本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)高脂誘導(dǎo)肥胖與肥胖抵抗小鼠氧化還原狀態(tài)及肝臟基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：1）研究肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠采食量、營(yíng)養(yǎng)素消化率、氧化還原狀態(tài)、血糖、血脂、脂肪細(xì)胞因子及肝臟基因的差異，以揭示肥胖的發(fā)生機(jī)制；2）研究不同劑量白藜蘆醇（Resveratrol，RSV）對(duì)不同體重小鼠相關(guān)生理狀態(tài)的影響，為開(kāi)發(fā)預(yù)防高脂飲食引起肥胖癥及氧化應(yīng)激的營(yíng)養(yǎng)手段提供理論依據(jù)。 方法：以高脂日糧（HFD）飼喂雄性昆明小鼠12w后，按體重分為肥胖抵抗（DIO-R），中等體重（Med）和肥胖（DIO）三類(lèi)小鼠。每類(lèi)小鼠分為三組，，分別飼喂HFD、HFD+0.3g/kgRSV和HFD+0.6g/kg RSV日糧18w，并以正常日糧飼喂小鼠為對(duì)照(control)。宰殺前1w進(jìn)行消化實(shí)驗(yàn)。處死動(dòng)物后測(cè)定體重、睪周脂肪、腎周脂肪濕重，血、肝臟和脂肪組織過(guò)氧化氫酶（CAT）活力、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量等氧化還原指標(biāo)，血糖、血漿TG、TCH、LDL-C、HDL-C水平等血脂生化指標(biāo)，（白介素-6）IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、抵抗素（resistin）、脂聯(lián)素（ADP）等脂肪細(xì)胞因子水平，血漿瘦素（Leptin）、胰島素（Insulin）水平，同時(shí)進(jìn)行肝臟、脂肪組織切片觀察、肝臟基因表達(dá)譜分析和特定基因的RT-PCR分析。 結(jié)果：1）小鼠采食量、營(yíng)養(yǎng)素消化率比較：與control組相比，DIO-R HFD組小鼠采食量顯著下降，DIO HFD組干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)消化率顯著下降（P0.05）。RSV干預(yù)顯著降低各HFD組小鼠干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)消化率，提高其粗脂肪消化率。2）HFD組與control組小鼠的氧化還原狀態(tài)、炎性狀態(tài)比較：與control組小鼠相比，各HFD組小鼠機(jī)體的抗氧化能力下降，炎癥狀態(tài)加劇，表現(xiàn)為血漿和肝臟MDA、LDL-C、脂肪組織炎性細(xì)胞因子、血漿瘦素和胰島素、肝臟脂肪含量、脂肪細(xì)胞體積顯著升高（P0.05），血漿CAT和T-AOC、肝臟GSH-Px和T-AOC、脂肪組織ADP水平顯著降低（P0.05）。3）各HFD組小鼠之間氧化還原狀態(tài)、炎性狀態(tài)比較：與DIO小鼠相比，Med、DIO-R小鼠機(jī)體抗氧化能力增強(qiáng)，炎癥狀態(tài)減輕，表現(xiàn)為脂肪組織ADP水平顯著升高（P0.05），MDA、血糖、血漿TG，血漿瘦素和胰島素、脂肪組織炎性細(xì)胞因子IL-6、肝臟脂肪含量、脂肪組織體積顯著降低（P0.05）。長(zhǎng)期高脂膳食飼喂下小鼠機(jī)體的抗氧化能力：MedDIO-RDIO，而小鼠炎癥程度相反：MedDIO-RDIO。4）不同劑量白藜蘆醇對(duì)小鼠體重、血脂、氧化還原狀態(tài)、炎性狀態(tài)的改善作用：（1）體重、腹脂率：0.6g/kgRSV干預(yù)顯著減輕DIO小鼠體重、腹脂率，其減肥作用不是通過(guò)減少攝食引起的；0.3g/kgRSV干預(yù)可減輕Med小鼠體重，顯著降低其腹脂率；RSV干預(yù)對(duì)DIO-R小鼠體重?zé)o影響，但0.6g/kgRSV干預(yù)顯著降低其腹脂率。（2）氧化還原狀態(tài)：RSV干預(yù)顯著提高DIO、Med、DIO-R小鼠機(jī)體的抗氧化能力，表現(xiàn)為顯著提高小鼠血漿、肝臟、脂肪組織的CAT、GSH-Px活力、T-AOC水平，顯著降低肝臟、脂肪組織的ROS、MDA含量（P0.05）。（3）血糖、血脂：0.6g/kgRSV干預(yù)顯著降低DIO小鼠的血糖水平、血漿中TG、TC、LDL-C、HDL-C含量（P0.05）。（4）炎性狀態(tài)：RSV干預(yù)顯著減輕DIO、Med、DIO-R小鼠機(jī)體的炎性狀態(tài)，表現(xiàn)為顯著提高脂肪細(xì)胞保護(hù)因子ADP水平，顯著降低脂肪炎性細(xì)胞因子IL-6、resistin、TNF-α水平，顯著降低血漿leptin和insulin水平（P0.05）。（5）肝臟、脂肪組織切片：RSV干預(yù)顯著減小高脂飼喂小鼠肝臟組織中脂肪含量，使部分脂肪細(xì)胞體積明顯減小，呈顯著劑量依賴(lài)性。結(jié)果表明，不同體重水平小鼠對(duì)白藜蘆醇的需要量是不同的。0.3g/kgRSV干預(yù)對(duì)DIO-R、Med小鼠，0.6g/kgRSV干預(yù)對(duì)DIO小鼠氧化還原狀態(tài)、血糖血脂、炎性狀態(tài)有顯著的改善作用。0.6g/kgRSV干預(yù)引起DIO-R小鼠氧化應(yīng)激、血脂紊亂、炎癥加劇，提示劑量過(guò)高，促氧化。