目的:制備粒細(xì)胞樣髓源性抑制細(xì)胞(granulocytic myeloid-derived suppressor cells,G-MDSCs)來源的外泌體(exosomes),觀察G-MDSCs來源的exosomes(G-exosomes)對小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis,CIA)發(fā)生發(fā)展的影響,研究G-exosomes對調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regulatory B cell,Breg)的調(diào)控作用及其可能的機(jī)制。方法(1)小鼠右下腹皮下注射2×10～6個Lewis肺癌細(xì)胞,構(gòu)建肺癌移植瘤模型。磁珠分選荷瘤小鼠脾臟中的G-MDSCs,于含10%超離胎牛血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)16-20小時,收集培養(yǎng)上清。超速離心法聯(lián)合外泌體提取試劑盒制備G-exosomes。利用Western blot檢測G-exosomes表面分子,透射電子顯微鏡觀察G-exosomes的形態(tài),納米顆粒追蹤分析檢測G-exosomes粒徑大小。(2)將牛II型膠原(C-II)與弗氏完全佐劑1:1混合,充分研磨至油包水乳化物,取100μg乳化物于小鼠尾根部皮內(nèi)注射,初次免疫當(dāng)日為第0天;第2...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.2MVB的形成和外泌體胞吐的示意圖

DSCs外泌體通過調(diào)控Breg細(xì)胞減輕小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的實(shí)驗(yàn)研究osomes在CIA小鼠中的作用osomes的形成世紀(jì)八十年代，外泌體首次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，后被命mes”[49]。它們分布在整個身體中，并在體液中恢復(fù)[50]。目前外泌體不明確，但大多....

圖1.3外泌體的合成及分子組成

圖1.3外泌體的合成及分子組成[59]Figure1.3Exosomebiogenesisandmolecularcomposition[59]mes的免疫調(diào)節(jié)作用家對外泌體的興趣來自于1996年發(fā)現(xiàn)的免疫細(xì)胞，愛潑斯坦-轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞能夠通過分泌MV....

圖2.1磁珠分選G-MDSCs細(xì)胞的純度

pCS5軟件檢測exosomes的大小。析exosomes粒徑大小分離的exosomes，利用ZetaView并分析exosomes的粒徑大小。鑒定-MDSCs細(xì)胞用FITCanti-mouse染色，通過FCM進(jìn)行檢測，顯示實(shí)驗(yàn)的要求（如圖2.1）....

圖2.2G-exosomes表面分子的檢測

控Breg細(xì)胞減輕小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎發(fā).1ThepurityofG-MDSCsselectedbyMAC子的檢測exosomes特異性標(biāo)志分子CD63及ca性表達(dá)CD63分子，但不表達(dá)calne

本文編號：4038963