骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis,OP）是一種全身性、系統(tǒng)性的骨骼疾病,其特征是骨量下降和骨微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞,表現(xiàn)為骨脆性增加,進(jìn)而使骨折的危險(xiǎn)性大大增加,即使是輕微的創(chuàng)傷或無(wú)外傷的情況下也容易發(fā)生骨折,然而目前還沒(méi)有較理想的方法治療骨質(zhì)疏松。脈沖電磁場(chǎng)（Pulsed electromagnetic field,PEMFs）作為一種非侵入性治療手段,被認(rèn)為是安全有效的治療骨質(zhì)疏松癥方法之一。本實(shí)驗(yàn)組前期已篩選出能夠促進(jìn)骨形成的脈沖電磁場(chǎng)各種參數(shù),包括頻率、強(qiáng)度、作用時(shí)間等。在這些參數(shù)條件下,脈沖電磁場(chǎng)顯著提高了大鼠成骨細(xì)胞的成熟礦化,并能夠提高去勢(shì)大鼠的骨密度。然而,脈沖電磁場(chǎng)促進(jìn)骨形成的作用機(jī)理尚不明確,是將電磁場(chǎng)應(yīng)用于骨質(zhì)疏松治療的主要制約因素。本實(shí)驗(yàn)組前期研究表明,50 Hz 0.6 mT的低頻脈沖電磁場(chǎng)是促進(jìn)骨形成的最佳參數(shù)之一,在該參數(shù)條件下脈沖電磁場(chǎng)促進(jìn)骨形成依賴(lài)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面的特殊細(xì)胞器——初級(jí)纖毛。鑒于上述結(jié)果,本論文開(kāi)展了脈沖電磁場(chǎng)促進(jìn)骨形成與初級(jí)纖毛及相關(guān)信號(hào)途徑關(guān)系的研究。首先,為了考察低頻脈沖電磁場(chǎng)能否促進(jìn)骨形成,將體外分離培養(yǎng)的新生大鼠成骨細(xì)胞（Rat c... 

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫(xiě)詞表
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 骨質(zhì)疏松癥的研究及治療現(xiàn)狀
        1.1.1 骨質(zhì)疏松癥
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病因素
        1.1.3 骨質(zhì)疏松癥的治療現(xiàn)狀
    1.2 脈沖電磁場(chǎng)防治骨質(zhì)疏松癥的現(xiàn)狀及機(jī)理研究
        1.2.1 脈沖電磁場(chǎng)促進(jìn)骨形成研究進(jìn)展
        1.2.2 電磁場(chǎng)促進(jìn)骨形成機(jī)理研究
    1.3 cAMP/PKA與骨形成關(guān)系
        1.3.1 cAMP/PKA信號(hào)途徑
        1.3.2 電磁場(chǎng)通過(guò)cAMP/PKA/CREB促進(jìn)骨形成研究
    1.4 初級(jí)纖毛
        1.4.1 初級(jí)纖毛的結(jié)構(gòu)
        1.4.2 初級(jí)纖毛的功能
        1.4.3 初級(jí)纖毛相關(guān)的信號(hào)通路
        1.4.4 初級(jí)纖毛與骨形成關(guān)系
    1.5 課題研究?jī)?nèi)容及意義
第2章 PEMFs促進(jìn)成骨細(xì)胞成熟礦化依賴(lài)于cAMP/PKA/CREB信號(hào)通路
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.3.1 低頻電磁場(chǎng)發(fā)生裝置
            2.1.3.2 其他儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.2.2 堿性磷酸酶活性測(cè)定
        2.2.3 基因轉(zhuǎn)錄分析
        2.2.4 蛋白表達(dá)分析
        2.2.5 免疫熒光染色
        2.2.6 cAMP含量測(cè)定
        2.2.7 茜素紅染色
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 堿性磷酸酶活性檢測(cè)結(jié)果
        2.3.2 PEMFs對(duì)成骨相關(guān)基因的影響
        2.3.3 PEMFs對(duì)成骨相關(guān)蛋白的影響
        2.3.4 PEMFs激活cAMP/PKA/CREB信號(hào)通路
            2.3.4.1 cAMP濃度測(cè)定結(jié)果
            2.3.4.2 PEMFs對(duì)p-PKA、p-CREB的影響
        2.3.5 PEMFs促進(jìn)骨形成依賴(lài)于PKA
    2.4 討論
第3章 PEMFs促進(jìn)骨形成依賴(lài)于腺苷酸環(huán)化酶
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
            3.1.3.1 低頻電磁場(chǎng)發(fā)生裝置
            3.1.3.2 其他儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 ROBs的分離與培養(yǎng)
        3.2.2 瓊脂糖凝膠電泳
        3.2.3 基因轉(zhuǎn)錄分析
        3.2.4 蛋白表達(dá)分析
        3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
        3.3.2 PEMFs對(duì)ACs基因表達(dá)的影響
        3.3.3 PEMFs處理后ACs蛋白表達(dá)結(jié)果
        3.3.4 DDA對(duì)PEMFs促進(jìn)骨形成的影響
    3.4 討論
第4章 PEMFs通過(guò)初級(jí)纖毛激活sAC/cAMP/PKA/CREB信號(hào)途徑
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        4.2.2 免疫熒光染色
        4.2.3 蛋白表達(dá)分析
        4.2.4 siRNA質(zhì)粒提取
        4.2.5 成骨細(xì)胞內(nèi)IFT88的RNA干擾
        4.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 ACs與初級(jí)纖毛共定位
        4.3.2 p-PKA、PKA與初級(jí)纖毛共定位
        4.3.3 干擾纖毛后cAMP濃度的變化
        4.3.4 干擾纖毛后p-PKA、p-CREB的蛋白表達(dá)結(jié)果
    4.4 討論
第5章 PEMFs通過(guò)定位于初級(jí)纖毛的sAC促進(jìn)骨形成
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 大鼠顱骨成骨細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        5.2.2 基因轉(zhuǎn)錄分析
        5.2.3 蛋白分析
        5.2.4 茜素紅染色
        5.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 KH7對(duì)sAC/cAMP/PKA/CREB信號(hào)通路的影響
        5.3.2 KH7對(duì)成骨相關(guān)基因和蛋白的影響
        5.3.3 KH7對(duì)成骨細(xì)胞成熟礦化的影響
    5.4 討論
第6章 PEMFs激活sAC/cAMP/PKA/CREB信號(hào)途徑對(duì)大鼠峰值骨量的影響..
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器設(shè)備
            6.1.3.1 低頻電磁場(chǎng)發(fā)生裝置
            6.1.3.2 其他儀器設(shè)備
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 分組與處理
        6.2.2 骨密度的測(cè)定
        6.2.3 血清生化指標(biāo)的測(cè)定
        6.2.4 μCT影像分析
        6.2.5 彈性模量分析
        6.2.6 蛋白表達(dá)分析
        6.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 PEMFs對(duì)大鼠骨密度的影響
        6.3.2 PEMFs對(duì)大鼠骨生物力學(xué)的影響
        6.3.3 Micro-CT掃描結(jié)果
        6.3.4 PEMFs對(duì)血清骨代謝生化指標(biāo)的影響
        6.3.5 PEMFs激活了大鼠體內(nèi)cAMP/PKA/CREB信號(hào)通路
            6.3.5.1 PEMFs對(duì)血清cAMP的影響
            6.3.5.2 PEMFs對(duì)sAC、p-PKA、CREB的影響
    6.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
附錄B


