研究背景:支氣管哮喘是嚴(yán)重影響人們健康的常見(jiàn)慢性疾病之一,其病理變化為:氣道炎癥、氣道重塑和氣道高反應(yīng)。目前支氣管哮喘的治療仍以緩解癥狀和控制炎癥為主。糖皮質(zhì)激素仍是目前治療哮喘的最有效的藥物。組蛋白去乙�；�(Histone deacetylases,HDACs)是維持染色體基本單位核小體中組蛋白乙�；胶獾年P(guān)鍵酶之一,與細(xì)胞內(nèi)諸多生命過(guò)程密切相關(guān),如炎癥基因轉(zhuǎn)錄、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞增殖與凋亡、組織纖維化等。本課題組在前期研究工作中,通過(guò)建立急性及慢性O(shè)VA哮喘小鼠模型,證實(shí)廣譜HDAC抑制劑(Givinostat)、HDAC6抑制劑(Tubastatin A Hcl)和HDAC8抑制劑(PCI-34051)可緩解慢性哮喘小鼠的氣道炎癥、氣道高反應(yīng)和氣道重塑,對(duì)支氣管哮喘小鼠有治療作用。其中,HDAC8抑制劑在哮喘中,抗炎作用明顯優(yōu)于廣譜HDAC抑制劑及HDAC6抑制劑,表現(xiàn)為在哮喘中,HDAC8抑制劑能更好的緩解氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性。巨噬細(xì)胞在不同環(huán)境下可以分別極化為經(jīng)典活化型巨噬細(xì)胞(M1型)及替代活化型巨噬細(xì)胞(M2型)。研究表明,巨噬細(xì)胞M2型極化在哮喘的發(fā)病過(guò)程中起著重...

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 HDAC8特異性的抑制劑PCI-34051對(duì)急性期哮喘小鼠肺組織內(nèi)巨噬細(xì)胞M2型極化的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料與試劑
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)器材
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配置
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 動(dòng)物模型的制備和分組
            2.2.2 肺功能激發(fā)試驗(yàn)
            2.2.3 ELISA檢測(cè)血清中炎癥因子水平
            2.2.4 BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)
            2.2.5 小鼠肺組織的處理
            2.2.6 肺組織HE染色
            2.2.7 AB-PAS染色觀察肺組織氣道上皮粘液腺化生
            2.2.8 肺組織流式細(xì)胞術(shù)
            2.2.9 肺組織Q-PCR檢測(cè)
            2.2.10 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肺組織內(nèi)CD68,CD86,CD163 表達(dá)
            2.2.11 Western Blot檢測(cè)肺組織內(nèi)Arg1及i NOS蛋白表達(dá)水平
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)可減輕氣道高反應(yīng)
        3.2 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)可減輕氣道周圍炎癥
        3.3 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)減少急性期哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)內(nèi)巨噬細(xì)胞總數(shù)
        3.4 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)抑制急性期哮喘小鼠氣道上皮杯狀細(xì)胞化生
        3.5 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)降低血清中IL-4及Ig E分泌
        3.6 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)抑制小鼠肺組織巨噬細(xì)胞M2 型極化
        3.7 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)抑制CD68,CD163表達(dá)
        3.8 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)抑制M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物Arg1 mRNA表達(dá)
        3.9 特異性HDAC8抑制劑(PCI-34051)抑制Arg1蛋白表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 HDAC8特異性抑制劑對(duì)急性期哮喘小鼠肺組織內(nèi)Galecitn-3的作用
    6 前言
    7 材料和方法
        7.1 主要試劑與實(shí)驗(yàn)儀器
        7.2 實(shí)驗(yàn)方法
            7.2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽浼胺纸M
            7.2.2 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肺組織內(nèi)HDAC8及Galectin-3表達(dá)
            7.2.3 Western Blot檢測(cè)肺組織內(nèi)HDAC8及Galectin-3蛋白表達(dá)
            7.2.4 免疫熒光
            7.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    8 結(jié)果
        8.1 HDAC8特異性抑制劑可以抑制急性期哮喘小鼠肺組織內(nèi)HDAC8表達(dá)
        8.2 HDAC8特異性抑制劑PCI-34051可以抑制急性期哮喘小鼠肺組織內(nèi)HDAC8蛋白表達(dá)
        8.3 HDAC8特異性抑制劑PCI-34051可以抑制急性期哮喘小鼠肺組織內(nèi)Galecitn-3表達(dá)
        8.4 HDAC8特異性抑制劑PCI-34051可減輕小鼠肺組織中Galectin-3的蛋白表達(dá)水平
        8.5 HDAC8特異性抑制劑抑制Galecitn-3及HDAC8共表達(dá)
    9 討論
    10 結(jié)論
第三部分 PCI-34051對(duì)于Raw264.7 細(xì)胞M2 型極化的作用及作用機(jī)制
    11 前言
    12 材料與方法
        12.1 細(xì)胞來(lái)源
        12.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        12.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        12.4 實(shí)驗(yàn)方法
            12.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            12.4.2 細(xì)胞處理及分組
            12.4.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            12.4.4 Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ArgⅠ、iNOS、Galecitn-3及HDAC8蛋白表達(dá)水平
            12.4.5 shRNA轉(zhuǎn)染
            12.4.6 細(xì)胞免疫熒光
            12.4.7 細(xì)胞免疫共沉淀
            12.4.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    13 結(jié)果
        13.1 HDAC8抑制劑抑制Raw264.7細(xì)胞M2型極化
        13.2 HDAC8抑制劑抑制Raw264.7細(xì)胞內(nèi)Arg1蛋白表達(dá)
        13.3 Galectin-3 在巨噬細(xì)胞的M2型極化過(guò)程中起重要作用
        13.4 HDAC8抑制劑抑制Raw264.7細(xì)胞Galectin-3及HDAC8的表達(dá)
        13.5 HDAC8抑制劑抑制Galectin-3及HDAC8的共表達(dá)
        13.6 HDAC8抑制劑抑制Galectin-3及HDAC8的相互作用
    14 討論
    15 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3762550