目的探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及其源性外泌體(exosome,EXO)對(duì)化療性卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)的修復(fù)作用及機(jī)制。方法體外分離、培養(yǎng)和鑒定BMSCs,提取并鑒定BMSCs源性EXO。建立POF大鼠模型,BMSCs及其源性EXO移植治療POF大鼠,通過(guò)(1)評(píng)估大鼠一般情況:體重、精神、毛發(fā)、進(jìn)食及二便;(2)采用陰道涂片檢測(cè)動(dòng)情周期;(3)ELISA檢測(cè)血清激素;(4)HE染色進(jìn)行卵巢卵泡計(jì)數(shù);(5)Tunnel及免疫組化檢測(cè)組織凋亡及調(diào)亡蛋白表達(dá)來(lái)評(píng)估BMSCs及其源性EXO對(duì)早衰模型大鼠的卵巢修復(fù)作用。體外分離、培養(yǎng)并鑒定大鼠卵巢顆粒細(xì)胞(GCs),建立體外POF模型(CTXGCs),建立CTX-GCs與BMSCs及其源性EXO的共培養(yǎng)體系,AnnexinV/PI檢測(cè)共培養(yǎng)處理后CTX-GCs的細(xì)胞凋亡;觀察CTX-GCs對(duì)BMSCs源性EXO的攝取及miR-144-5p表達(dá);改變共培養(yǎng)體系中BMSCs源性EXO中miR-144-5p水平,檢測(cè)CTX-G...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要縮略詞表
第一章 引言
    1.1 卵巢早衰概述
    1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞概述
    1.3 外泌體概述
    1.4 miRNA概述
    1.5 技術(shù)路線
第二章 BMSCs及其源性外泌體對(duì)POF的治療作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 BMSCs分離、培養(yǎng)與鑒定
        2.2.2 BMSCs源性外泌體提取與鑒定
        2.2.3 POF體內(nèi)大鼠模型的建立
        2.2.4 BMSCs及外泌體移植
        2.2.5 大鼠發(fā)情周期檢測(cè)
        2.2.6 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠血清激素水平
        2.2.7 卵巢形態(tài)和卵泡計(jì)數(shù)
        2.2.8 Tunnel法測(cè)組織凋亡
        2.2.9 免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)卵巢組織中Caspase3、Caspase9 的表達(dá)
        2.2.10 大鼠GCs的體外分離、培養(yǎng)及鑒定
        2.2.11 POF體外細(xì)胞模型的建立
        2.2.12 CTX-GCs與 BMSCs共培養(yǎng)
        2.2.13 外泌體標(biāo)記,追蹤實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 Annexin V-FITC法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 BMSCs及其外泌體鑒定
        2.3.2 POF體內(nèi)大鼠模型的鑒定
        2.3.3 BMSCs及其外泌體對(duì)POF大鼠卵巢功能的修復(fù)作用
        2.3.4 POF 體外細(xì)胞模型鑒定
        2.3.5 BMSCs及其外泌體對(duì)CTX-GCs凋亡的調(diào)節(jié)作用
    2.4 討論
第三章 BMSCs源性外泌體修復(fù)POF的機(jī)制
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 miRNA表達(dá)水平檢測(cè)
        3.2.2 免疫組化檢測(cè)卵巢組織中PTEN的表達(dá)
        3.2.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 miR-144-5p模擬物或抑制物轉(zhuǎn)染BMSCs及其外泌體
        3.2.5 CTX-GCs與轉(zhuǎn)染miRNA模擬物或抑制物的BMSCs源外泌體共培養(yǎng)
        3.2.6 AnnexinV/PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 BMSC及其源性EXO對(duì) POF體內(nèi)外模型中miRNA-144-5p表達(dá)水平的影響
        3.3.2 BMSC及其源性EXO對(duì) POF體內(nèi)外模型中PTEN表達(dá)水平的影響
        3.3.3 BMSCs外泌體對(duì)PTEN/PI3K/AKT通路的調(diào)控
    3.4 討論
第四章 結(jié)論和展望
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 工作展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表論文和參與課題情況
致謝



本文編號(hào)：3986668