在HIV感染早期,隨著病毒的大量復(fù)制,不僅輔助性T細(xì)胞數(shù)據(jù)急劇下降,而且B細(xì)胞也出現(xiàn)數(shù)量下降和功能損傷。有研究指出,艾滋病毒感染早期B細(xì)胞的狀態(tài)可影響感染后期機(jī)體的免疫應(yīng)答,可見,研究感染早期B細(xì)胞的免疫活動對理解機(jī)體的免疫保護(hù)機(jī)制很重要。但目前有關(guān)HIV感染早期B細(xì)胞的損傷機(jī)制并不十分清楚。miRNA是調(diào)控細(xì)胞生命活動的新層次,因此,從miRNA角度分析有助于為理解B細(xì)胞功能受損機(jī)制提供線索。考慮到HIV感染早期患者的病例數(shù)量極少,使用模型動物為研究提供了便利。SIV感染的獼猴模型具有與HIV-1患者類似的臨床表型,是目前研究艾滋病發(fā)病機(jī)制及其疫苗和藥物藥效評價的最佳動物模型。鑒于目前有關(guān)獼猴miRNA的特征以及有關(guān)獼猴miRNA調(diào)控SIV復(fù)制的研究并不多見,本研究首先運(yùn)用同源搜索和RNA測序相結(jié)合的方法,分析獼猴基因組中保守miRNA的種類和基因分布特征,并對獼猴miRNA與人miRNA進(jìn)行比較,探索miRNA基因的進(jìn)化規(guī)律。本研究在獼猴中共鑒定了1558條保守miRNA基因,其中1413條在食蟹猴和恒河猴基因組中均保守存在。有1083條和1150條人類miRNA前體序列分別在食蟹... 

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 艾滋病的現(xiàn)狀與治療瓶頸
    1.2 免疫系統(tǒng)與艾滋病
    1.3 miRNA與艾滋病
    1.4 艾滋病實(shí)驗動物模型
        1.4.1 SIV感染獼猴實(shí)驗動物模型
        1.4.2 獼猴miRNA的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的與意義
第二章 獼猴miRNA的鑒定與分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗樣本
        2.2.2 實(shí)驗試劑與耗材
        2.2.3 實(shí)驗儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗方法
        2.3.1 獼猴外周血的采集
        2.3.2 獼猴RNA的提取
        2.3.3 獼猴小RNA文庫的構(gòu)建
        2.3.4 原始數(shù)據(jù)處理與比對分析
        2.3.5 獼猴miRNA基因的同源搜索
        2.3.6 獼猴miRNA基因定位分析
        2.3.7 獼猴miRNA相對表達(dá)量與進(jìn)化年齡相關(guān)性分析
        2.3.8 miRNA靶基因分析
        2.3.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 小RNA測序數(shù)據(jù)的分類注釋
        2.4.2 食蟹猴外周血miRNA表達(dá)譜分析
        2.4.3 獼猴miRNA基因的同源搜索
        2.4.4 獼猴miRNA基因定位分析
        2.4.5 獼猴miRNA相對表達(dá)量與進(jìn)化年齡的相關(guān)性分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 SIV感染恒河猴B細(xì)胞mi RNA表達(dá)譜分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗材料與設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗動物
        3.2.2 實(shí)驗試劑與耗材
        3.2.3 實(shí)驗儀器設(shè)備
    3.3 實(shí)驗方法
        3.3.1 SIV感染的中國恒河猴PBMC的采集
        3.3.2 SIV感染的中國恒河猴B細(xì)胞分選
        3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測B細(xì)胞
        3.3.4 SIV感染的中國恒河猴B細(xì)胞RNA的提取
        3.3.5 SIV感染的中國恒河猴小RNA文庫的構(gòu)建
        3.3.6 原始數(shù)據(jù)處理與比對分析
        3.3.7 SIV感染的中國恒河猴B細(xì)胞差異表達(dá)mi RNA的篩選
        3.3.8 差異表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測與分析
        3.3.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 SIV感染恒河猴血液指標(biāo)分析
        3.4.2 B細(xì)胞小RNA測序數(shù)據(jù)的分類注釋
        3.4.3 SIV感染后B細(xì)胞miRNA表達(dá)譜分析
        3.4.4 差異表達(dá)miRNA靶基因分析
        3.4.5 差異表達(dá)miRNA功能預(yù)測
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]HIV-1感染者血漿microRNA分布變化研究[D]. 王宇歌.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2012



本文編號：3684871