5）肝臟基因表達(dá)分析：（1）基因網(wǎng)絡(luò)顯著性及聚類(lèi)分析：體重和RSV處理依賴(lài)變化的通路：生理節(jié)律（Circadian rhythm），PPAR信號(hào)通路（PPAR signaling pathway）；白藜蘆醇主要調(diào)節(jié)通路：細(xì)胞粘附分子（Cell adhesion molecules）、白細(xì)胞經(jīng)內(nèi)皮遷移（leukocytetransendothelial migration）、泛素介導(dǎo)蛋白降解（Ubiauitin mediated proteolysis），這些通路與機(jī)體炎癥狀態(tài)、氧化應(yīng)激密切相關(guān)。（2）肝臟、脂肪組織中糖、脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)：肝臟中維持膽固醇和其它脂類(lèi)平衡的基因Cyp7a1在DIO-R HFD組顯著上調(diào)，在DIO HFD組下調(diào)，提示DIO小鼠膽固醇等脂類(lèi)代謝紊亂，0.6g/kg RSV干預(yù)顯著上調(diào)Cyp7a1在DIO小鼠肝臟的表達(dá)，維持脂類(lèi)代謝平衡；糖異生的限速酶Pck1在DIO-R HFD組、Med HFD組顯著下調(diào)，使血糖水平保持穩(wěn)定；長(zhǎng)鏈脂肪酸合成的限速酶Acacb在Med HFD組顯著下調(diào)，減少脂肪的合成，0.6g/kg RSV干預(yù)顯著下調(diào)Acacb在DIO小鼠肝臟的表達(dá)，抑制脂肪合成；與抗凋亡作用相關(guān)的基因Raf1在各HFD組顯著下調(diào)，脂肪細(xì)胞分化加劇，0.3g/kg RSV干預(yù)可顯著上調(diào)該基因的表達(dá)，抑制脂肪細(xì)胞分化。RSV干預(yù)可使DIO小鼠中上述基因表達(dá)水平恢復(fù)或部分恢復(fù)到正常水平。脂肪組織中除Pck1、Acacb、Socs3外，Cyp7a1和Irs1基因表達(dá)趨勢(shì)與肝臟中相近。 結(jié)論：1）無(wú)論高脂日糧能否引起肥胖，都會(huì)導(dǎo)致小鼠機(jī)體氧化應(yīng)激和全身慢性炎性狀態(tài)，提示高脂飲食習(xí)慣者均需外源補(bǔ)充抗氧化劑。2）白藜蘆醇可顯著改善長(zhǎng)期高脂日糧小鼠機(jī)體的氧化還原狀態(tài)及慢性炎性狀態(tài)，上調(diào)肝臟中Cyp7a1、Irs1、Raf1，下調(diào)Acacb、Socs3等基因的表達(dá)。3）0.3g/kg白藜蘆醇干預(yù)對(duì)肥胖抵抗、中等體重小鼠、0.6g/kg白藜蘆醇干預(yù)對(duì)肥胖小鼠氧化還原狀態(tài)、血脂代謝、脂肪細(xì)胞因子分泌、肝臟相關(guān)基因表達(dá)有顯著的改善作用。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 肥胖 肥胖抵抗 氧化還原狀態(tài) 基因芯片表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R589.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表8-12
• 1 引言12-18
• 1.1 高脂膳食與肥胖12-13
• 1.1.1 肥胖與肥胖抵抗12-13
• 1.2 肥胖與氧化應(yīng)激13-14
• 1.3 植物抗氧化劑調(diào)節(jié)氧化還原狀態(tài)14-16
• 1.3.1 白藜蘆醇的研究現(xiàn)狀14-15
• 1.3.2 白藜蘆醇的生物學(xué)功能15-16
• 1.3.2.1 延長(zhǎng)壽命15
• 1.3.2.2 抗癌作用15
• 1.3.2.3 對(duì)心血管的保護(hù)作用15
• 1.3.2.4 抗氧化作用15-16
• 1.3.2.5 抗炎作用16
• 1.4 立體意義及研究?jī)?nèi)容16-18
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)原料及主要試劑18
• 2.1.2 主要儀器18
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-24
• 2.2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)及小鼠肥胖模型的建立18-19
• 2.2.2 小鼠采食量及代謝實(shí)驗(yàn)19-20
• 2.2.3 體外粗蛋白、干物質(zhì)、有機(jī)物消化率的測(cè)定20
• 2.2.4 樣本采集20
• 2.2.4.1 血液樣本20
• 2.2.4.2 組織樣品20
• 2.2.4.3 組織切片樣品20
• 2.2.4.4 提取 RNA 樣品20
• 2.2.5 血漿及組織氧化還原指標(biāo)的測(cè)定20
• 2.2.5.1 全血及組織中 ROS 測(cè)定：20
• 2.2.5.2 血漿及組織中氧化還原指標(biāo)的測(cè)定20
• 2.2.6 血脂生化指標(biāo)的測(cè)定20
• 2.2.7 脂肪細(xì)胞因子的測(cè)定20-21
• 2.2.8 小鼠肝臟和脂肪組織切片的制備21
• 2.2.8.1 組織處理21
• 2.2.8.2 切片染色21
• 2.2.8.3 切片觀察21
• 2.2.9 肝臟和脂肪組織總 RNA 的提取21
• 2.2.9.1 總 RNA 的提取21
• 2.2.9.2 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA21
• 2.2.10 小鼠肝臟基因芯片的分析21-22
• 2.2.10.1 小鼠肝臟基因表達(dá)芯片的分析21
• 2.2.10.2 芯片結(jié)果數(shù)據(jù)預(yù)處理與分析21-22
