目的探究miR-20b在肥胖小鼠不同脂肪組織中的表達(dá)情況及對小鼠前體脂肪細(xì)胞(3T3-L1)增殖、分化的影響。方法構(gòu)建C57BL/6小鼠的肥胖模型,實(shí)時熒光定量PCR檢測性腺脂肪(g-Fat)、腹股溝脂肪(i-Fat)及腎周脂肪(p-Fat)組織中miR-20b表達(dá)水平。培養(yǎng)并誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞,脂質(zhì)體法將miR-20bmimic(miR-20bmimic組)、miR-20binhibitor(miR-20binhibitor組)和陰性對照(NC組)轉(zhuǎn)染至3T3-L1細(xì)胞,CCK-8法和EdU法檢測miR-20b對3T3-L1細(xì)胞增殖的影響;油紅O染色與三酰甘油測定評估m(xù)iR-20b對3T3-L1細(xì)胞分化的影響;實(shí)時熒光定量PCR和Western blot分別檢測miR-20b對3T3-L1細(xì)胞中增殖、分化標(biāo)志物mRNA和蛋白表達(dá)的影響;雙熒光素酶報告基因檢測法驗(yàn)證miR-20b靶向調(diào)控3T3-L1細(xì)胞分化的基因。結(jié)果與正常對照組小鼠比較,肥胖造模組小鼠g-Fat、i-Fat、p-Fat中miR-20b均顯著高表達(dá)(P<0.05或P<0.01)。與NC組比較,miR-20...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動物與飼料
    1.2 主要材料與試劑
    1.3 方法
        1.3.1 動物造模與脂肪組織采集
        1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化
        1.3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.3.4 CCK-8檢測
        1.3.5 EdU檢測
        1.3.6 油紅O染色及胞內(nèi)三酰甘油水平測定
        1.3.7 實(shí)時熒光定量PCR
        1.3.8 Western blot
        1.3.9 雙熒光素酶報告基因分析
    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 miR-20b在肥胖小鼠脂肪組織中高表達(dá)
    2.2 miR-20b抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖
    2.3 miR-20b促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化
    2.4 miR-20b靶向Tcf4基因調(diào)控3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化
3 討論



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