目的:自身免疫性甲狀腺炎(Autoimmune thyroiditis,AIT)是一種慢性器官特異性自身免疫病,主要由遺傳、環(huán)境和免疫因素共同作用引起,主要亞型為橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)。HT主要血清學表現(xiàn)為甲狀腺自身抗體(TPOAb/TgAb)水平增高,病理特征為甲狀腺組織中淋巴細胞浸潤伴有濾泡結(jié)構(gòu)破壞。甲狀腺組織內(nèi)細胞種類繁多,存在免疫細胞穩(wěn)態(tài)失衡,然而具體發(fā)病機制尚不明確。因此我們利用10X Genomics單細胞測序技術(shù)在單個細胞水平進行高通量轉(zhuǎn)錄組測序探索HT患者甲狀腺組織免疫微環(huán)境,并依據(jù)單個細胞所表達的特異性標志基因進行細胞分群,并進一步比較HT患者與對照者之間基因各個亞群基因表達差異以及各個亞群之間細胞信號交流。NOD.H-2^h4小鼠是自發(fā)性自身免疫性甲狀腺炎(Spontaneous autoimmune thyroiditis,SAT)經(jīng)典的動物模型,高碘喂養(yǎng)情況下,小鼠甲狀腺組織免疫病理類型與橋本甲狀腺炎相似,并伴血清中抗甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)滴度升高。炎癥小體(Inflammasomes)是一...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :自身免疫甲狀腺炎患者甲狀腺組織10X Genomics單細胞測序
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 臨床研究對象的確定
            2.2.2 人甲狀腺組織單細胞懸液的制備
            2.2.3 10X Genomics上機操作及反轉(zhuǎn)錄制備c DNA
    3 結(jié)果
        3.1 研究對象基本情況
        3.2 測序結(jié)果
            3.2.1 建庫前樣本質(zhì)量檢測
            3.2.2 細胞鑒定及基因表達定量
            3.2.3 細胞群體分析
            3.2.4 以Con組作為對照組,HT組作為實驗組進行組間比較分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :炎癥小體及其通路信號分子在SAT動物模型中的表達及其在AIT發(fā)生發(fā)展中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要實驗試劑與儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 試驗方法
            2.2.1 試驗動物以及分組
            2.2.2 麻醉并留取小鼠組織
            2.2.3 小鼠甲狀腺組織冰凍切片HE染色及炎性評分
            2.2.4 ELISA法檢測小鼠血清Tg Ab滴度
            2.2.5 小鼠甲狀腺組織q-PCR分析
            2.2.6 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟Th1/Th17/Tfh/Tfr亞群比例
    3 結(jié)果
        3.1 不同實驗時點NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺相對重量變化
        3.2 不同實驗時點NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平變化
        3.3 不同實驗時點NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺組織炎性評分
        3.4 不同實驗時點NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺炎癥小體及其通路信號因子mRNA表達變化
        3.5 不同實驗時點NOD.H-2^h4小鼠脾臟Th1/Th17/Tfh/Tfr亞群比例表達變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :阻斷或敲除炎癥小體NLRP3對自身免疫甲狀腺炎影響的動物實驗研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要實驗試劑與儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 試驗動物
            2.2.2 構(gòu)建NOD.H-2^h4背景的NLRP3小鼠
            2.2.3 試驗動物分組
            2.2.4 小鼠甲狀腺HE染色炎癥形態(tài)學評估
            2.2.5 ELISA法檢測小鼠血清Tg Ab滴度
            2.2.6 流式細胞術(shù)檢測小鼠脾臟淋巴細胞Th1/Th17比例
    3 結(jié)果
        3.1 NLRP3特異性阻斷劑MCC950干預(yù)后
            3.1.1 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺相對重量
            3.1.2 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平
            3.1.3 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺組織形態(tài)學改變
            3.1.4 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠脾臟Th1/Th17細胞亞群比例表達變化
            3.1.5 阻斷干預(yù)后NOD.H-2^h4小鼠脾臟Tfh/Tfr細胞亞群所占比例
        3.2 NLRP3敲除小鼠
            3.2.1 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺相對重量
            3.2.2 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠血清Tg Ab水平
            3.2.3 基因敲除后NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺組織形態(tài)學改變
    4 討論
    5 結(jié)論
創(chuàng)新性自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3838919