發(fā)布時間：2022-10-21 16:55

　　課題組前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):氟中毒可引起子代大鼠大腦皮層和海馬神經(jīng)元的病理學損傷、神經(jīng)細胞凋亡、DNA損傷、學習認知能力下降以及細胞骨架相關蛋白MAP2的表達顯著抑制。細胞骨架損傷在氟誘導智力紊亂過程中的作用如何?本研究以此為切入點,ICR小鼠和Neuro-2A細胞為研究對象,研究細胞骨架蛋白在氟中毒發(fā)生機制中的作用。1氟化鈉對子代小鼠大腦皮層神經(jīng)細胞骨架及突觸相關蛋白表達的影響本研究通過自由飲用含氟水（0,50,100mg/L）建立氟中毒ICR子代小鼠模型,以0d,10 d,20 d,30 d,60 d和90 d子代小鼠大腦皮層為研究對象,研究細胞骨架損傷在氟致神經(jīng)損傷過程中發(fā)揮的作用。采用水迷宮試驗測定60 d子代小鼠學習記憶能力,結(jié)果顯示氟處理組小鼠的學習記憶能力受到顯著影響,潛伏期顯著延長,并且穿過目標象限次數(shù)減少。HE染色觀察到氟處理組大腦皮層錐體細胞數(shù)量減少,膠質(zhì)細胞核皺縮和碎裂。氟暴露組小鼠大腦皮質(zhì)MAP2、SYP和Dbn的mRNA和蛋白表達水平均不同程度受到抑制,谷氨酸受體蛋白的表達也出現(xiàn)下降趨勢（P＞0.05）。推斷,氟抑制了骨架蛋白和突觸相關蛋白表達,繼而影響中樞神經(jīng)系... 

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
第一章 文獻綜述
    1 氟對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響
        1.0 氟污染現(xiàn)狀
        1.1 氟對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病理學損傷
        1.2 氟對智力發(fā)育的影響
    2 氟中毒的致病機理
        2.1 氟影響自由基生成和氧化應激
        2.2 氟引起細胞凋亡的發(fā)生
        2.3 其它元素對氟中毒效應的影響
    3 細胞骨架在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用
        3.1 細胞骨架的組成與功能
        3.2 細胞骨架在神經(jīng)細胞功能發(fā)揮中的作用
        3.3 細胞骨架裝配對神經(jīng)細胞功能的影響
    4 氟中毒與信號通路的關系
        4.1 RhoA信號通路
        4.2 氟中毒與其他信號通路的關系
    5 目前研究存在的問題與本研究的意義
    參考文獻
第二章 氟化鈉對子代小鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞骨架及突觸相關蛋白表達的影響
    1 試驗材料
        1.1 試驗試劑
        1.2 儀器設備
        1.3 試驗動物
        1.4 取材方法
    2 試驗方法
        2.1 子代小鼠學習記憶能力檢測
        2.2 病理組織學染色
        2.3 Real-time PCR檢測基因表達變化
        2.4 Western blot檢測蛋白表達量的變化
        2.5 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 氟中毒對子代小鼠腦重/體重的影響
        3.2 氟中毒對子代小鼠學習記憶能力的影響
        3.3 氟暴露子代小鼠大腦皮層病理學變化
        3.4 氟中毒對子代小鼠大腦MAP2表達量的影響
        3.5 氟中毒對子代小鼠大腦SYP和Dbn表達量的影響
        3.6 氟中毒對子代小鼠大腦谷氨酸受體蛋白表達量的影響
    4 討論
    參考文獻
第三章 氟化鈉對神經(jīng)細胞骨架損傷及神經(jīng)信號傳遞的影響
    1 試驗材料
        1.1 試驗試劑
        1.2 儀器設備
        1.3 細胞培養(yǎng)
    2 試驗方法
        2.1 氟暴露對神經(jīng)細胞形態(tài)的影響
        2.2 MTT法檢測細胞存活率
        2.3 氟對神經(jīng)細胞膜通透性的影響
        2.4 神經(jīng)細胞F-actin染色
        2.5 細胞超微結(jié)構(gòu)的變化
        2.6 Western blot檢測MAP2和SYP蛋白的表達
        2.7 谷氨酸的測定
        2.8 谷氨酸受體的表達
        2.9 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 細胞形態(tài)學觀察
        3.2 NaF對神經(jīng)細胞存活率和細胞膜通透性的影響
        3.3 NaF對細胞骨架的影響
        3.4 NaF對神經(jīng)細胞超微結(jié)構(gòu)的影響
        3.5 NaF對神經(jīng)細胞MAP2和SYP蛋白表達量的影響
        3.6 NaF對谷氨酸及其受體蛋白的影響
    4 討論
    參考文獻
第四章 氟化鈉對神經(jīng)細胞RhoA/ROCK信號通路的影響
    1 試驗材料
        1.1 試驗試劑及配方
        1.2 細胞培養(yǎng)
    2 試驗方法
        2.1 酵母雙雜交篩選MAP2互作蛋白
        2.2 神經(jīng)細胞骨架染色
        2.3 氟暴露對神經(jīng)細胞微管相關蛋白Tau mRNA表達的影響
        2.4 氟暴露對神經(jīng)細胞RhoA/ROCK信號通路相關基因轉(zhuǎn)錄水平的變化
        2.5 氟暴露對神經(jīng)細胞Tau蛋白表達的影響
        2.6 氟暴露對神經(jīng)細胞RhoA/ROCK信號通路相關蛋白的影響
        2.7 Y-27632對神經(jīng)細胞形態(tài)的影響
        2.8 Y-27632對神經(jīng)細胞存活率的影響
        2.9 Y-27632對神經(jīng)細胞RhoA/ROCK信號通路的影響
        2.10 Y-27632對神經(jīng)細胞骨架相關蛋白表達的影響
        2.11 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 MAP2互作蛋白的篩選結(jié)果
        3.2 氟暴露對神經(jīng)細胞骨架的影響
        3.3 氟暴露對神經(jīng)細胞Tau蛋白表達的影響
        3.4 氟暴露對大腦皮層神經(jīng)元中Tau蛋白的表達的影響
        3.5 氟激活了神經(jīng)細胞RhoA/ROCK信號通路
        3.6 氟暴露子代小鼠大腦皮層神經(jīng)元中RhoA/ROCK信號通路的激活
        3.7 Y-27632對神經(jīng)細胞形態(tài)學的影響
        3.8 Y-27632能緩解氟對神經(jīng)細胞存活率的抑制作用
        3.9 Y-27632對神經(jīng)細胞RhoA/ROCK信號通路的抑制作用
        3.10 抑制RhoA/ROCK信號通路對細胞骨架相關蛋白表達的影響
    4 討論
    參考文獻
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【參考文獻】：
期刊論文
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