目的探討骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)及其源性外泌體(exosome,EXO)對化療性卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)的修復作用及機制。方法體外分離、培養(yǎng)和鑒定BMSCs,提取并鑒定BMSCs源性EXO。建立POF大鼠模型,BMSCs及其源性EXO移植治療POF大鼠,通過(1)評估大鼠一般情況:體重、精神、毛發(fā)、進食及二便;(2)采用陰道涂片檢測動情周期;(3)ELISA檢測血清激素;(4)HE染色進行卵巢卵泡計數(shù);(5)Tunnel及免疫組化檢測組織凋亡及調亡蛋白表達來評估BMSCs及其源性EXO對早衰模型大鼠的卵巢修復作用。體外分離、培養(yǎng)并鑒定大鼠卵巢顆粒細胞(GCs),建立體外POF模型(CTXGCs),建立CTX-GCs與BMSCs及其源性EXO的共培養(yǎng)體系,AnnexinV/PI檢測共培養(yǎng)處理后CTX-GCs的細胞凋亡;觀察CTX-GCs對BMSCs源性EXO的攝取及miR-144-5p表達;改變共培養(yǎng)體系中BMSCs源性EXO中miR-144-5p水平,檢測CTX-G...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要縮略詞表
第一章 引言
    1.1 卵巢早衰概述
    1.2 間充質干細胞概述
    1.3 外泌體概述
    1.4 miRNA概述
    1.5 技術路線
第二章 BMSCs及其源性外泌體對POF的治療作用
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 實驗耗材
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 BMSCs分離、培養(yǎng)與鑒定
        2.2.2 BMSCs源性外泌體提取與鑒定
        2.2.3 POF體內(nèi)大鼠模型的建立
        2.2.4 BMSCs及外泌體移植
        2.2.5 大鼠發(fā)情周期檢測
        2.2.6 ELISA實驗檢測大鼠血清激素水平
        2.2.7 卵巢形態(tài)和卵泡計數(shù)
        2.2.8 Tunnel法測組織凋亡
        2.2.9 免疫組化實驗檢測卵巢組織中Caspase3、Caspase9 的表達
        2.2.10 大鼠GCs的體外分離、培養(yǎng)及鑒定
        2.2.11 POF體外細胞模型的建立
        2.2.12 CTX-GCs與 BMSCs共培養(yǎng)
        2.2.13 外泌體標記,追蹤實驗
        2.2.14 Annexin V-FITC法檢測細胞凋亡
        2.2.15 統(tǒng)計學分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 BMSCs及其外泌體鑒定
        2.3.2 POF體內(nèi)大鼠模型的鑒定
        2.3.3 BMSCs及其外泌體對POF大鼠卵巢功能的修復作用
        2.3.4 POF 體外細胞模型鑒定
        2.3.5 BMSCs及其外泌體對CTX-GCs凋亡的調節(jié)作用
    2.4 討論
第三章 BMSCs源性外泌體修復POF的機制
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 實驗耗材
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 實驗動物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 miRNA表達水平檢測
        3.2.2 免疫組化檢測卵巢組織中PTEN的表達
        3.2.3 Western Blot實驗
        3.2.4 miR-144-5p模擬物或抑制物轉染BMSCs及其外泌體
        3.2.5 CTX-GCs與轉染miRNA模擬物或抑制物的BMSCs源外泌體共培養(yǎng)
        3.2.6 AnnexinV/PI法檢測細胞凋亡
    3.3 實驗結果
        3.3.1 BMSC及其源性EXO對 POF體內(nèi)外模型中miRNA-144-5p表達水平的影響
        3.3.2 BMSC及其源性EXO對 POF體內(nèi)外模型中PTEN表達水平的影響
        3.3.3 BMSCs外泌體對PTEN/PI3K/AKT通路的調控
    3.4 討論
第四章 結論和展望
    4.1 主要結論
    4.2 工作展望
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表論文和參與課題情況
致謝



本文編號：3986668