本文關鍵詞：人體脂肪干細胞對Ⅰ型糖尿病的治療潛能，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景Ⅰ型糖尿病的胰島移植治療一直面臨供體來源不足與免疫排斥兩大關鍵問題，尋找一種自體來源的種子細胞通過組織工程方法制備類胰島組織可以提供充足新型供體、降低異基因供體移植的副反應。目的研究成人脂肪干細胞（Humanadipose-derived stem cells, hASCs）體外分化為對葡萄糖敏感、可分泌胰島素的功能性胰島樣細胞團（Islet-like clusters, ILCs）的能力，探索體外制備類胰島組織的技術路線，觀察誘導后胰島樣細胞團對Ⅰ型糖尿病的治療效果。方法首先分離純化人體脂肪干細胞，利用流式細胞分析、多向誘導分化等方法鑒定其干細胞特性，采用新型植物誘導劑Conophylline（CNP）與其它誘導因子的不同組合將脂肪干細胞誘導分化為胰島樣細胞團，觀察不同組合的誘導分化效率，并利用特異性染色、逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR），免疫細胞化學等方法對誘導分化后的細胞團在基因水平與蛋白水平上進行鑒定，ELISA法檢測細胞團在不同濃度葡萄糖刺激下胰島素的分泌情況，最后將誘導后的胰島樣細胞團移植到Ⅰ型糖尿病小鼠體內，觀察小鼠血糖變化，評價其對血糖水平的調節(jié)作用。結果數據顯示脂肪干細胞具有多能干細胞特性，可誘導分化為具有胰島素分泌和葡萄糖濃度反應性類胰島細胞團；Conophylline與尼克酰胺聯(lián)合誘導可大幅度提高誘導分化效率；移植ILCs的糖尿病小鼠血糖水平在一周內恢復正常。結論脂肪干細胞具有廣闊的臨床應用前景，具備用來替代異體胰島組織通過移植治療治Ⅰ型糖尿病的可能。
【關鍵詞】：脂肪干細胞 胰島樣細胞團 糖尿病 胰島素 分化
【學位授予單位】：天津大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第一章 前言9-15
• 1.1 糖尿病9-11
• 1.1.1 糖尿病現狀9
• 1.1.2 糖尿病的發(fā)病機制9
• 1.1.3 糖尿病的治療方法9-11
• 1.2 脂肪干細胞11-12
• 1.2.1 脂肪干細胞的發(fā)現與命名11
• 1.2.2 脂肪干細胞的優(yōu)勢11
• 1.2.3 脂肪干細胞分化為胰島素分泌細胞11-12
• 1.3 誘導因子的多樣性12
• 1.4 Conophylline12-13
• 1.4.1 Conophylline 簡介12-13
• 1.4.2 Conophylline 促進胰島β細胞的增殖與再生13
• 1.4.3 誘導機制13
• 1.5 本課題的研究目的與研究方案13-15
• 第二章 人體脂肪干細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定15-24
• 2.1 實驗材料15-17
• 2.1.1 組織來源15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要實驗儀器與設備16
• 2.1.4 溶液的配制16-17
• 2.2 實驗方法17-18
• 2.2.1 hASCs 的體外分離與原代培養(yǎng)17
• 2.2.2 hASCs 的傳代培養(yǎng)17
• 2.2.3 生長曲線的測定17
• 2.2.4 流式細胞術檢測 hASCs 表面特異性蛋白17-18
• 2.2.5 統(tǒng)計方法18
• 2.3 結果18-22
• 2.3.1 脂肪干細胞的分離過程18
• 2.3.2 hASCs 的形態(tài)學觀察18-20
• 2.3.3 生長曲線20-21
• 2.3.4 hASCs 的表面抗原特征21-22
• 2.4 討論22-24
• 第三章 體外誘導 hASCs 向脂肪、成骨細胞分化的實驗研究24-34
• 3.1 實驗材料24-26
• 3.1.1 細胞來源24
• 3.1.2 主要試劑24-25
