背景和目的多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種慢性自身免疫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,多為神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)發(fā)生多發(fā)性炎性改變,主要表現(xiàn)為局灶性炎性浸潤(rùn)、神經(jīng)細(xì)胞脫髓鞘、神經(jīng)軸突損傷、膠質(zhì)纖維化增生及鈣化等,是導(dǎo)致神經(jīng)源性膀胱的第二大病因。據(jù)文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì),大約有超過(guò)75%的MS患者可有不同程度的泌尿系統(tǒng)癥狀,輕者表現(xiàn)為尿頻、尿急,重者表現(xiàn)為尿潴留、腎積水、膀胱纖維化等,嚴(yán)重影響患者的身心健康。目前MS致神經(jīng)源性膀胱纖維化的分子機(jī)制尚未完全闡明。就目前診療MS致神經(jīng)源性膀胱的手段而言,既往的治療方法如使用抑制膀胱過(guò)度活動(dòng)的藥物來(lái)控制膀胱平滑肌的不隨意收縮,雖然在短期內(nèi)有一定的療效,但長(zhǎng)期效果不佳,且膀胱平滑肌細(xì)胞仍持續(xù)纖維化變性。而纖維蛋白鏈接因子1(Fibronectin 1,FN1)作為細(xì)胞外基質(zhì)中的主要蛋白可能參與膀胱纖維化,且已有大量的文獻(xiàn)證實(shí)miRNA與纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展有著緊密聯(lián)系。因此,本研究擬構(gòu)建實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型用來(lái)模擬MS疾病的發(fā)生發(fā)展。并以此EAE模型...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 細(xì)胞來(lái)源
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 儀器和設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 建立EAE小鼠模型
        2.2.2 HE染色步驟
        2.2.3 Masson染色步驟
        2.2.4 預(yù)測(cè)可調(diào)控FN1合成的miRNA
        2.2.5 膀胱平滑肌細(xì)胞鑒定步驟
        2.2.6 轉(zhuǎn)染miRNA類似物及拮抗劑
        2.2.7 提取膀胱組織蛋白
        2.2.8 膀胱平滑肌細(xì)胞總蛋白的提取
        2.2.9 Western Blot步驟
        2.2.10 膀胱組織總RNA的提取
        2.2.11 膀胱平滑肌細(xì)胞RNA的提取
        2.2.12 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR
            2.2.12.1 檢測(cè)miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            2.2.11.2 檢測(cè)FN1分子的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.13 實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增反應(yīng)qPCR
        2.2.14 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.15 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
            2.2.16.1 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
            2.2.16.2 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 EAE組小鼠發(fā)病情況、體征
    3.2 EAE組小鼠膀胱肌層膠原纖維及平滑肌形態(tài)和數(shù)量的變化
    3.3 預(yù)測(cè)可調(diào)控FN1合成的miRNA
    3.4 多發(fā)性硬化模型組小鼠膀胱組織內(nèi)miR-199a-3p、miR-219c-5p、miR-3572-3p及FN1的表達(dá)情況
    3.5 原代培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞的鑒定
    3.6 轉(zhuǎn)染miRNA類似物及拮抗劑轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
    3.7 于膀胱平滑肌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染miR-219c-5p后對(duì)FN1蛋白表達(dá)的影響
    3.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    3.9 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    3.10 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
    3.11 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
4 討論
    4.1 多發(fā)性硬化患者膀胱功能障礙的臨床特點(diǎn)及動(dòng)物模型
    4.2 影響膀胱收縮功能的多種因素
    4.3 神經(jīng)源性膀胱纖維化
    4.4 EAE組小鼠膀胱組織FN1和miRNA分子的表達(dá)
    4.5 miR-219c-5p可靶向調(diào)控FN1蛋白的合成
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 多發(fā)性硬化致神經(jīng)源性膀胱纖維化的作用機(jī)制研究進(jìn)展
    1 多發(fā)性硬化流行病學(xué)及診療現(xiàn)狀
    2 神經(jīng)源性膀胱的流行病學(xué)及診療現(xiàn)狀
    3 神經(jīng)源性膀胱機(jī)制研究進(jìn)展
        3.1 PGE2/EP3/EP4信號(hào)通路影響膀胱興奮傳導(dǎo)
        3.2 Panx1/Cx43通道蛋白介導(dǎo)逼尿肌細(xì)胞縫隙連接
        3.3 膀胱起搏細(xì)胞參與膀胱收縮
    4 膀胱纖維化的機(jī)制研究
    5 miRNA參與纖維化疾病
    6. FN1參與纖維化疾病
    7. 總結(jié)與展望
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3779334