本文關(guān)鍵詞：人體脂肪干細(xì)胞對(duì)Ⅰ型糖尿病的治療潛能，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景Ⅰ型糖尿病的胰島移植治療一直面臨供體來(lái)源不足與免疫排斥兩大關(guān)鍵問(wèn)題，尋找一種自體來(lái)源的種子細(xì)胞通過(guò)組織工程方法制備類胰島組織可以提供充足新型供體、降低異基因供體移植的副反應(yīng)。目的研究成人脂肪干細(xì)胞（Humanadipose-derived stem cells, hASCs）體外分化為對(duì)葡萄糖敏感、可分泌胰島素的功能性胰島樣細(xì)胞團(tuán)（Islet-like clusters, ILCs）的能力，探索體外制備類胰島組織的技術(shù)路線，觀察誘導(dǎo)后胰島樣細(xì)胞團(tuán)對(duì)Ⅰ型糖尿病的治療效果。方法首先分離純化人體脂肪干細(xì)胞，利用流式細(xì)胞分析、多向誘導(dǎo)分化等方法鑒定其干細(xì)胞特性，采用新型植物誘導(dǎo)劑Conophylline（CNP）與其它誘導(dǎo)因子的不同組合將脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)，觀察不同組合的誘導(dǎo)分化效率，并利用特異性染色、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），免疫細(xì)胞化學(xué)等方法對(duì)誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞團(tuán)在基因水平與蛋白水平上進(jìn)行鑒定，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞團(tuán)在不同濃度葡萄糖刺激下胰島素的分泌情況，最后將誘導(dǎo)后的胰島樣細(xì)胞團(tuán)移植到Ⅰ型糖尿病小鼠體內(nèi)，觀察小鼠血糖變化，評(píng)價(jià)其對(duì)血糖水平的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果數(shù)據(jù)顯示脂肪干細(xì)胞具有多能干細(xì)胞特性，可誘導(dǎo)分化為具有胰島素分泌和葡萄糖濃度反應(yīng)性類胰島細(xì)胞團(tuán)；Conophylline與尼克酰胺聯(lián)合誘導(dǎo)可大幅度提高誘導(dǎo)分化效率；移植ILCs的糖尿病小鼠血糖水平在一周內(nèi)恢復(fù)正常。結(jié)論脂肪干細(xì)胞具有廣闊的臨床應(yīng)用前景，具備用來(lái)替代異體胰島組織通過(guò)移植治療治Ⅰ型糖尿病的可能。
【關(guān)鍵詞】：脂肪干細(xì)胞 胰島樣細(xì)胞團(tuán) 糖尿病 胰島素 分化
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第一章 前言9-15
• 1.1 糖尿病9-11
• 1.1.1 糖尿病現(xiàn)狀9
• 1.1.2 糖尿病的發(fā)病機(jī)制9
• 1.1.3 糖尿病的治療方法9-11
• 1.2 脂肪干細(xì)胞11-12
• 1.2.1 脂肪干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)與命名11
• 1.2.2 脂肪干細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)11
• 1.2.3 脂肪干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞11-12
• 1.3 誘導(dǎo)因子的多樣性12
• 1.4 Conophylline12-13
• 1.4.1 Conophylline 簡(jiǎn)介12-13
• 1.4.2 Conophylline 促進(jìn)胰島β細(xì)胞的增殖與再生13
• 1.4.3 誘導(dǎo)機(jī)制13
• 1.5 本課題的研究目的與研究方案13-15
• 第二章 人體脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定15-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 2.1.1 組織來(lái)源15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備16
• 2.1.4 溶液的配制16-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-18
• 2.2.1 hASCs 的體外分離與原代培養(yǎng)17
• 2.2.2 hASCs 的傳代培養(yǎng)17
• 2.2.3 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定17
• 2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) hASCs 表面特異性蛋白17-18
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)方法18
• 2.3 結(jié)果18-22
• 2.3.1 脂肪干細(xì)胞的分離過(guò)程18
• 2.3.2 hASCs 的形態(tài)學(xué)觀察18-20
• 2.3.3 生長(zhǎng)曲線20-21
• 2.3.4 hASCs 的表面抗原特征21-22
• 2.4 討論22-24
