shù)測(cè)定21
• 3.4 免疫器官指數(shù)檢n,21
• 3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢n,BAFF-R、TACI、BCMA在牌臟CD45R、細(xì)胞上的表達(dá)21-22
• 3.6 細(xì)胞上清及血清中細(xì)胞因子水平的檢n,22
• 3.7 大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的檢測(cè)22
• 3.8 大鼠脾臟組織和脾臟淋巴細(xì)胞中BAFF-R mRNA表達(dá)的測(cè)定22-24
• 3.8.1 大鼠脾臟組織總RNA的提取22-23
• 3.8.2 逆轉(zhuǎn)錄23-24
• 3.8.3 Q-PCR24
• 3.9 脾臟組織和脾臟淋巴細(xì)胞中BAFF-R、TRAF2、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)測(cè)定24-28
• 3.9.1 免疫組織化學(xué)方法24-25
• 3.9.2 蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理28
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-43
• 4.1 AA大鼠在炎癥免疫反應(yīng)不同階段血清BAFF、IgM水平變化28-29
• 4.2 BAFF三個(gè)受體BAFF-R、TACI、BCMA在AA大鼠脾臟CD45R~+B細(xì)胞中的表達(dá)29-30
• 4.3 CP-25整體給藥對(duì)AA大鼠足爪腫脹數(shù)及免疫器官指數(shù)的影響30-33
• 4.3.1 CP-25對(duì)AA大鼠足爪腫脹數(shù)的影響30-32
• 4.3.2 CP-25對(duì)AA大鼠免疫器官指數(shù)的影響32-33
• 4.4 CP-25灌胃給藥對(duì)AA大鼠脾臟淋巴細(xì)胞功能的影響33-35
• 4.4.1 CP-25對(duì)AA大鼠血清中IgM分泌水平的影響33-34
• 4.4.2 CP-25對(duì)AA大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖功能的影響34-35
• 4.5 CP-25灌胃給藥對(duì)AA大鼠脾臟BAFF-R表達(dá)的影響35-38
• 4.5.1 CP-25對(duì)AA大鼠脾臟BAFF-R mRNA表達(dá)的影響35-36
• 4.5.2 CP-25對(duì)AA大鼠脾臟BAFF-R蛋白表達(dá)影響36-38
• 4.6 CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞功能的影響38-40
• 4.6.1 CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟淋巴淋巴細(xì)胞IgM分泌的影響38-39
• 4.6.2 CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖功能的影響39-40
• 4.7 CP-25體外對(duì)BAFF刺激正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞BAFF-R、TRAF2、Bax、Bcl-2表達(dá)變化的影響40-43
• 4.7.1 CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟淋巴細(xì)胞BAFF-R的影響40-41
• 4.7.2 CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟細(xì)胞TRAF2的影響41-42
• 4.7.3 CP-25體外對(duì)BAFF刺激的正常大鼠脾臟細(xì)胞Bax、BCl-2的影響42-43
• 5 討論43-47
• 5.1 BAFF-BAFF-R在大鼠AA發(fā)生發(fā)展中具有重要作用43
• 5.2 BAFF-BAFF-R及其TRAF2-Bax/Bcl-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控淋巴細(xì)胞功能參與大鼠AA發(fā)生發(fā)展43-45
• 5.3 CP-25對(duì)大鼠AA的治療作用與其調(diào)節(jié)BAFF-BAFF-R-TRAF2-Bax/Bcl-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、控制淋巴細(xì)胞功能有關(guān)45-47
• 6 結(jié)論47-48
• 7 參考文獻(xiàn)48-53
• 附錄53-55
• 致謝55-57
• 綜述57-68
• 參考文獻(xiàn)62-68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 李影;陳鏡宇;張玲玲;魏偉;;腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子參與炎癥免疫調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2015年09期

2 王春;袁君;魏偉;;芍藥苷-6-O'-苯磺酸酯體外降解動(dòng)力學(xué)研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年09期

3 王春;袁君;魏偉;;芍藥苷-6-O'-苯磺酸酯理化性質(zhì)研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

4 黃蓓;汪慶童;劉亢亢;姜玲;魏偉;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中TNF-α信號(hào)通路與CD4~+T細(xì)胞的關(guān)系[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2013年07期

5 宋珊珊;張玲玲;魏偉;;實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型建立及病理機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2011年12期

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本文編號(hào)：565875