目的探討hsa-miR-655通過靶向調(diào)控心肌營養(yǎng)素樣細(xì)胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表達(dá),對人成骨肉MG63細(xì)胞系增殖、護(hù)骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表達(dá)的影響。方法通過hsa-miR-655慢病毒轉(zhuǎn)染MG63細(xì)胞進(jìn)行功能獲得實驗。實驗分陰性對照組(NC組)和hsa-miR-655過表達(dá)組(OE組),熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry analysis,FCM)評估轉(zhuǎn)染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測細(xì)胞增殖能力,FCM檢測細(xì)胞周期分布,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測CLCF1、OPG及RANKL蛋白的變化。結(jié)果熒光顯微鏡和FCM顯示對照組和miR-655過表達(dá)組感染效率為80%以上;qRT-PCR結(jié)果顯示,相對于...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 MG63細(xì)胞培養(yǎng)和慢病毒感染:
        1.2.2 實時熒光定量PCR:
        1.2.3 細(xì)胞增殖實驗:
        1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布:
        1.2.5 Western blot檢測蛋白水平:
        1.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理:
2 結(jié)果
    2.1 hsa-miR-655過表達(dá)后上調(diào)MG63細(xì)胞miR-655水平
    2.2 hsa-miR-655抑制CLCF1基因的表達(dá)
    2.3 過表達(dá)hsa-miR-655抑制MG63細(xì)胞增殖
    2.4 hsa-miR-655抑制MG63細(xì)胞周期的進(jìn)展
    2.5 hsa-miR-655對OPG和RANKL表達(dá)的影響
3 討論



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