• 第三章 體外誘導(dǎo) hASCs 向脂肪、成骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究24-34
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料24-26
• 3.1.1 細(xì)胞來(lái)源24
• 3.1.2 主要試劑24-25
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備25
• 3.1.4 溶液的配制25-26
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法26-30
• 3.2.1 hASCs 的分離培養(yǎng)與鑒定26
• 3.2.2 體外誘導(dǎo) hASCs 分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞26
• 3.2.3 特異性染色26
• 3.2.4 RT-PCR 檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞基因表達(dá)情況26-29
• 3.2.5 免疫細(xì)胞化學(xué)分析29-30
• 3.3 結(jié)果30-33
• 3.3.1 誘導(dǎo)細(xì)胞的形態(tài)變化與特異性染色30-31
• 3.3.2 RT-PCR 分析誘導(dǎo)后細(xì)胞的基因表達(dá)情況31-32
• 3.3.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè) Leptin、Osteopontin 蛋白的表達(dá)32-33
• 3.4 討論33-34
• 第四章 Conophylline 尼克酰胺聯(lián)合高效誘導(dǎo) hASCs 為功能性類胰島細(xì)胞34-45
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料34-36
• 4.1.1 細(xì)胞來(lái)源34
• 4.1.2 主要試劑34-35
• 4.1.3 主要儀器與設(shè)備35
• 4.1.4 溶液的配制35-36
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法36-38
• 4.2.1 hASCs 的分離培養(yǎng)與鑒定36
• 4.2.2 體外誘導(dǎo) hASCs 分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)36
• 4.2.3 雙硫腙染色36-37
• 4.2.4 RT-PCR37
• 4.2.5 免疫細(xì)胞化學(xué)分析37
• 4.2.6 葡萄糖刺激胰島素分泌實(shí)驗(yàn)37-38
• 4.2.7 統(tǒng)計(jì)方法38
• 4.3 結(jié)果38-42
• 4.3.1 細(xì)胞形態(tài)變化38-39
• 4.3.2 雙硫腙染色39
• 4.3.3 不同誘導(dǎo)方式胰島素的分泌量39-40
• 4.3.4 RT-PCR 檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞的基因表達(dá)情況40-41
• 4.3.5 免疫細(xì)胞化學(xué)分析41
• 4.3.6 葡萄糖刺激胰島素分泌（GSIS）41-42
• 4.4 討論42-45
• 第五章 胰島樣細(xì)胞團(tuán)體內(nèi)移植治療Ⅰ型糖尿病小鼠的潛能45-53
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 5.1.2 主要試劑45
• 5.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器45-46
• 5.1.4 溶液的配制46
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法46-47
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇與分組46
• 5.2.2 2%STZ 檸檬酸溶液的制備46
• 5.2.3 Ⅰ型糖尿病模型的構(gòu)建46
• 5.2.4 細(xì)胞移植46-47
• 5.2.5 體重與血糖檢測(cè)47
• 5.2.6 統(tǒng)計(jì)方法47
• 5.3 結(jié)果47-50
• 5.3.1 Ⅰ型糖尿病小鼠模型的構(gòu)建47-48
• 5.3.2 細(xì)胞移植后小鼠的血糖變化情況48-49
• 5.3.3 細(xì)胞移植后小鼠體重、生長(zhǎng)狀況分析49-50
• 5.4 討論50-53
• 第六章 結(jié)論與展望53-55
• 6.1 結(jié)論53-54
• 6.2 展望54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明61-62
• 附錄62-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 楊陽(yáng);劉寶瑞;錢曉萍;;Alamar Blue法用于體外培養(yǎng)細(xì)胞活性檢測(cè)的方法研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2006年01期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：人體脂肪干細(xì)胞對(duì)Ⅰ型糖尿病的治療潛能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：502310