目的從臨床、分子、細(xì)胞水平上探討肝細(xì)胞內(nèi)FFA的沉積對(duì)肝臟胰島素抵抗的作用,為2型糖尿病的診治提供新的思路。方法1.收集病例:本研究選擇2016年12月至2017年11月期間在南通大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的2型糖尿病患者,年齡30歲至70歲。按照排除標(biāo)準(zhǔn)去除不合適病例后,根據(jù)腰圍分為腹型肥胖組(病例組)和非腹型肥胖組(對(duì)照組)兩組。收集資料包括患者基本資料、臨床檢驗(yàn)檢查資料、既往病史及生活習(xí)慣資料。分析腹型肥胖與糖尿病的相關(guān)性。2.建立細(xì)胞模型:在不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,加入0.25mM棕櫚酸(PA)刺激HepG2細(xì)胞24h。采用免疫共沉淀(IP)檢測(cè)Prdx1與GRP78之間的相互作用,利用免疫熒光了解細(xì)胞內(nèi)共定位;以Flag-Prdx1質(zhì)粒、Flag質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,然后給予PA刺激,通過(guò)IP檢測(cè)Flag-Prdx1與GRP78之間的相互作用。用Flag-Prdx1、Flag、si-Prdx1、si-CON轉(zhuǎn)染細(xì)胞,通過(guò)Werstern blot和qRT-PCR檢測(cè)p-AKT、p-GSK3β、GRP78、p-IRE1α、PEPCK、G6Pase表達(dá)水平,通過(guò)葡萄糖比色/...

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1GRP78直接與Prdx1發(fā)生相互作用A:免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中，將HepG2細(xì)胞裂解蛋白分為三份，一份作為Input，一份加入Prdx1抗體，另一份加入IgG抗體，在westenblot（WB）實(shí)驗(yàn)中，給予抗Prdx1和GRP78抗體檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)

18圖1GRP78直接與Prdx1發(fā)生相互作用A:免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中，將HepG2細(xì)胞裂解蛋白分為三份，一份作為Input，一份加Prdx1抗體，另一份加入IgG抗體，在westenblot（WB）實(shí)驗(yàn)中，給予抗Prdx1GRP78抗體檢測(cè)相關(guān)蛋白表....

圖2抑制Prdx1阻斷ERS和肝臟IRA:westernblot實(shí)驗(yàn)展示了三種不同干擾位點(diǎn)的siRNAs在HepG2細(xì)胞中對(duì)Prdx1的干擾效率

20圖2抑制Prdx1阻斷ERS和肝臟IRA:westernblot實(shí)驗(yàn)展示了三種不同干擾位點(diǎn)的siRNAs在HepG2細(xì)胞中對(duì)Prd的干擾效率。B:Prdx1被干擾后該蛋白表達(dá)水平的量化圖。C-D:HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)Prdx1siRNA#....

圖3Prdx1對(duì)胰島素抵抗的HepG2細(xì)胞脂質(zhì)代謝、葡萄糖攝取和葡萄糖生成的影響

22圖3Prdx1對(duì)胰島素抵抗的HepG2細(xì)胞脂質(zhì)代謝、葡萄糖攝取和葡萄糖生成的影A:油紅O染色法測(cè)定肝細(xì)胞脂質(zhì)積累:CON組、PA組、PA+Flag組、PA+Flag-Prdx1PA+si-CON組、PA+si-Prdx1組。B：用葡萄糖熒光測(cè)定試劑盒顯....

本文編號(hào)：4023154