目的:觀察胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)類(lèi)似物利拉魯肽(liraglutide)對(duì)棕櫚酸(palmitic acid,PA)誘導(dǎo)的小鼠胰島β細(xì)胞株Min6損傷的保護(hù)作用,并初步探討利拉魯肽對(duì)Min6細(xì)胞的保護(hù)作用與自噬的關(guān)系。方法:選用小鼠胰島β細(xì)胞Min6作為研究對(duì)象,采用棕櫚酸誘導(dǎo)建立胰島β細(xì)胞損傷模型,將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Min6細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組:用普通培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;棕櫚酸組:用0.5mmol/L PA培養(yǎng)24h;利拉魯肽+棕櫚酸組:先加入100nmol/L利拉魯肽預(yù)培養(yǎng)2h,再與0.5mmol/L PA共同干預(yù)24h;利拉魯肽+棕櫚酸+雷帕霉素(Rapamycin,RAP)組:先以50nmol/L Rapamycin預(yù)培養(yǎng)2h,再與0.5mmol/L PA+100nmol/L利拉魯肽共同培養(yǎng)24h。干預(yù)結(jié)束后通過(guò)CCK8法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)活力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Min6細(xì)胞的凋亡情況;活性氧試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的水平;RT-PCR技術(shù)測(cè)定Min6細(xì)胞自噬相關(guān)基因beclin-1mRNA及LC3-ⅡmRNA的表達(dá)水平;DAPI染色觀察...

【文章頁(yè)數(shù)】：38 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)用溶液的配制
        2.2.1 Min6細(xì)胞完全培養(yǎng)基的配制
        2.2.2 Min6細(xì)胞凍存液的配制
        2.2.3 棕櫚酸溶液的配制
        2.2.4 利拉魯肽溶液的配制
        2.2.5 雷帕霉素溶液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)步驟及過(guò)程
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
        2.3.2 CCK-8法檢測(cè)棕櫚酸、利拉魯肽對(duì)Min6細(xì)胞增殖活力的影響
        2.3.3 CCK-8法檢測(cè)利拉魯肽對(duì)棕櫚酸作用下Min6細(xì)胞增殖活力的影響并確定利拉魯肽的干預(yù)濃度
        2.3.4 Min6細(xì)胞內(nèi)ROS水平的檢測(cè)
        2.3.5 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)Min6細(xì)胞的凋亡率
        2.3.6 RT-PCR檢測(cè)Min6細(xì)胞自噬相關(guān)基因的表達(dá)
        2.3.7 DAPI染色檢測(cè)棕櫚酸對(duì)Min6細(xì)胞形態(tài)的影響
        2.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
第三章 結(jié)果
    3.1 棕櫚酸抑制Min6細(xì)胞的增殖
    3.2 利拉魯肽對(duì)Min6細(xì)胞增殖活力的影響
    3.3 利拉魯肽對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的Min6細(xì)胞損傷的影響
    3.4 利拉魯肽抑制棕櫚酸誘導(dǎo)的Min6細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)
    3.5 利拉魯肽對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的Min6細(xì)胞凋亡的影響
    3.6 利拉魯肽對(duì)Min6細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)基因beclin-1、LC3-Ⅱ mRNA的影響
    3.7 DAPI染色檢測(cè)棕櫚酸對(duì)Min6細(xì)胞形態(tài)的影響
第四章 討論
    4.1 GLP-1對(duì)高脂環(huán)境胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制的初步探究
    4.2 創(chuàng)新性與不足
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間研究成果
致謝



本文編號(hào)：3934575