目的:自身免疫性甲狀腺炎(Autoimmune thyroiditis,AIT)是一種慢性器官特異性自身免疫病,主要由遺傳、環(huán)境和免疫因素共同作用引起,主要亞型為橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)。HT主要血清學(xué)表現(xiàn)為甲狀腺自身抗體(TPOAb/TgAb)水平增高,病理特征為甲狀腺組織中淋巴細(xì)胞浸潤伴有濾泡結(jié)構(gòu)破壞。甲狀腺組織內(nèi)細(xì)胞種類繁多,存在免疫細(xì)胞穩(wěn)態(tài)失衡,然而具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。因此我們利用10X Genomics單細(xì)胞測序技術(shù)在單個細(xì)胞水平進(jìn)行高通量轉(zhuǎn)錄組測序探索HT患者甲狀腺組織免疫微環(huán)境,并依據(jù)單個細(xì)胞所表達(dá)的特異性標(biāo)志基因進(jìn)行細(xì)胞分群,并進(jìn)一步比較HT患者與對照者之間基因各個亞群基因表達(dá)差異以及各個亞群之間細(xì)胞信號交流。NOD.H-2^h4小鼠是自發(fā)性自身免疫性甲狀腺炎(Spontaneous autoimmune thyroiditis,SAT)經(jīng)典的動物模型,高碘喂養(yǎng)情況下,小鼠甲狀腺組織免疫病理類型與橋本甲狀腺炎相似,并伴血清中抗甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)滴度升高。炎癥小體(Inflammasomes)是一...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :自身免疫甲狀腺炎患者甲狀腺組織10X Genomics單細(xì)胞測序
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 臨床研究對象的確定
            2.2.2 人甲狀腺組織單細(xì)胞懸液的制備
            2.2.3 10X Genomics上機(jī)操作及反轉(zhuǎn)錄制備c DNA
    3 結(jié)果
        3.1 研究對象基本情況
        3.2 測序結(jié)果
            3.2.1 建庫前樣本質(zhì)量檢測
            3.2.2 細(xì)胞鑒定及基因表達(dá)定量
            3.2.3 細(xì)胞群體分析
            3.2.4 以Con組作為對照組,HT組作為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行組間比較分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :炎癥小體及其通路信號分子在SAT動物模型中的表達(dá)及其在AIT發(fā)生發(fā)展中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 試驗(yàn)方法
            2.2.1 試驗(yàn)動物以及分組
            2.2.2 麻醉并留取小鼠組織
            2.2.3 小鼠甲狀腺組織冰凍切片HE染色及炎性評分
            2.2.4 ELISA法檢測小鼠血清Tg Ab滴度
            2.2.5 小鼠甲狀腺組織q-PCR分析
            2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟Th1/Th17/Tfh/Tfr亞群比例
    3 結(jié)果
        3.1 不同實(shí)驗(yàn)時點(diǎn)NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺相對重量變化
        3.2 不同實(shí)驗(yàn)時點(diǎn)NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平變化
        3.3 不同實(shí)驗(yàn)時點(diǎn)NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺組織炎性評分
        3.4 不同實(shí)驗(yàn)時點(diǎn)NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺炎癥小體及其通路信號因子mRNA表達(dá)變化
        3.5 不同實(shí)驗(yàn)時點(diǎn)NOD.H-2^h4小鼠脾臟Th1/Th17/Tfh/Tfr亞群比例表達(dá)變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :阻斷或敲除炎癥小體NLRP3對自身免疫甲狀腺炎影響的動物實(shí)驗(yàn)研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 試驗(yàn)動物
            2.2.2 構(gòu)建NOD.H-2^h4背景的NLRP3小鼠
            2.2.3 試驗(yàn)動物分組
            2.2.4 小鼠甲狀腺HE染色炎癥形態(tài)學(xué)評估
            2.2.5 ELISA法檢測小鼠血清Tg Ab滴度
            2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟淋巴細(xì)胞Th1/Th17比例
    3 結(jié)果
        3.1 NLRP3特異性阻斷劑MCC950干預(yù)后
            3.1.1 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺相對重量
            3.1.2 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平
            3.1.3 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺組織形態(tài)學(xué)改變
            3.1.4 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠脾臟Th1/Th17細(xì)胞亞群比例表達(dá)變化
            3.1.5 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠脾臟Tfh/Tfr細(xì)胞亞群所占比例
        3.2 NLRP3敲除小鼠
            3.2.1 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺相對重量
            3.2.2 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平
            3.2.3 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺組織形態(tài)學(xué)改變
    4 討論
    5 結(jié)論
創(chuàng)新性自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3838919