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]個(gè)體化健康教育在脈沖電磁場(chǎng)治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥中的作用[J]. 趙春燕,周瑞華,田永芝,唐詠梅,寧鴻珍,劉海燕.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2016(02)
[2]脈沖電磁場(chǎng)與正弦交變電磁場(chǎng)對(duì)成骨細(xì)胞增殖與成熟礦化的比較研究[J]. 閆娟麗,陳克明,周建,方清清,馬慧萍.  解放軍醫(yī)藥雜志. 2015(03)
[3]50Hz不同強(qiáng)度正弦交變電磁場(chǎng)對(duì)大鼠峰值骨量的影響[J]. 高玉海,成魁,葛寶豐,甄平,周建,馬小妮,李少峰,陳克明.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2015(01)
[4]初級(jí)纖毛與Wnt信號(hào)通路相關(guān)性研究進(jìn)展[J]. 張蔓麗,盧彥平,李亞里.  遺傳. 2015(03)
[5]淫羊藿苷促成骨細(xì)胞分化成熟主要不依賴(lài)其雌激素活性[J]. 石文貴,馬小妮,謝艷芳,周建,陳克明.  中國(guó)中藥雜志. 2014(14)
[6]老年性骨質(zhì)疏松癥的防治進(jìn)展[J]. 劉印,田京.  中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2012(34)
[7]男性老年性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病和診斷現(xiàn)狀:2009[J]. 王曉霞,潘琦,金世鑫.  中華保健醫(yī)學(xué)雜志. 2010(01)
[8]不同強(qiáng)度脈沖電磁場(chǎng)對(duì)去勢(shì)大鼠血清雌二醇的影響[J]. 楊永紅,何成奇,楊霖,王維,雷中杰.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2008(02)
[9]低頻磁場(chǎng)對(duì)后肢去負(fù)荷大鼠骨代謝的影響[J]. 萬(wàn)玉民,馬永潔,王紅暉,張曉鈾,李瑩輝.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2006(04)
[10]纖毛的研究進(jìn)展[J]. 肖良,趙海丹.  海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào). 2006(01)

碩士論文
[1]脈沖電磁場(chǎng)通過(guò)初級(jí)纖毛和BMP/BMPRII/Smad1/5/8信號(hào)途徑促進(jìn)骨形成的研究[D]. 謝艷芳.蘭州理工大學(xué) 2016
[2]低頻電磁場(chǎng)促進(jìn)骨形成最佳參數(shù)篩選研究[D]. 周建.蘭州理工大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3705188