隨著肥胖患者的急劇增多,與之相關(guān)的2型糖尿病、動脈粥樣硬化、心血管疾病以及癌癥等疾病患者不斷增加,這也使得肥胖成為覆蓋全球的重大健康難題。研究表明,肥胖的產(chǎn)生與肥胖基因(ob)編碼的瘦素蛋白(leptin)水平的失控有著密不可分的關(guān)系。瘦素的主要生理作用是控制食物攝入,增加機體能量消耗。鑒于此研究,開始探索利用瘦素治療肥胖的可能性,然而瘦素抵抗現(xiàn)象的存在使得瘦素在臨床治療中并沒有效果,只對少部分基因突變的缺乏瘦素的肥胖個體有效果。而新的研究也提供了新的方向:通過注射中性瘦素抗體能夠與血液中的循環(huán)瘦素發(fā)生免疫反應(yīng),瘦素抗體與血液中的循環(huán)瘦素結(jié)合,中和抵消血液中的瘦素進(jìn)而恢復(fù)瘦素的敏感性,使得正常肥胖患者體內(nèi)的瘦素可以發(fā)揮正常的生理功能。釀酒酵母能夠刺激樹突狀細(xì)胞(DCs)發(fā)生免疫反應(yīng),之后圍繞著樹突狀細(xì)胞以及酵母互作開發(fā)的免疫療法逐漸取得世人的關(guān)注。從最初的蛋白表達(dá)系統(tǒng)到表面展示系統(tǒng),再到之后的DNA/m RNA/sh RNA等核酸系統(tǒng),該系統(tǒng)的免疫效果逐步優(yōu)化增強。本研究將ob基因與重組酵母系統(tǒng)相結(jié)合,開發(fā)一種針對瘦素調(diào)控的ob基因重組酵母,并利用活體實驗驗證了在不同飲食條件(高脂組、正...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肥胖基因與瘦素
        1.1.1 肥胖基因
        1.1.2 瘦素
    1.2 leptin與瘦素受體(Lep R)的基本結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.1 leptin的基本結(jié)構(gòu)
        1.2.2 瘦素受體(LepR)的基本結(jié)構(gòu)
        1.2.3 leptin的功能
    1.3 瘦素抵抗及選擇性瘦素抵抗及其機制
        1.3.1 瘦素抵抗及其機制
        1.3.2 選擇性瘦素及其抵抗機制
    1.4 瘦素抵抗的治療靶標(biāo)
    1.5 口服疫苗技術(shù)
        1.5.1 口服疫苗技術(shù)原理
        1.5.2 口服疫苗技術(shù)優(yōu)缺點
    1.6 酵母與免疫的研究
    1.7 重組釀酒酵母介導(dǎo)的免疫
        1.7.1 重組酵母介導(dǎo)的口服蛋白疫苗
        1.7.2 重組酵母介導(dǎo)的口服DNA/RNA疫苗
    1.8 本研究的目的和意義
第二章 ob基因重組酵母的構(gòu)建
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基的配制
        2.1.4 引物
        2.1.5 試劑配方
    2.2 試驗方法
        2.2.1 ob基因的擴增及JMB84-CMV-ob-poly A真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 JMB84-CMV-OVA-ob-poly A真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A真核表達(dá)載體構(gòu)建及細(xì)胞表達(dá)
        2.2.4 ob基因重組酵母的鑒定及制備
        2.2.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建以及重組leptin蛋白的純化
    2.3 試驗結(jié)果
        2.3.1 ob基因的擴增及JMB84-CMV-ob-poly A真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 JMB84-CMV-OVA-ob-poly A真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.3 JMB84-CMV-OVA-ob-T2A-GFP-poly A真核表達(dá)載體構(gòu)建及細(xì)胞表達(dá)
        2.3.4 ob基因重組酵母的鑒定及制備
        2.3.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建以及重組leptin蛋白的純化
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 ob基因重組酵母的活體驗證
    3.1 試驗材料
        3.1.1 重組酵母
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 試劑
        3.1.4 試劑的配制
    3.2 試驗方法
        3.2.1 實驗動物分組
        3.2.2 動物的免疫程序
        3.2.3 實驗動物體重及采食量分析
        3.2.4 實驗動物血液以及組織樣品采集
        3.2.5 血液中l(wèi)eptin抗體鑒定以及抗體效價比較
        3.2.6 血液中l(wèi)eptin含量測定
        3.2.7 總膽固醇和甘油三酯的測定
        3.2.8 肝臟組織學(xué)分析
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 正常組飼喂ob基因重組酵母的驗證
        3.3.2 高脂組飼喂ob基因重組酵母的驗證
        3.3.3 高脂-正常組飼喂ob基因重組酵母的驗證
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷



本文編號：4035634