前言:眾所周知自身免疫性疾病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)以滑膜炎作為顯著特點。其主要特征包括關(guān)節(jié)腫脹、軟骨破壞、關(guān)節(jié)僵硬甚至畸形。在發(fā)展中國家每10萬人中發(fā)病人數(shù)達到5-50個,而發(fā)達國家成人發(fā)病率達到0.5%-1%。RA 15歲以下發(fā)病少見,但是隨著年齡增長到80歲發(fā)病率穩(wěn)步增加。女性患病幾率是男性的3-5倍�；こ衫w維細胞(Synovial Fibroblasts,SFs)又被稱為成纖維樣滑膜細胞(Fibroblast-like Synoviocytes,FLSs),是關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜一種特殊細胞類型,在RA的發(fā)病過程中起到關(guān)鍵作用。研究報道內(nèi)源性及外源性因素間的相互作用參與疾病的發(fā)展,但microRNAs與其靶基因mRNAs的相互作用仍未完全闡明。MicroRNAs是內(nèi)生性,長度約20-24個核苷酸的小RNA,在蠕蟲和哺乳動物中普遍存在,其功能作為基因表達的負調(diào)控對mRNA進行微調(diào),包括分裂、翻譯抑制以及失穩(wěn)。其特殊機制是加載到RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA inducing silencing Complex,RISC)后miRNAs阻止翻譯并通過互...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
前言
第一部分：利用體外實驗檢測RA,OA及正常人滑膜細胞中miRNA3385p和SPRY1的表達情況
    1 研究目的
    2 研究資料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 SFs的提取
            2.2.2 SFs的培養(yǎng)
            2.2.3 實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real time quantitative RT -q PCR)檢測SFs細胞中miR3385p及SPRY1 m RNA的表達水平
            2.2.4 Western Blot檢測SFs細胞中miR3385p及SPRY1蛋白的表達水平
    3 結(jié)果
        3.1 RASFs組織中的miR3385p表達水平明顯上調(diào)
        3.2 RASFs組織中的SPRY1表達水平明顯下調(diào)
第二部分：RA滑膜細胞中miRNA3385p與SPRY1相互關(guān)系的研究
    1 研究目的
    2 研究資料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 實驗分組
            2.2.2 轉(zhuǎn)染
            2.2.3 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>    3 結(jié)果
        3.1 RA組織中miR3385p表達水平與SPRY1表達水平呈負相關(guān)
        3.2 SPRY1是miR3385p的靶點
第三部分：miRNA3385p通過靶向調(diào)節(jié)SPRY1對RASFs細胞的增殖、侵襲和炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用研究
    1 研究目的
    2 研究資料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 RASFs的提取
            2.2.2 RASFs的培養(yǎng)
            2.2.3 轉(zhuǎn)染
            2.2.4 設(shè)置實驗組
            2.2.5 MTT實驗
            2.2.6 TRANSWELL細胞體外侵襲實驗
            2.2.7 熒光定量RT-PCR
            2.2.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
    3 結(jié)果
        3.1 MiR3385p促進RAFLSs的增殖
        3.2 MiR3385p促進RAFLSs的侵襲
        3.3 MiR3385p促進RAFLSs中IL-1α, IL-6 以及COX2蛋白的表達，即促進RAFLSs的炎癥反應(yīng)
第四部分：通過小鼠體內(nèi)實驗研究RA滑膜細胞中miRNA3385p-inhibitor與CORTICOSTERONE對miR3385p和SRRY表達水平的影響
    前言
    1 研究目的
    2 研究資料與方法
        2.0 材料
        2.1 試劑和設(shè)備
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 實驗動物
            2.2.2 RA誘導(dǎo)方法
            2.2.3 分組
            2.2.4 提取各組小鼠關(guān)節(jié)SFs
            2.2.5 RT-PCR測量計算各組SFs內(nèi)miR3385P和SPRY1m RNA的相對表達水平
            2.2.6 Western Blot檢測SFs細胞中SPRY1蛋白的表達水平
    3 結(jié)果
        3.1 通過構(gòu)建小鼠RA模型進行體內(nèi)實驗，研究結(jié)果表明通過體表皮下注射miR3385p-inhibitor，RA小鼠滑膜組織中miR3385p表達水平下調(diào)，SPRY1的表達水平上調(diào)
        3.2 miR3385p-inhibitors同皮質(zhì)酮一樣能夠影響滑膜組織中miR3385p和SPRY1的表達水平，可作為抗炎藥物使用
討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
在學(xué)期間科研成績
致謝
個人簡介



本文編號：3818513