目的探討hsa-miR-655通過靶向調控心肌營養(yǎng)素樣細胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表達,對人成骨肉MG63細胞系增殖、護骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表達的影響。方法通過hsa-miR-655慢病毒轉染MG63細胞進行功能獲得實驗。實驗分陰性對照組(NC組)和hsa-miR-655過表達組(OE組),熒光顯微鏡和流式細胞術(flow cytometry analysis,FCM)評估轉染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測細胞增殖能力,FCM檢測細胞周期分布,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白質印跡法(Western blot)檢測CLCF1、OPG及RANKL蛋白的變化。結果熒光顯微鏡和FCM顯示對照組和miR-655過表達組感染效率為80%以上;qRT-PCR結果顯示,相對于...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 MG63細胞培養(yǎng)和慢病毒感染:
        1.2.2 實時熒光定量PCR:
        1.2.3 細胞增殖實驗:
        1.2.4 流式細胞術分析細胞周期分布:
        1.2.5 Western blot檢測蛋白水平:
        1.2.6 統(tǒng)計學處理:
2 結果
    2.1 hsa-miR-655過表達后上調MG63細胞miR-655水平
    2.2 hsa-miR-655抑制CLCF1基因的表達
    2.3 過表達hsa-miR-655抑制MG63細胞增殖
    2.4 hsa-miR-655抑制MG63細胞周期的進展
    2.5 hsa-miR-655對OPG和RANKL表達的影響
3 討論



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