目的:觀察胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)類似物利拉魯肽(liraglutide)對棕櫚酸(palmitic acid,PA)誘導的小鼠胰島β細胞株Min6損傷的保護作用,并初步探討利拉魯肽對Min6細胞的保護作用與自噬的關系。方法:選用小鼠胰島β細胞Min6作為研究對象,采用棕櫚酸誘導建立胰島β細胞損傷模型,將對數生長期的Min6細胞隨機分為對照組:用普通培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;棕櫚酸組:用0.5mmol/L PA培養(yǎng)24h;利拉魯肽+棕櫚酸組:先加入100nmol/L利拉魯肽預培養(yǎng)2h,再與0.5mmol/L PA共同干預24h;利拉魯肽+棕櫚酸+雷帕霉素(Rapamycin,RAP)組:先以50nmol/L Rapamycin預培養(yǎng)2h,再與0.5mmol/L PA+100nmol/L利拉魯肽共同培養(yǎng)24h。干預結束后通過CCK8法檢測細胞的生長活力;流式細胞術檢測Min6細胞的凋亡情況;活性氧試劑盒檢測細胞內ROS的水平;RT-PCR技術測定Min6細胞自噬相關基因beclin-1mRNA及LC3-ⅡmRNA的表達水平;DAPI染色觀察...

【文章頁數】：38 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要實驗儀器和設備
    2.2 實驗用溶液的配制
        2.2.1 Min6細胞完全培養(yǎng)基的配制
        2.2.2 Min6細胞凍存液的配制
        2.2.3 棕櫚酸溶液的配制
        2.2.4 利拉魯肽溶液的配制
        2.2.5 雷帕霉素溶液的配制
    2.3 實驗步驟及過程
        2.3.1 細胞培養(yǎng)及分組
        2.3.2 CCK-8法檢測棕櫚酸、利拉魯肽對Min6細胞增殖活力的影響
        2.3.3 CCK-8法檢測利拉魯肽對棕櫚酸作用下Min6細胞增殖活力的影響并確定利拉魯肽的干預濃度
        2.3.4 Min6細胞內ROS水平的檢測
        2.3.5 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測Min6細胞的凋亡率
        2.3.6 RT-PCR檢測Min6細胞自噬相關基因的表達
        2.3.7 DAPI染色檢測棕櫚酸對Min6細胞形態(tài)的影響
        2.3.8 數據統(tǒng)計
第三章 結果
    3.1 棕櫚酸抑制Min6細胞的增殖
    3.2 利拉魯肽對Min6細胞增殖活力的影響
    3.3 利拉魯肽對棕櫚酸誘導的Min6細胞損傷的影響
    3.4 利拉魯肽抑制棕櫚酸誘導的Min6細胞氧化應激反應
    3.5 利拉魯肽對棕櫚酸誘導的Min6細胞凋亡的影響
    3.6 利拉魯肽對Min6細胞內自噬相關基因beclin-1、LC3-Ⅱ mRNA的影響
    3.7 DAPI染色檢測棕櫚酸對Min6細胞形態(tài)的影響
第四章 討論
    4.1 GLP-1對高脂環(huán)境胰島β細胞的保護作用及機制的初步探究
    4.2 創(chuàng)新性與不足
第五章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學期間研究成果
致謝



本文編號：3934575