發(fā)布時間：2024-06-06 01:03

　　背景miRNA是一類內(nèi)源性、序列高度保守、長約22個核苷酸的單鏈非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平對靶基因表達進行調(diào)控。miRNAs參與了生物體諸多生理和病理過程。脂質(zhì)代謝紊亂是動脈粥樣硬化、肥胖、脂肪肝等代謝性疾病發(fā)生的病理基礎,迫切需要闡明其發(fā)生機制,開發(fā)新的調(diào)節(jié)脂代謝的藥物。雖然已有報道m(xù)iRNA通過多種途徑調(diào)控脂質(zhì)代謝從而影響動脈粥樣硬化的發(fā)展進程,然而miR-149-5p在脂質(zhì)代謝中的作用機制研究仍未見報道。本研究中我們將初步探索miR-149-5p在脂質(zhì)代謝中的作用及機制。目的探究miR-149-5p在脂質(zhì)代謝中的生物學效應及其作用機制。方法1.高脂血癥小鼠模型肝臟組織中miR-149-5p的定量檢測。選取8周齡C57BL/6小鼠及LDLR^-/-小鼠:C57BL/6小鼠分別使用普通飼養(yǎng)和高脂飼料飼養(yǎng),LDLR^-/-小鼠使用普通飼料飼養(yǎng)。15周后處死小鼠取肝臟組織提取miRNA,使用TaqMan~?MicroRNA Assays定量檢測miR-149-5p,并檢測各小鼠血清總膽固醇和甘油三酯含量,分析miR-149-5p表達與血清總膽固醇...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
引言
1.實驗材料、試劑與儀器
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗試劑
    1.3 溶液配制
    1.4 實驗儀器
2.實驗方法
    2.1 雙熒光素酶載體構建
    2.2 細胞培養(yǎng)
    2.3 轉(zhuǎn)染
    2.4 pmir-GLO載體雙熒光素酶報告分析
    2.5 mirVana^TM miRNA Isolation Kit提取miRNA
    2.6 miRNA的反轉(zhuǎn)錄與定量檢測
    2.7 細胞總mRNA的提取
    2.8 總mRNA反轉(zhuǎn)錄
    2.9 Real-Time PCR
    2.10 細胞內(nèi)總蛋白提取
    2.11 蛋白濃度測定
    2.12 Western Blot 實驗
    2.13 腺病毒擴增
    2.14 腺病毒提取
    2.15 腺病毒純化
    2.16 腺病毒滴度測定
    2.17 小鼠腺病毒注射
    2.18 THP-1 膽固醇外流實驗
    2.19 免疫組織化學染色
    2.20 HE染色
    2.21 統(tǒng)計學方法
3.實驗結(jié)果
    3.1 miR-149-5p在高脂血癥小鼠肝臟中的表達
    3.2 miR-149-5p的生物信息學預測分析結(jié)果
    3.3 miR-149-5p Agomir轉(zhuǎn)染劑量的選擇
    3.4 miR-149-5p預測靶基因的熒光素酶報告分析
    3.5 miR-149-5p在 HepG2 細胞中的作用
    3.6 miR-149-5p在 THP-1 細胞中的作用
    3.7 miR-149-5p在小鼠體內(nèi)的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
綜述 MircroRNA對脂質(zhì)代謝的調(diào)控
    參考文獻
致謝



本文編號：3990070