人源內(nèi)皮克隆形成細胞（ECFCs）旁分泌對成熟血管和皮膚細胞生物學影響的實驗研究
發(fā)布時間：2023-03-01 18:39
研究背景和目的:2型糖尿病(T2D)是最常見的代謝性疾病之一,其主要特征是由于胰島素分泌不足或胰島素抵抗而出現(xiàn)慢性高血糖。慢性創(chuàng)傷具有特征性的病理聯(lián)系,不能通過有序和及時的修復來恢復結(jié)構(gòu)和功能的完整性。在糖尿病患者中,每年有2%-3%的患者發(fā)生足部潰瘍。糖尿病足是一種嚴重的T2D并發(fā)癥,常導致疼痛、痛苦和生活質(zhì)量低下。內(nèi)皮克隆形成細胞(Endothelial colony-forming cells,ECFCs)被認為晚期內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs),在創(chuàng)傷修復中的作用受到廣泛關(guān)注。ECFCs是一種來源于骨髓的原始細胞,在一定的條件下可誘導分化成為成熟的內(nèi)皮細胞(endothelial cells,ECs)。該細胞不僅參與胚胎時期的血管生成,而且在人體出生后的血管新生、血管損傷的內(nèi)皮修復以及功能維持中仍然有重要的作用。干/祖細胞對創(chuàng)面的修復機制可概括為:(1)分化為成熟內(nèi)皮細胞;(2)旁分泌產(chǎn)生多種生物活性的細胞因子促進創(chuàng)面的血管新生及神經(jīng)再生。為此,我們推測內(nèi)皮克隆形成細胞通過旁分泌機制可促進糖尿病患者慢性創(chuàng)面的愈合以及破損處血管再...
【文章頁數(shù)】：97 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實驗材料
2.1 一般資料
2.2 主要儀器
2.3 實驗試劑
3 實驗方法
3.1 ECFCs細胞的提取
3.2 ECFCs細胞傳代
3.3 ECFCs細胞凍存
3.4 ECFCs表面抗原檢測
3.5 ECFCs檢測鑒定--免疫熒光標記
3.6 Matrigel基質(zhì)膠成管實驗
3.7 細胞條件培養(yǎng)基ECFCs-CM的制備
3.8 抗體芯片檢測ECFCs-CM中細胞因子表達
3.9 ELISA法檢測ECFCs-CM中細胞因子表達情況
3.10 CCK8檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs增殖能力的影響
3.11 遷移--劃痕實驗
3.12 遷移--transwell共培養(yǎng)
3.13 細胞凋亡
3.14 細胞周期檢測
3.15 絲素蛋白/海藻酸鈉水凝膠的制備及表征檢測
4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
5 結(jié)果
5.1 ECFCs培養(yǎng)及傳代
5.2 免疫熒光染色ECFCs檢測鑒定
5.3 流式細胞儀檢測ECFCs表面抗原檢測鑒定
5.4 ECFCs細胞的成管能力檢測
5.5 抗體芯片法檢測ECFCs-CM細胞因子表達
5.6 ELISA法檢測ECFCs-CM中細胞因子表達情況
5.7 CCK-8法檢測ECFCs-CM對HUVECs增殖能力的影響
5.8 CCK-8法檢測ECFCs-CM對HDFs增殖能力的影響
5.9 細胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HUVECs遷移能力的影響
5.10 細胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HDFs遷移能力的影響
5.11 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HUVECs遷移能力的影響
5.12 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HDFs遷移能力的影響
5.13 流式細胞儀法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs細胞凋亡的影響
5.14 流式細胞儀檢測ECFCs-CM對HUVECs細胞周期的影響
5.15 流式細胞儀檢測ECFCs-CM對HDFs細胞周期的影響
5.16 SF/ALG水凝膠合成大體形態(tài)觀察
5.17 SF/ALG水凝膠傅里葉變換紅外光譜(FTIR)分析
5.18 SF/ALG水凝膠孔隙率分析
6 討論
6.1 為什么選擇人源性ECFCs作為糖尿病慢性損傷修復的細胞
6.2 如何通過表面抗原檢測鑒定ECFCs細胞
6.3 為何采用抗體芯片法對ECFCs-CM中細胞因子進行檢測
6.4 ECFCs-CM中細胞因子表達情況的分析
6.5 ECFCs-CM對HUVECs和HDFs增殖能力的影響
6.6 胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs遷移能力的影響
6.7 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs遷移能力的影響
7 結(jié)論
8 展望
參考文獻
綜述
參考文獻
附錄
攻讀學位期間科研著作情況
致謝
本文編號：3752024
【文章頁數(shù)】：97 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實驗材料
2.1 一般資料
2.2 主要儀器
2.3 實驗試劑
3 實驗方法
3.1 ECFCs細胞的提取
3.2 ECFCs細胞傳代
3.3 ECFCs細胞凍存
3.4 ECFCs表面抗原檢測
3.5 ECFCs檢測鑒定--免疫熒光標記
3.6 Matrigel基質(zhì)膠成管實驗
3.7 細胞條件培養(yǎng)基ECFCs-CM的制備
3.8 抗體芯片檢測ECFCs-CM中細胞因子表達
3.9 ELISA法檢測ECFCs-CM中細胞因子表達情況
3.10 CCK8檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs增殖能力的影響
3.11 遷移--劃痕實驗
3.12 遷移--transwell共培養(yǎng)
3.13 細胞凋亡
3.14 細胞周期檢測
3.15 絲素蛋白/海藻酸鈉水凝膠的制備及表征檢測
4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
5 結(jié)果
5.1 ECFCs培養(yǎng)及傳代
5.2 免疫熒光染色ECFCs檢測鑒定
5.3 流式細胞儀檢測ECFCs表面抗原檢測鑒定
5.4 ECFCs細胞的成管能力檢測
5.5 抗體芯片法檢測ECFCs-CM細胞因子表達
5.6 ELISA法檢測ECFCs-CM中細胞因子表達情況
5.7 CCK-8法檢測ECFCs-CM對HUVECs增殖能力的影響
5.8 CCK-8法檢測ECFCs-CM對HDFs增殖能力的影響
5.9 細胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HUVECs遷移能力的影響
5.10 細胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HDFs遷移能力的影響
5.11 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HUVECs遷移能力的影響
5.12 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HDFs遷移能力的影響
5.13 流式細胞儀法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs細胞凋亡的影響
5.14 流式細胞儀檢測ECFCs-CM對HUVECs細胞周期的影響
5.15 流式細胞儀檢測ECFCs-CM對HDFs細胞周期的影響
5.16 SF/ALG水凝膠合成大體形態(tài)觀察
5.17 SF/ALG水凝膠傅里葉變換紅外光譜(FTIR)分析
5.18 SF/ALG水凝膠孔隙率分析
6 討論
6.1 為什么選擇人源性ECFCs作為糖尿病慢性損傷修復的細胞
6.2 如何通過表面抗原檢測鑒定ECFCs細胞
6.3 為何采用抗體芯片法對ECFCs-CM中細胞因子進行檢測
6.4 ECFCs-CM中細胞因子表達情況的分析
6.5 ECFCs-CM對HUVECs和HDFs增殖能力的影響
6.6 胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs遷移能力的影響
6.7 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs遷移能力的影響
7 結(jié)論
8 展望
參考文獻
綜述
參考文獻
附錄
攻讀學位期間科研著作情況
致謝
本文編號：3752024
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/nfm/3752024.html
最近更新
教材專著
