第一部分OPG敲除改善高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖及其并發(fā)癥目的:探究OPG敲除對肥胖的影響,了解OPG與肥胖的初步關(guān)系方法:利用高脂飲食對純合OPG敲除鼠和C57野生型小鼠造肥胖模型,分為普食喂養(yǎng)野生型小鼠組(SD-WT)、普食喂養(yǎng)敲除小鼠組(SD-OPG^-/-)、高脂喂養(yǎng)野生型小鼠組(HFD-WT)、高脂喂養(yǎng)敲除小鼠組(HFD-OPG^-/-),從8周齡開始造模12周,每周測量體重。造模完成時(shí),測量四組小鼠的空腹血糖、攝食和肛溫,利用能量代謝評估系統(tǒng)監(jiān)測小鼠。取造模完成的小鼠組織,計(jì)算脂體比,取脂肪組織做石蠟切片,通過HE染色觀察脂肪細(xì)胞的形態(tài)大小。利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測i WAT棕色化指標(biāo)及脂肪形成相關(guān)指標(biāo),western blot檢測e WAT胰島素敏感性指標(biāo)。用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測普食喂養(yǎng)C57雄性小鼠的e WAT,i WAT及BAT中OPG的m RNA表達(dá)情況,再用western blot檢測OPG在三種脂肪組織中的蛋白表達(dá)水平。通過定量PCR的方法檢測普食喂養(yǎng)C57小鼠、高脂喂養(yǎng)C57小鼠、db/db小鼠的皮下脂肪組織中的OPG的...

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1退火溫度摸索的PCR反應(yīng)程序

不同的引物可能存在不同的最佳退火溫度,新設(shè)計(jì)的引物需要摸索最佳退火溫度。將豎列的8聯(lián)管中加入相同的樣本及引物,設(shè)置如下的PCR反應(yīng)程序。根據(jù)CT值及溶解曲線選擇最佳退火溫度。

圖1.2蛋白質(zhì)濃度檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線

在540nm處進(jìn)行比色,測量吸光度值并計(jì)算樣本蛋白濃度。2.16蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Westernblot)

圖1.3OPG敲除鼠繁殖后基因鑒定跑膠圖

利用OPG雜合子或純合子進(jìn)行配種后,進(jìn)行大量繁殖。新出生的小鼠第6周剪鼠尾行基因型鑒定。鑒定結(jié)果如圖1.3所示,雜合子配種繁殖得到雜合子、純合子及野生型。進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖得到大批量純合子(圖1.3)。3.2造模小鼠體重變化

圖1.4小鼠大體照

將8周齡的WT小鼠和OPG敲除小鼠隨機(jī)各分為兩組,喂養(yǎng)普食或高脂飼料喂養(yǎng)12周,共分為以下四組,SD-WT,SD-OPG-/-,HFD-WT,HFD-OPG-/-。小鼠大體形態(tài)顯示,OPG敲除小鼠的體型明顯小于WT小鼠(圖1.4)。體重結(jié)果分析顯示,普食喂養(yǎng)情況下,OPG敲除鼠的....

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