• 2.2.11 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR22-23
• 2.2.12 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析23-24
• 3 結(jié)果與討論24-62
• 3.1 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠采食量及營(yíng)養(yǎng)素消化率的影響24-26
• 3.2 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠體重的影響26-27
• 3.3 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠生長(zhǎng)的影響27-28
• 3.4 小鼠體重與肝臟濕重、睪周脂肪重、腎周脂肪重、肝臟指數(shù)、腹脂率、Lee’s 指數(shù)的相關(guān)性分析28-29
• 3.5 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠血漿和組織氧化還原指標(biāo)的影響.29-33
• 3.5.1 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠血漿氧化還原指標(biāo)的影響29-30
• 3.5.2 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠肝臟氧化還原指標(biāo)的影響30-31
• 3.5.3 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠脂肪組織氧化還原指標(biāo)的影響31-33
• 3.6 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠血糖的影響33
• 3.7 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠血脂生化指標(biāo)的影響33-34
• 3.8 自由基、酶活性與血脂的相關(guān)性分析34-35
• 3.9 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠脂肪細(xì)胞因子的影響35-37
• 3.10 自由基、酶活性與脂肪細(xì)胞因子的相關(guān)性分析37
• 3.11 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠血漿瘦素和胰島素的影響37-39
• 3.12 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠肝臟和脂肪組織切片的影響39-45
• 3.12.1 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠肝臟切片的影響39-42
• 3.12.1.1 小鼠肝臟肉眼觀察39
• 3.12.1.2 肝臟光鏡觀察結(jié)果39-41
• 3.12.1.3 肝臟中脂肪含量41-42
• 3.12.2 白藜蘆醇對(duì)肥胖抵抗、中等體重及肥胖小鼠脂肪組織切片的影響42-45
• 3.12.2.1 脂肪組織光鏡觀察結(jié)果42-44
• 3.12.2.2 EWAT 脂肪細(xì)胞體積和數(shù)量44-45
• 3.13 肝臟基因表達(dá)譜分析45-59
• 3.13.1 GO 分析結(jié)果45-46
• 3.13.2 Onto-Tools 分析肝臟顯著變化的基因通路46-49
• 3.13.3 功能聚類(lèi)分析49-50
• 3.13.4 PPAR 信號(hào)通路中相關(guān)基因表達(dá)的變化50-52
• 3.13.5 胰島素信號(hào)通路中相關(guān)基因表達(dá)的變化52-53
• 3.13.6 脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路中相關(guān)基因表達(dá)的變化53-54
• 3.13.7 PPAR、胰島素、脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路中顯著變化基因的基因網(wǎng)絡(luò)分析54-56
• 3.13.8 定量 RT-PCR 驗(yàn)證芯片結(jié)果56-59
• 3.14 長(zhǎng)期高脂膳食及 RSV 干預(yù)對(duì)小鼠脂肪相關(guān)基因表達(dá)的影響59-62
• 論文主要結(jié)論62-63
• 展望63-64
• 致謝64-66
• 附錄 1 GO 分析結(jié)果66-71
• 附錄 2 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文71-72
• 參考文獻(xiàn)72-77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 田方;金紅星;成文玉;;小鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的建立[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年36期

2 馬寧;王建芬;徐芳;李媛;李娟;;白藜蘆醇的研究概述[J];長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年01期

3 李金容;閆劍群;陳坷;王倩;趙小林;張Z

本文編號(hào)：446905