骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis,OP）是一種全身性、系統(tǒng)性的骨骼疾病,其特征是骨量下降和骨微細結(jié)構(gòu)破壞,表現(xiàn)為骨脆性增加,進而使骨折的危險性大大增加,即使是輕微的創(chuàng)傷或無外傷的情況下也容易發(fā)生骨折,然而目前還沒有較理想的方法治療骨質(zhì)疏松。脈沖電磁場（Pulsed electromagnetic field,PEMFs）作為一種非侵入性治療手段,被認為是安全有效的治療骨質(zhì)疏松癥方法之一。本實驗組前期已篩選出能夠促進骨形成的脈沖電磁場各種參數(shù),包括頻率、強度、作用時間等。在這些參數(shù)條件下,脈沖電磁場顯著提高了大鼠成骨細胞的成熟礦化,并能夠提高去勢大鼠的骨密度。然而,脈沖電磁場促進骨形成的作用機理尚不明確,是將電磁場應(yīng)用于骨質(zhì)疏松治療的主要制約因素。本實驗組前期研究表明,50 Hz 0.6 mT的低頻脈沖電磁場是促進骨形成的最佳參數(shù)之一,在該參數(shù)條件下脈沖電磁場促進骨形成依賴于哺乳動物細胞表面的特殊細胞器——初級纖毛。鑒于上述結(jié)果,本論文開展了脈沖電磁場促進骨形成與初級纖毛及相關(guān)信號途徑關(guān)系的研究。首先,為了考察低頻脈沖電磁場能否促進骨形成,將體外分離培養(yǎng)的新生大鼠成骨細胞（Rat c... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫詞表
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 骨質(zhì)疏松癥的研究及治療現(xiàn)狀
        1.1.1 骨質(zhì)疏松癥
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病因素
        1.1.3 骨質(zhì)疏松癥的治療現(xiàn)狀
    1.2 脈沖電磁場防治骨質(zhì)疏松癥的現(xiàn)狀及機理研究
        1.2.1 脈沖電磁場促進骨形成研究進展
        1.2.2 電磁場促進骨形成機理研究
    1.3 cAMP/PKA與骨形成關(guān)系
        1.3.1 cAMP/PKA信號途徑
        1.3.2 電磁場通過cAMP/PKA/CREB促進骨形成研究
    1.4 初級纖毛
        1.4.1 初級纖毛的結(jié)構(gòu)
        1.4.2 初級纖毛的功能
        1.4.3 初級纖毛相關(guān)的信號通路
        1.4.4 初級纖毛與骨形成關(guān)系
    1.5 課題研究內(nèi)容及意義
第2章 PEMFs促進成骨細胞成熟礦化依賴于cAMP/PKA/CREB信號通路
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.3.1 低頻電磁場發(fā)生裝置
            2.1.3.2 其他儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 大鼠顱骨成骨細胞的分離與培養(yǎng)
        2.2.2 堿性磷酸酶活性測定
        2.2.3 基因轉(zhuǎn)錄分析
        2.2.4 蛋白表達分析
        2.2.5 免疫熒光染色
        2.2.6 cAMP含量測定
        2.2.7 茜素紅染色
        2.2.8 統(tǒng)計學(xué)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果
        2.3.2 PEMFs對成骨相關(guān)基因的影響
        2.3.3 PEMFs對成骨相關(guān)蛋白的影響
        2.3.4 PEMFs激活cAMP/PKA/CREB信號通路
            2.3.4.1 cAMP濃度測定結(jié)果
            2.3.4.2 PEMFs對p-PKA、p-CREB的影響
        2.3.5 PEMFs促進骨形成依賴于PKA
    2.4 討論
第3章 PEMFs促進骨形成依賴于腺苷酸環(huán)化酶
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
            3.1.3.1 低頻電磁場發(fā)生裝置
            3.1.3.2 其他儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 ROBs的分離與培養(yǎng)
        3.2.2 瓊脂糖凝膠電泳
        3.2.3 基因轉(zhuǎn)錄分析
        3.2.4 蛋白表達分析
        3.2.5 統(tǒng)計學(xué)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
        3.3.2 PEMFs對ACs基因表達的影響
        3.3.3 PEMFs處理后ACs蛋白表達結(jié)果
        3.3.4 DDA對PEMFs促進骨形成的影響
    3.4 討論
第4章 PEMFs通過初級纖毛激活sAC/cAMP/PKA/CREB信號途徑
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 大鼠顱骨成骨細胞的分離與培養(yǎng)
        4.2.2 免疫熒光染色
        4.2.3 蛋白表達分析
        4.2.4 siRNA質(zhì)粒提取
        4.2.5 成骨細胞內(nèi)IFT88的RNA干擾
        4.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 ACs與初級纖毛共定位
        4.3.2 p-PKA、PKA與初級纖毛共定位
        4.3.3 干擾纖毛后cAMP濃度的變化
        4.3.4 干擾纖毛后p-PKA、p-CREB的蛋白表達結(jié)果
    4.4 討論
第5章 PEMFs通過定位于初級纖毛的sAC促進骨形成
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 大鼠顱骨成骨細胞的分離與培養(yǎng)
        5.2.2 基因轉(zhuǎn)錄分析
        5.2.3 蛋白分析
        5.2.4 茜素紅染色
        5.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 KH7對sAC/cAMP/PKA/CREB信號通路的影響
        5.3.2 KH7對成骨相關(guān)基因和蛋白的影響
        5.3.3 KH7對成骨細胞成熟礦化的影響
    5.4 討論
第6章 PEMFs激活sAC/cAMP/PKA/CREB信號途徑對大鼠峰值骨量的影響..
    6.1 實驗材料
        6.1.1 實驗動物
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器設(shè)備
            6.1.3.1 低頻電磁場發(fā)生裝置
            6.1.3.2 其他儀器設(shè)備
    6.2 實驗方法
        6.2.1 分組與處理
        6.2.2 骨密度的測定
        6.2.3 血清生化指標(biāo)的測定
        6.2.4 μCT影像分析
        6.2.5 彈性模量分析
        6.2.6 蛋白表達分析
        6.2.7 統(tǒng)計學(xué)處理
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 PEMFs對大鼠骨密度的影響
        6.3.2 PEMFs對大鼠骨生物力學(xué)的影響
        6.3.3 Micro-CT掃描結(jié)果
        6.3.4 PEMFs對血清骨代謝生化指標(biāo)的影響
        6.3.5 PEMFs激活了大鼠體內(nèi)cAMP/PKA/CREB信號通路
            6.3.5.1 PEMFs對血清cAMP的影響
            6.3.5.2 PEMFs對sAC、p-PKA、CREB的影響
    6.4 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
附錄B


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]脈沖電磁場與正弦交變電磁場對成骨細胞增殖與成熟礦化的比較研究[J]. 閆娟麗,陳克明,周建,方清清,馬慧萍.  解放軍醫(yī)藥雜志. 2015(03)
[3]50Hz不同強度正弦交變電磁場對大鼠峰值骨量的影響[J]. 高玉海,成魁,葛寶豐,甄平,周建,馬小妮,李少峰,陳克明.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2015(01)
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[7]男性老年性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病和診斷現(xiàn)狀:2009[J]. 王曉霞,潘琦,金世鑫.  中華保健醫(yī)學(xué)雜志. 2010(01)
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碩士論文
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[2]低頻電磁場促進骨形成最佳參數(shù)篩選研究[D]. 周建.蘭州理工大學(xué) 2011



本文編號：3705188