目的:氟是一種人體必需微量元素,適量氟能夠維持機體正常生理功能,過量氟則會引起氟中毒。流行病學調查顯示,高氟地區(qū)兒童骨齡延遲,身高、體重、胸圍均低于正常同齡兒童。本課題組前期動物實驗和器官培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn)氟通過抑制軟骨內成骨過程損害長骨縱向生長。軟骨內成骨是骨形成的主要方式,此過程受到全身激素、細胞因子和局部產生的信號因子共同作用。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一種廣泛存在于生物細胞中的絲氨酸/蘇氨酸激酶,是細胞生長、增殖、分化、存活和自噬的中心調控因子。然而,氟是否通過PI3K/AKT/mTOR信號通路抑制軟骨內成骨尚未見報道。為此,我們通過體外器官培養(yǎng)胚胎大鼠脛骨和體外培養(yǎng)源于畸胎瘤細胞的小鼠軟骨發(fā)生細胞ATDC5細胞模擬軟骨細胞分化,觀察氟是否通過調控PI3K/AKT/m TOR信號通路抑制軟骨細胞的增殖和分化。本研究為闡明氟抑制長骨生長的機制提供線索,為氟骨癥的防治提供依據。實驗方法:本研究選取胚胎第20天的胎鼠脛骨,采用左右配對的方法分為兩組,左側脛骨為對照組,右側脛骨為染氟組(10-4M NaF),培養(yǎng)于含0.2...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1大鼠脛骨軟骨細胞中PCNA和p-S6免疫組化結果

中國醫(yī)科大學碩士學位論文103結果3.1氟抑制脛骨軟骨細胞增殖和mTOR的活性3.1.1氟對脛骨軟骨細胞增殖的影響免疫組化實驗結果顯示，對照組脛骨PCNA蛋白主要表達于軟骨細胞核內，呈棕黃色（圖1A）。染氟組脛骨PCNA陽性的軟骨細胞數(shù)目較對照組減少、染色較淺。定量結果顯示染氟組....

圖2CCK8法測定ATDC5細胞活力（n=6）

中國醫(yī)科大學碩士學位論文113.2氟對小鼠ATDC5細胞活力及形態(tài)影響3.2.1氟對ATDC5細胞活力的影響采用CCK8法檢測氟對ATDC5細胞活力的影響。如圖2所示，10-7M染氟組細胞活力高于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義。10-5M時，細胞活力開始下降，隨著染氟劑量增加，細胞活....

圖3ATDC5細胞的形態(tài)學觀察（n=3）

中國醫(yī)科大學碩士學位論文12圖3ATDC5細胞的形態(tài)學觀察（n=3）3.3氟對小鼠ATDC5細胞分化的影響。3.3.1ITS誘導ATDC5細胞分化ATDC5細胞保持著軟骨祖細胞原有的特性，在含有胰島素-轉鐵蛋白-硒（ITS）的DMEM培養(yǎng)基中可分化。如圖4所示，培養(yǎng)第5天，細胞快....

圖4分化的ATDC5細胞的形態(tài)學觀察（n=3）

中國醫(yī)科大學碩士學位論文13圖4分化的ATDC5細胞的形態(tài)學觀察（n=3）3.3.2氟對ATDC5細胞分化過程中蛋白多糖合成的影響阿利新藍染色實驗檢測ATDC5細胞蛋白多糖的合成情況并觀察軟骨結節(jié)的形成數(shù)量。如圖5所示，阿利新藍染色后蛋白多糖呈藍染。對照組細胞染色強度隨培養(yǎng)時間增....

本文編號：3933450