• 3.1.3 主要實驗儀器與設備25
• 3.1.4 溶液的配制25-26
• 3.2 實驗方法26-30
• 3.2.1 hASCs 的分離培養(yǎng)與鑒定26
• 3.2.2 體外誘導 hASCs 分化為脂肪細胞、成骨細胞26
• 3.2.3 特異性染色26
• 3.2.4 RT-PCR 檢測誘導后細胞基因表達情況26-29
• 3.2.5 免疫細胞化學分析29-30
• 3.3 結果30-33
• 3.3.1 誘導細胞的形態(tài)變化與特異性染色30-31
• 3.3.2 RT-PCR 分析誘導后細胞的基因表達情況31-32
• 3.3.3 免疫細胞化學檢測 Leptin、Osteopontin 蛋白的表達32-33
• 3.4 討論33-34
• 第四章 Conophylline 尼克酰胺聯(lián)合高效誘導 hASCs 為功能性類胰島細胞34-45
• 4.1 實驗材料34-36
• 4.1.1 細胞來源34
• 4.1.2 主要試劑34-35
• 4.1.3 主要儀器與設備35
• 4.1.4 溶液的配制35-36
• 4.2 實驗方法36-38
• 4.2.1 hASCs 的分離培養(yǎng)與鑒定36
• 4.2.2 體外誘導 hASCs 分化為胰島樣細胞團36
• 4.2.3 雙硫腙染色36-37
• 4.2.4 RT-PCR37
• 4.2.5 免疫細胞化學分析37
• 4.2.6 葡萄糖刺激胰島素分泌實驗37-38
• 4.2.7 統(tǒng)計方法38
• 4.3 結果38-42
• 4.3.1 細胞形態(tài)變化38-39
• 4.3.2 雙硫腙染色39
• 4.3.3 不同誘導方式胰島素的分泌量39-40
• 4.3.4 RT-PCR 檢測誘導后細胞的基因表達情況40-41
• 4.3.5 免疫細胞化學分析41
• 4.3.6 葡萄糖刺激胰島素分泌（GSIS）41-42
• 4.4 討論42-45
• 第五章 胰島樣細胞團體內移植治療Ⅰ型糖尿病小鼠的潛能45-53
• 5.1 實驗材料45-46
• 5.1.1 實驗動物45
• 5.1.2 主要試劑45
• 5.1.3 主要實驗儀器45-46
• 5.1.4 溶液的配制46
• 5.2 實驗方法46-47
• 5.2.1 實驗動物的選擇與分組46
• 5.2.2 2%STZ 檸檬酸溶液的制備46
• 5.2.3 Ⅰ型糖尿病模型的構建46
• 5.2.4 細胞移植46-47
• 5.2.5 體重與血糖檢測47
• 5.2.6 統(tǒng)計方法47
• 5.3 結果47-50
• 5.3.1 Ⅰ型糖尿病小鼠模型的構建47-48
• 5.3.2 細胞移植后小鼠的血糖變化情況48-49
• 5.3.3 細胞移植后小鼠體重、生長狀況分析49-50
• 5.4 討論50-53
• 第六章 結論與展望53-55
• 6.1 結論53-54
• 6.2 展望54-55
• 參考文獻55-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明61-62
• 附錄62-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 楊陽;劉寶瑞;錢曉萍;;Alamar Blue法用于體外培養(yǎng)細胞活性檢測的方法研究[J];現代腫瘤醫(yī)學;2006年01期

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3 周光紀,屈紀富,徐海偉,楊麗,唐軍;無血清培養(yǎng)法誘導小鼠胚胎干細胞分化為胰島素分泌細胞的實驗條件優(yōu)化選擇[J];中國臨床康復;2005年34期

中國博士學位論文全文數據庫 前1條

1 賈海燕;骨髓間充質干細胞體外向胰島樣細胞誘導分化的實驗研究[D];四川大學;2007年

  本文關鍵詞：人體脂肪干細胞對Ⅰ型糖尿病的治療潛能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：502310