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TLR4及ROS在oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC凋亡中的作用探討

發(fā)布時(shí)間:2023-11-05 09:09
  研究目的:β2糖蛋白I(β-2-glycoprotein I,β2GPI)是抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome,APS)患者體中的自身抗原,針對該抗原的自身抗體抗β2GPI抗體(anti-β2GPI antibody,aβ2GPI)能夠通過TLR4依賴的方式參與APS的致病過程。APS患者有加速發(fā)展為動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的傾向,氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox LDL)作為AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因子,可以和β2GPI形成致AS的復(fù)合物ox LDL/β2GPI,對細(xì)胞有氧化與促進(jìn)脂質(zhì)積累的功能,ox LDL/β2GPI同時(shí)也能和β2GPI的抗體aβ2GPI形成ox LDL/β2GPI/aβ2GPI的復(fù)合物參與AS相關(guān)病理改變。本組前期實(shí)驗(yàn)表明,ox LDL/β2GPI/aβ2GPI能夠促進(jìn)一系列動(dòng)脈硬化相關(guān)因子活化,而內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙作為AS的始發(fā)因素,ox LDL/β2GPI/aβ2GPI對內(nèi)皮細(xì)胞的損傷卻尚未明確,所以本實(shí)驗(yàn)在相關(guān)文獻(xiàn)和前期研究基礎(chǔ)上旨在探討ox LDL/...

【文章頁數(shù)】:81 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
主要英文縮略詞索引
第一章 緒論
    1.1 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物與AS
        1.1.1 APS與AS
        1.1.2 β2GPI與aβ2GPI
        1.1.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞與APS、AS
        1.1.4 oxLDL/β2GPI復(fù)合物
        1.1.5 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物與AS
    1.2 TLR4/MyD88/IRAK信號(hào)通路
        1.2.1 TLRs的概況及TLR4配體
        1.2.2 TLR4信號(hào)通路
        1.2.3 TLR4/MyD88/IRAK信號(hào)通路與AS
    1.3 氧化應(yīng)激
        1.3.1 氧化應(yīng)激及其信號(hào)分子
        1.3.2 氧化應(yīng)激與AS
    1.4 凋亡
        1.4.1 凋亡信號(hào)通路及其常見標(biāo)志物
        1.4.2 凋亡與炎癥因子、氧化應(yīng)激
        1.4.3 凋亡與AS
    1.5 結(jié)語
第二章 研究內(nèi)容、方案設(shè)計(jì)與研究意義
    2.1 研究內(nèi)容
    2.2 方案設(shè)計(jì)
        2.2.1 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC凋亡及TLR2、TLR4、MyD88、IRAK4的表達(dá)
        2.2.2 TLR4、IRAK1/4抑制劑對oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC凋亡的影響
        2.2.3 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC氧化應(yīng)激
        2.2.4 抗氧化劑對oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC ROS升高的影響
        2.2.5 抗氧化劑對oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC凋亡的影響
    2.3 研究意義
第三章 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 其他試劑
        3.1.3 主要溶液的配制
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 人血漿β2GPI的提取、純化與鑒定
        3.2.2 兔抗人β2GPI多克隆抗體的制備與鑒定
        3.2.3 HUVEC的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代、凍存與鋪板
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)分組與劑量
        3.2.5 細(xì)胞總蛋白的提取及Western蛋白印跡
        3.2.6 細(xì)胞總RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄和RT-qPCR分析
        3.2.7 Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡水平
        3.2.8 CCK-8法法檢測細(xì)胞活力
        3.2.9 DCFH-DA檢測細(xì)胞活性氧
        3.2.10 BCA測定蛋白濃度
        3.2.11 總SOD試劑盒檢測細(xì)胞細(xì)胞超氧化物歧化酶活性(WST-8法)
        3.2.12 MDA試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化
        3.2.13 圖像采集與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第四章 結(jié)果
    4.1 β2GPI與aβ2GPI的提取及鑒定
    4.2 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)HUVEC凋亡
    4.3 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物促進(jìn)HUVEC TLR4、TLR2、MyD88、IRAK4的表達(dá)
    4.4 TLR4、IRAK1/4抑制劑減少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)的HUVEC凋亡
    4.5 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物促進(jìn)HUVEC ROS、MDA表達(dá),減少SOD表達(dá),減弱細(xì)胞活力
    4.6 抗氧化劑處理減少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物引起的HUVEC ROS升高,恢復(fù)部分細(xì)胞活力
    4.7 抗氧化劑處理減少oxLDL/β2GPI/aβ2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)的HUVEC凋亡
    4.8 討論
第五章 主要結(jié)論及展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章與參加的會(huì)議
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本文編號(hào):3860734

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