目的:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是代謝性疾病累及肝臟的主要病癥,是2型糖尿病的重要合并癥。炎癥、免疫、胰島素抵抗、氧化應(yīng)激、凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等多種機制均參與到NAFLD發(fā)展之中。其中,炎癥在NAFLD發(fā)生和進展中發(fā)揮重要作用,并且NAFLD的病理表現(xiàn)與肝臟巨噬細胞沉積及極化有密切關(guān)系。DPP-4抑制劑,作為臨床已廣泛應(yīng)用的新型降糖藥物,通過促進腸促胰素的產(chǎn)生而促進胰島素分泌,發(fā)揮葡萄糖依賴的降糖效果。近來研究,二肽基肽酶-4(DPP-4)是介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子,故有研究表明DPP-4抑制劑還可能通過其他作用機制發(fā)揮胰腺外治療作用。目前,DPP-4抑制劑對NAFLD作用報道很少且作用機制尚未完全闡述清楚,而沙格列汀作為DPP-4抑制劑家族的一種,在NAFLD中的作用機制尚未涉足。因此,基于DPP-4的炎癥介導(dǎo)作用,我們通過構(gòu)建動物模型、培養(yǎng)細胞進行體內(nèi)外實驗、應(yīng)用多種實驗技術(shù),研究沙格列汀是否通過抑制肝臟炎癥反應(yīng)而起到改善NAFLD作用。并且探討沙格列汀是否通過影響肝臟巨噬細胞的沉積及極化來起到抗炎作用。此外,我們進一步研究沙格列汀通過何種信號通路調(diào)控巨噬細胞極化并影響肝臟...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、沙格列汀干預(yù)2型糖尿病大鼠合并NAFLD模型
    1.1 對象及方法
        1.1.1 實驗動物及飼料
        1.1.2 實驗動物飼養(yǎng)
        1.1.3 主要試劑和儀器
        1.1.4 構(gòu)建2型糖尿病大鼠模型
        1.1.5 一般指標及生化檢查
        1.1.6 大鼠肝組織形態(tài)學(xué)觀察
        1.1.7 大鼠肝組織甘油三酯含量測定
        1.1.8 大鼠肝組織總膽固醇含量測定
        1.1.9 大鼠肝組織DPP-4酶活性檢測
        1.1.10 免疫組化法檢測大鼠肝組織NF-кB、TNF-α、IL-1β的表達
        1.1.11 免疫熒光法檢測大鼠肝組織CD68、iNOS、CD206的表達
        1.1.12 qRT-PCR檢測肝組織NF-кB、TNF-α、IL-1β mRNA表達
        1.1.13 Western Blotting檢測肝組織DPP-4、NF-кB、TNF-α、IL-1β、IL-6、CD68、iNOS、CD206、CaMKKβ、p-AMPK蛋白表達
        1.1.14 統(tǒng)計學(xué)方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 高脂飲食10周末大鼠體重、血糖及血脂情況
        1.2.2 IPGTT及AUC評價高脂喂養(yǎng)10周末大鼠糖耐量水平
        1.2.3 灌胃12周末大鼠一般情況、血糖、生化指標檢測
        1.2.4 大鼠肝組織形態(tài)學(xué)觀察
        1.2.5 大鼠肝組織甘油三酯及總膽固醇含量測定
        1.2.6 大鼠肝組織DPP-4酶活性及蛋白水平表達
        1.2.7 大鼠肝組織炎癥因子NF-кB、TNF-α、IL-1β、IL-6表達水平
        1.2.8 大鼠肝組織巨噬細胞浸潤水平及巨噬細胞表型差異
        1.2.9 Western Blotting檢測肝組織CaMKKβ、p-AMPK蛋白表達
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、沙格列汀對巨噬細胞極化的影響
    2.1 對象與方法
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 主要試劑和儀器
        2.1.3 細胞培養(yǎng)
        2.1.4 細胞分化誘導(dǎo)及藥物干預(yù)
        2.1.5 免疫熒光法檢測M1型巨噬細胞和M2型巨噬細胞表型
        2.1.6 Western Blotting檢測p-AMPK、NF-кB、TNF-α、CD206蛋白表達
        2.1.7 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 佛波酯(PMA)誘導(dǎo)分化THP-1單核細胞形態(tài)特點
        2.2.2 免疫熒光染色技術(shù)M1和M2型巨噬細胞鑒定
        2.2.3 Western Blotting檢測p-AMPK、NF-кB、TNF-α和CD206蛋白表達
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 免疫炎癥與非酒精性脂肪性肝病
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3856979